folin酚试剂法医学第六实验室

1、南方德科丈醪生物化学实验报告姓 名: 学 号: 专业年级:组 另 I I:生物化学与分子生物学实验教学中心2 2012012 医学第六实验室实验室规则1实验前应认真预习实验指导，明确实验目的和要求，写出预实验报告。2进入实验室必须穿白大衣。 严格遵守实验课纪律， 不得无故迟到或早退。 不得高声说话。严禁拿实验器具开玩笑。实验室内禁止吸烟、用餐。3严格按操作规程进行实验。实验过程中自己不能解决或决定的问题，切 勿盲目处理，应及时请教指导老师。4严格按操作规程使用仪器，凡不熟悉操作方法的仪器不得随意动用，对 贵重的精密仪器必须先熟知使用方法， 才能开始使用； 仪器发生故障， 应立即关 闭电源并报告

2、老师，不得擅自拆修。5取用试剂时必须“随开随盖” ，“盖随瓶走”，即用毕立即盖好放回原处， 切忌“张冠李戴”，避免污染。6爱护公物，节约水、电、试剂，遵守损坏仪器报告、登记、赔偿制度。7注意水、电、试剂的使用安全。使用易燃易爆物品时应远离火源。用试 管加热时，管口不准对人。严防强酸强碱及有毒物质吸入口内或溅到别人身上。任何时候不得将强酸、强碱、高温、有毒物质抛洒在实验台上。8废纸及其它固体废物严禁倒入水槽，应倒到垃圾桶内。废弃液体如为强 酸强碱，必须事先用水稀释，方可倒入水槽内，并放水冲走。9以实事求是的科学态度如实记录实验结果，仔细分析，做出客观结论。实验失败，须认真查找原因，而不能任意涂改

3、实验结果。实验完毕，认真书写实 验报告，按时上交。10实验完毕，个人应将试剂、仪器器材摆放整齐，用过的玻璃器皿应刷洗 干净归置好，方可离开实验室。值日生则要认真负责整个实验室的清洁和整理， 保持实验整洁卫生。 离开实验室前检查电源、 水源和门窗的安全等， 并严格执行 值日生登记制度。、实验报告的基本要求实验报告通过分析总结实验的结果和问题， 加深对有关理论和技术的理解与 掌握，提高分析、综合、概括问题的能力，同时也是学习撰写研究论文的过程。1实验报告应该在专用的生化实验报告本上、按上述格式要求书写。2实验报告的前三部分实验原理、实验材料（包括实验样品、主要试 剂、主要仪器与器材）、实验步骤（包

4、括实验流程与操作步骤）要求在实验课 前预习后撰写， 作为实验预习报告的内容。 预习时也要考虑并设计好相应实验记 录的表格。3每项内容的基本要求（1）实验原理：简明扼要地写出实验的原理，涉及化学反应时用化学反应 方程式表示。（2）实验材料：应包括各种来源的生物样品及试剂和主要仪器。说明化学 试剂时要避免使用未被普遍接受的商品名和俗名。试剂要标清所用的浓度。（3）实验步骤：描述要简洁，不能照抄实验讲义，可以采用工艺流程图的 方式或自行设计的表格来表示， 但对实验条件和操作的关键环节应写清楚， 以便 他人重复。（4）实验记录：包括主要实验条件、实验中观察到的现象及实验中的原始 数据。（5）结果（定量

5、实验包括计算） ：应把所得的实验结果（如观察现象）和数 据进行整理、归纳、分析、对比，尽量用图表的形式概括实验的结果，如实验组 与对照组实验结果的比较表等（有时对实验结果还可附以必要的说明）。（6）讨论：不应是实验结果的重述，而是以结果为基础的逻辑推论。如对 定性实验，在分析实验结果的基础上应有中肯的结论。 还可以包括关于实验方法、 操作技术和有关实验的一些问题， 对实验异常结果的分析和评论， 对于实验设计 的认识、体会和建议，对实验课的改进意见等。（7）结论：一般实验要有结论，结论要简单扼要，说明本次实验所获得的 结果。三、实验报告的评分标准（百分制）1实验预习报告内容（30分）学生进入实验

6、室前应预习实验，并书写预习报告。实验预习报告应包括以下三部分：实验原理（1010 分）：要求以自己的语言归纳要点；实验材料（5 5 分）：包括样品、试剂及仪器。只列出主要仪器、试剂（常规材料不列）；实验方法（1515 分）：包括流程或路线、操作步骤，要以流程图、 表格式给出要点，简明扼要。依据各部分内容是否完整、清楚、简明等，分以下三个等级给分。优秀合格不合格3025302524182418 分170170 分优秀：项目完整，能反映实验者的加工、整理、提炼。合格：较完整，有一定整理，但不够精炼。不合格：不完整、缺项，大段文字，完全照抄教材，记流水账。实验预习报告不合格者，不允许进行实验。该实验

