动物细胞融合与单克隆抗体上课课堂PPT

1、.1.2 从母羊甲的体细胞中取出细胞核，注入从母羊甲的体细胞中取出细胞核，注入到母羊乙的去核卵母细胞中，融合后的到母羊乙的去核卵母细胞中，融合后的细胞经卵裂形成早期胚胎，再将胚胎移细胞经卵裂形成早期胚胎，再将胚胎移到另一只母羊丙的子宫内，出生的小羊到另一只母羊丙的子宫内，出生的小羊大多数性状大多数性状 a. 难以预测难以预测 b. 像甲像甲 c. 像乙像乙 d. 像丙像丙 练一练.32 .2 .下列有关克隆的叙述，不正确的是下列有关克隆的叙述，不正确的是a.a.生物体通过体细胞进行的无性繁殖生物体通过体细胞进行的无性繁殖 b.b.将某种瘤细胞体外培养繁殖成大量细胞将某种瘤细胞体外培养繁殖成大量

2、细胞c.c.扦插和嫁接实质上也是克隆扦插和嫁接实质上也是克隆 d.d.将鸡的某个将鸡的某个dnadna片段整合到小鼠的片段整合到小鼠的dnadna中中练一练.4 20022002年年月日，月日，两场筹备了两场筹备了1010年的年的“太空婚礼太空婚礼”首次在神舟四号飞船上举行，首次在神舟四号飞船上举行，植物植物细胞细胞“新人新人”黄花烟草黄花烟草和和革新一号烟草革新一号烟草叶肉细叶肉细胞胞原生质体原生质体，动物细胞动物细胞“新人新人”是小鼠是小鼠b b淋巴细淋巴细胞胞和和骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞，两批新人同时在，两批新人同时在 “产房产房”电融合仪内孕育新生命。一段时间后，我国首批电融合仪内孕育新生

3、命。一段时间后，我国首批”太空娃娃太空娃娃”终于顺利诞生。终于顺利诞生。对照实验结果表明，对照实验结果表明，细胞融合率大大提高。细胞融合率大大提高。sts“太空婚礼太空婚礼”.5神舟放飞强国梦神舟放飞强国梦.6 植物体细胞杂交技术植物体细胞杂交技术动物细胞融合技术动物细胞融合技术.7(1)(1)(2)(3)(4)(5)植物体细胞杂交过程示意图.8“太空婚礼太空婚礼”植物科研项目计划书植物科研项目计划书细胞膜的流动性、细胞的全能性细胞膜的流动性、细胞的全能性酶解法去壁酶解法去壁物理法化学法物理法化学法原生质体的制备原生质体的制备原生质体的融合原生质体的融合与筛选与筛选杂种细胞的形成与培养杂种细胞

4、的形成与培养杂种植株的鉴定与筛选杂种植株的鉴定与筛选克服远缘杂交不亲和获得具优良克服远缘杂交不亲和获得具优良性状的杂种植株性状的杂种植株.9同核体同核体同核体同核体异核体（杂交细胞）异核体（杂交细胞）人工诱导人工诱导还有还有3个个3个以上细胞的融合个以上细胞的融合-.10物理法物理法 的融合效率较的融合效率较高高,且对细胞且对细胞（原生质（原生质体）体）的伤害小的伤害小,易操作、易操作、控制和观察。控制和观察。太空中处于失重状态，太空中处于失重状态，不同种细胞不同种细胞（原生质体）（原生质体）更容易亲近；更容易亲近；为什么在太空中细胞为什么在太空中细胞（原生质体）融合率会（原生质体）融合率会大

5、大上升？为什么选用大大上升？为什么选用物理法诱导？物理法诱导？.11请同学们阅读课本请同学们阅读课本p52动物细胞融合内容动物细胞融合内容问题：问题：什么是什么是动物细胞融合？它相当动物细胞融合？它相当于植物体细胞杂交过程的哪一步？于植物体细胞杂交过程的哪一步？它它们的们的过程、基本原理、诱导融合方法过程、基本原理、诱导融合方法和意义是否相同？和意义是否相同？ .121.11.1动物细胞融合过程、原理与诱导方法动物细胞融合过程、原理与诱导方法 为什么灭活的为什么灭活的病毒能作诱导剂病毒能作诱导剂？灭活丧失感染性灭活丧失感染性保留融合活性保留融合活性.13鼠鼠b淋巴细胞淋巴细胞鼠骨髓瘤细胞鼠骨髓

6、瘤细胞人工诱导人工诱导1.21.2动物动物细胞融合的概念细胞融合的概念杂交瘤细胞杂交瘤细胞 动物细胞融合（动物细胞融合（技术技术）：是指）：是指（在一定的条件下在一定的条件下）两个或多个细）两个或多个细胞融合形成一个单核细胞的过程。胞融合形成一个单核细胞的过程。.141.31.3动物动物细胞融合技术的意义和应用细胞融合技术的意义和应用.15问题：问题：抗体由什么抗体由什么细胞产生？其化学细胞产生？其化学本质是什么？与抗本质是什么？与抗原作用的特点？主原作用的特点？主要分布在哪里？要分布在哪里？2.1单克隆抗体的概念单克隆抗体的概念.16 一个天然抗原物质可有多种和多个决定簇一个天然抗原物质可有