7、应重新预约，待实验室安排时间后方可进行实验。2.实验记录内容（20分）实验记录是实验教学、科学研究的重要环节之一，必须培养严谨的科学作风。实验记录的主要内容包括以下三方面：主要实验条件（如材料的来源、质量；试剂的规格、用量、浓度；实验时间、操作要点中的技巧、失误等，以便总结实验时进行核对和作为查找成败原因的参考依据）：实验中观察到的现象（如加入试剂后溶液颜色的变化）：原始实验数据：设计实验数据表格（注意三线表格式），准确记录实验中测得的原始数据。记录测量值时，要根据仪器的 精确度准确记录有效数字（如吸光值为0.0500.050,不应写成 0.050.05）,注意有效数字的位数。实验记录应在实验

8、过程中书写；应该用钢笔或者圆珠笔记录，不能用铅笔。记录不可擦抹和涂改，写错时可以准确划去重记。记录数据时请教师审核并签名。实验记录分以下三个等级给分。优秀合格不合格2017201716131613 分120120 分优秀：如实详细地记录了实验条件、实验中观察到的现象、结果及实验中的原始数据（如三次 测定的吸光度值）等；实验记录用钢笔或者圆珠笔记录，没有抹擦和涂改迹象。书写准确，表格规 范（三线表）。有教师的签字审核。合格：记录了主要实验条件，但不详细、凌乱；实验中观察到的现象不细致；原始数据无涂改 迹象，但不规范。有教师的签字审核。不合格：记录不完整，有遗漏；原始数据有抹擦和涂改迹象、捏造数据

9、（以0 0 分计）；图、表格形式错误；用铅笔记录原始数据；无教师的签字审核。若记录的结果有怀疑、遗漏、丢失，必须重做实验，培养严谨的科学作风。3.结果与讨论（45分）（1 1）数据处理（5 5 分）对实验中所测得的一系列数值，要选择合适的处理方法进行整理和分析。数据处理时，要根据 计算公式正确书写中间计算过程或推导过程及结果，得出最终实验结果。要注意有效数字的位数、 单位（国际单位制）。经过统计处理的数据要以 X X SDSD 表示。可分成以下三个等级给分。优秀合格不合格5 5 分4 4 分3030 分优秀：处理方法合理，中间过程清楚，数据格式单位规范。合格：处理方法较合理，有中间计算过程；数

10、据格式单位较规范。不合格：处理方法不当；无中间过程；有效数字的位数、单位不规范。（2 2）结果（2020 分）实验结果部分应把所观察到的现象和处理的最终数据进行归纳、分析、比对，以列表法或作图 法来表示。同时对结果还可附以必要的说明。要注意图表的规范：表格要有编号、标题；表格中数据要有单位（通常列在每一列顶端的第一 行或每一行左端的第一列）。图也要有编号、标题，标注在图的下方；直角坐标图的纵轴和横轴要标 出方向、名称、单位和长度单位；电泳图谱和层析图谱等要标明正、负极方向及分离出的区带、色 带或色斑的组分或成分。电泳结果还要标记泳道，并在图题下给出泳道的注释；要标出分子量标准 的各条带的大小。

11、并且注意需要结合图表对结果进行较详细的解释说明。可分成以下三个等级给分。优秀合格不合格2017201716131613 分120120 分优秀：实验结果有归纳、解释说明，结果准确，格式规范。合格：堆砌实验现象、数据，解释说明少。不合格：最终实验结果错误且无解释说明，图表、数字不规范。（3 3）讨论（2020 分）讨论应围绕实验结果进行，不是实验结果的重述，而是以实验结果为基础的逻辑推论，基本内 容包括：用已有的专业知识理论对实验结果进行讨论，从理论上对实验结果的各种资料、数据、 现象等进行综合分析、解释，说明实验结果，重点阐述实验中出现的一般规律与特殊性规律之间的以全英文书写实验报告视情况加5

12、10510 分。关系；实验结果提示了哪些新问题，指出结果与结论的理论意义及其大小；对实践的指导与应用价值；实验中遇到的问题、差错和教训，与预想不一致的原因，有何待解决的方法，提出在今 后的实验中需要注意和改进的地方；实验目的是否达到。同时能结合查阅的其他文献等资料进行讨论，有独到的见解。在实验结果和理论分析的基础上，经过推理，归纳规律得出结论。结论要严谨、精炼，表达要准确，与实验目的呼应。也分三个等级 给分。优秀合格不合格2017201716131613 分120120 分优秀：分析实验结果的问题与经验；分析实验设计的优劣；能提出实验技术、方法的改进意见; 能结合自己查阅的其他资料来讨论，有自

13、己独到的见解；有结论。合格：仅针对实验结果进行讨论，有一定自己的见解。不合格：将讨论写成注意事项分析或回答思考题等，与实验结果无关。4.格式与版面（5分）按照实验报告的书写格式、版面是否整洁、工整，分三个等级给分。优秀合格不合格5 5 分4 4 分3030 分优秀：实验报告字体工整，版面整洁。 合格：实验报告字体较工整，版面较整洁。 不合格：实验报告字体潦草，版面凌乱。5.加分（510分）:Introduction to Biochemistry ExperimentBiochemistry experiment is a preclinical curriculum of omni-spec

14、ialties in biomedicine and anexperimental curriculum for going with biochemistry teaching. Its task is to help students to understandand master the basic technical principles and methods in biochemistry, to possessthe abilities ofanalyzing problems and working out solutions independently. By learnin

15、g this curriculum, the studentsshould understand the basic experimental principles of spectrophotometry，chromatography,electrophoresis and centrifuge,et al.，master the basic technical skills commonly used with theseprinciples and possessthe abilities to apply the skills systematically and to optimiz

16、e the experimentconditions. The goal of biochemistry experiment is to make the students strengthen their grasp of thebiochemistry theories and to integrate what they have learned with scientific research and clinicalapplication.There are 9 experiments that represent most important areas of biochemis

17、try including characterization ofproteins and nucleic acid by electrophoresis and spectroscopic or chromatographic analysis. Theseexperiments are essential for a typical one-semester course and are to be revised and updated whennecessary. New experiments will be added to this list in the future to c

18、over more topics of biochemistryand to reflect the many advances in biochemistry.Biochemistry Laboratory Rules1Pre-Laboratory PreparationAll students must prepare BEFORE ARRIVING IN THE LABORATORY . Theexperiments are designed so that they can be carried owith proper advanee planning-within thefour-

19、hour laboratory periods. It is expected that students should have a fundamental understanding ofthe theory and practices pertaining to the experimebnetfore entering the laboratory to conduct theseexperiments.Biochemical experiments often employ toxic chemicals . For the health and safety of all stud

20、ents, theexperimental protocols must be studied and the dayshoulsd abcetivitiesplanned in advance. If it becomes obvious that a student is ill-prepared, he or she will not be permittedto continue the experiment.2Safety Precautions in the Biochemistry LaboratoryAll INJURIES, no matter how minor, shou

21、ld be reported to the instructor IMMEDIATELY. If you haveany questions regarding the safe handling of any biochemical, consult your instructor.3Strictly follow the experimental procedures.Turn to instructors immediately for help once the laboratory instruments dontwork. DONT try to fixthe breakdown

22、by yourself. Proper compensation for loss because of your own fault will be demanded.4Disposal of SolutionsIn most cases the solutions used during the laboratory can be disposed of as directed by laboratorypersonnel at the end of the period. Any volatile organic solvents should be placed in the hood

23、 asdirected. Laboratory personnel will then dispose of these solvents.5Solid trashes including waste papers are prohibited to discard into the sink.6All the glassware should be cleaned immediately after use. And all the reagent bottles and instrumentsshould be placed neatly after use.7An experiment

24、report should be submitted to the Professor and/or TAs in time.Laboratory Report1Although students will work in pairs for all experiments, each student must turn in an individuallaboratory report, written by himself or herself. These reports should beclearly written in ink, typed, or printed and be

25、clear and legible. If mistakes are made, neatly crossthem out and enter the corrections nearby. Reports should be written in the third person (e.g., do notuse“I”or ST“AwPeL”E ).a Title Page to the top of the reportand STAPLE the accompanying graphs, tables, and laboratory notebook sheets to the back

26、. If thereport is not clearly presented, the instructor may return the report without grading it.2Each laboratory report should consist of:a. Title PageA title page for each experiment is required and should state the title of the experiment, the nameof the student, the dates of the laboratory perio

27、ds covered, the names of the laboratory partners,and the date that the laboratory report is due.b. ObjectivesStatement of the point of the experiment - in no more than two sentences.c. ProceduresDO NOT recapitulate the laboratory protocol. Write in you OWN words. A clear flowchart of theprocedures i

28、s recommended.d. ResultsThis section should summarize your observations presented in the form of graphs, calculations,tables, etc.e. DiscussionEvaluate your data. Explain what you observed and also why you think the data were as observed.Do not restate procedures! List possible sites of error . When

29、ever possible demonstrate yourunderstanding of the theory behind the experiment. Support your results (e.g.:“Using the linearportion of the Absorbance vs. Concentration graph to calculate the slope, it was determined that.”) (Limited toonly one page per experiment for experiments 1 - 6 and four page