7、多种和多个决定簇。教材中所。教材中所说的抗原分子刺激淋巴细胞，说的也就是说的抗原分子刺激淋巴细胞，说的也就是抗原决定簇抗原决定簇刺刺激激b b淋巴细胞，使其分裂分化出淋巴细胞，使其分裂分化出特异性的效应特异性的效应b b细胞细胞，分分泌泌特异性抗体。特异性抗体。.17抗体的传统生产方法抗体的传统生产方法从从血血清清中中分分离离抗抗体体该法制备抗体的特点：该法制备抗体的特点： 产量低、纯度低，且抗产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。体的特异性差、灵敏度低。多多种种效效应应b细细胞胞动动物物体体内内多多种种抗抗体体抗抗原原 .18读下面一段文字资料，读下面一段文字资料，找出单克隆抗体的概念

8、找出单克隆抗体的概念 人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的b b细胞细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个b b细胞只细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个单一抗体，必须用单个b b细胞进行无性繁殖，即克隆。细胞进行无性繁殖，即克隆。2.1单克隆抗体的概念单克隆抗体的概念 单单: : 单个细胞单个细胞 克隆克隆: : 无性繁殖无性繁殖 单克隆单克隆抗体抗体: :单个细胞克隆产生的单个细胞克隆产生的化

9、学性质单一化学性质单一特异性强特异性强的抗体的抗体.19提示提示1 1：对：对b b细胞进行细胞培养可行吗？细胞进行细胞培养可行吗？提示提示2 2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？提示提示3 3：从诱变育种、基因工程、细胞工程等从诱变育种、基因工程、细胞工程等角度有哪些可能的设计思路？角度有哪些可能的设计思路？问题：问题：如何大量生产单克隆抗体？如何大量生产单克隆抗体？2.2单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备.20一个一个b b淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞杂交瘤细胞动物细胞培

10、养技术动物细胞培养技术设计方案：设计方案：动物细胞融合技术动物细胞融合技术单克隆单克隆抗体抗体 既能产生特异性抗体，既能产生特异性抗体， 又能大量繁殖的细胞又能大量繁殖的细胞.21 实验目的实验目的: :制备单克隆抗体制备单克隆抗体. . 实验原理：实验原理： 实验过程：实验过程：.222.2单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备 看书上看书上53页图，分组讨论，单抗制备过程分哪几步？页图，分组讨论，单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？字母按正确顺序连接起来。顺序是？ .23描述单克隆描

11、述单克隆抗体制备过抗体制备过程步骤程步骤.24注射抗原注射抗原b b淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞融合融合多种杂多种杂交细胞交细胞选择性培养基选择性培养基 筛选筛选1 1专一抗专一抗体检测体检测克隆化克隆化单克隆单克隆抗体抗体有限稀释法培养有限稀释法培养 筛选筛选2 21.注射抗原的目的注射抗原的目的是什么？是什么？.25注射抗原注射抗原b b淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞融合融合多种杂多种杂交细胞交细胞选择性培养基选择性培养基 筛选筛选1 1专一抗专一抗体检测体检测克隆化克隆化单克隆单克隆抗体抗体有限稀释法培养有限稀释法培养 筛选筛选2 22.诱导细胞融合的诱导细胞融合的手段有哪

12、些？手段有哪些？.26注射抗原注射抗原b b淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞融合融合多种杂多种杂交细胞交细胞选择性培养基选择性培养基 筛选筛选1 1专一抗专一抗体检测体检测克隆化克隆化单克隆单克隆抗体抗体有限稀释法培养有限稀释法培养 筛选筛选2 23.若细胞两两融合后，若细胞两两融合后，有几种融合情况？有几种融合情况？.27注射抗原注射抗原b b淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞融合融合多种杂多种杂交细胞交细胞选择性培养基选择性培养基 筛选筛选1 1专一抗专一抗体检测体检测克隆化克隆化单克隆单克隆抗体抗体有限稀释法培养有限稀释法培养 筛选筛选2 24.第一次筛选出的杂交瘤第一次筛选出的杂

13、交瘤细胞为何需进行克隆化培细胞为何需进行克隆化培养和专一抗体检测？养和专一抗体检测？.285.5.实际操作中如何经过两次筛选获得能产生特异实际操作中如何经过两次筛选获得能产生特异性抗体的杂交瘤细胞？性抗体的杂交瘤细胞？ .29有限稀释法有限稀释法稀释多次稀释多次稀释稀释将培养皿孔内的上清液取出，检测抗体。常用的方法将培养皿孔内的上清液取出，检测抗体。常用的方法有：酶联免疫吸附试验和免疫荧光测定。有：酶联免疫吸附试验和免疫荧光测定。.30问题：问题：单克隆抗体的突出优点是什么？单克隆抗体的突出优点是什么？特异性强、灵敏度高特异性强、灵敏度高 克隆单个杂交瘤细胞，可制备克隆单个杂交瘤细胞，可制备抗

14、一种抗原抗一种抗原决定簇的决定簇的特异单克隆抗体。特异单克隆抗体。.312.3单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用诊断试剂诊断试剂最广泛应用最广泛应用准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速.32 (“生物导弹生物导弹” 单抗导向，药物为弹头单抗导向，药物为弹头).33现在你能主持现在你能主持“太空婚礼太空婚礼”动物科研项目了吗？动物科研项目了吗？细胞膜的流动性、细胞的全能性细胞膜的流动性、细胞的全能性膜的流动性、细胞膜的流动性、细胞增殖增殖酶解法去壁酶解法去壁小鼠免疫处理小鼠免疫处理、细胞分散、细胞分散物理法化学法物理法化学法物理、化学、生物法物理、化学、生物法原生质体的制备原生质体的制备融合亲本细胞的准备融合亲本细胞的准备原生质体的融合原生质体的融合与筛选与筛选动物细胞融合与动物细胞融合与两次筛选两次筛选杂种细胞的形成与培养杂种细胞的形成与培养产特定抗体的杂交瘤细胞培养产特