30、s for experiment 7-9).3If any laboratory report is not completed and turned in by the end of the quarter, the student maybereceive an Incomplete for the course at the discretion of the instructors; alternatively a“zero”forthe missing laboratory report will be recorded and the final gradedetermined a

31、ccordingly.实验名称(Title ofExperimetn)Folin-酚试剂法测定蛋白质含量实验日期(Date ofExperiment)2013-10-18实验地点（Lab No.）第六实验室合作者(Partner)指导老师(Instructor)总分仃otal Score)教师签名(Signature)批改日期（Date）【实验报告第一部分（预习报告内容）：实验原理、实验材料（包括实验样品、主要试剂、主要仪器与器材）、实验步骤（包括实验流程、操作步骤和注意事项）；评分（满分30分）：XX1、实验原理：（1）蛋白质分子含有大量彼此相连的肽键（-CO-NH-），同样能在碱性条 件下

32、与Cu2+发生双缩脲反应，生成的紫红色络合物（蛋白质-Cu2+复合物）。且在540nm处的吸光度与蛋白质的含量在10120g/L范围内有良好的线性关系。蛋白 质零含 Jtt 键化合物紫红色绪合物CB（2）Folin-酚试剂在碱性条件下极不稳定，其磷钼酸盐-磷钨酸盐易被酚类化合物还原而呈蓝色反应（钼蓝和钨蓝的混合物）。由于蛋白质中含有带酚羟基的酪氨酸（Tyr ），故匸 wRCHCQ-OHNHR HRYHCHNHCn2+HeRc/=C)有此显色反应。即蛋白质-Cu2+复合物中所含的酪氨酸残基还原酚试剂中的磷钼酸和 磷钨酸，生成蓝色的化合物。（3）在一定浓度范围内，蓝色的深浅度与蛋白质浓度呈线性关系

33、，故与同样处理的蛋白质标准液比色即可求出蛋白质的含量。 即根据预先绘制的标准曲线求出未知样品中 蛋白质的含量。2、实验材料：样品健康人血清（正常人血清蛋白质含量：6080 g/L）试剂1.牛血清白蛋白标准液（200卩g/ml）2.碱性硫酸铜溶液（当日有效）3.Fol in-酚试剂仪器与器材1.V-1100分光光度计2.恒温水浴箱3.试管6支、试管架4.加样枪、加样枪架3、实验步骤：Folin-酚试剂法测定蛋白质实验流程如表所示（2）双缩尿反应向各管内分别加入碱性硫酸铜溶液2ml，混匀，室温放置10mi n(3) Folin-酚再向各管内加入Folin-酚试剂0.20ml, 2s内迅速混匀！40

34、C水浴放显色反应置10min后，冷却至室温（4）比色测疋以500nm波长比色，用1号管作空白，读取各管吸光度4、注意事项：（1）Folin-酚试剂在酸性条件下较稳定，而碱性硫酸铜试剂是在碱性条件 下与蛋白质作用生成碱性的铜-蛋白质溶液。 故当Folin-酚试剂加到碱性的铜-蛋白质溶 液中后，必须立即混匀（加一管混匀一管），使还原反应发生在磷钼酸-磷钨酸试剂被破 坏之前（2）因Lowry反应的显色随时间不断加深，因此各项操作必须精确控制时间。即第1支试管加入2.0mL碱性硫酸铜试剂后，开始计时，1分钟后，第2支试管加 入2.0mL碱性硫酸铜试剂，2分钟后加第3支试管，以此类推。全部试管加完碱性硫

35、酸铜试剂后若已到10分钟，则第1支试管可立即加入0.20mL Folin-酚试剂，1分钟后第2支试管加入0.20mL Folin-酚试剂，2分钟后加第3支试管，以此 类推。水浴10mi n，冷却后，每一分钟测一管。（3）有关干扰物质：凡是能干扰双缩脲反应的基团以及在性质上是氨基酸 或肽的缓冲剂。此外，所测的蛋白质样品中，若含有酚类及柠檬酸，均对此反应有干扰 作用。若样品酸度较高，也许提高碳酸钠-步骤操作（1）反应体取6支试管，做好标记，按下表加入试剂，混匀系设置试剂（ml）空白管标准管样品管123456牛血清白蛋白标准液-0.20.40.60.8-样品液-0.5蒸馏水1.00.8 0.6 0.

36、4 0.20.5氢氧化钠浓度1-2倍，这样既可纠正显色后色 浅的弊病。（4）分光光度计使用的注意事项：比色杯应相匹配性，不得随意挪用；盛液达到比色杯的3/4即可，不能太满，外壁如有液体，只能用滤纸蘸去水分再用镜面纸搽 拭干净；测毕，比色液一般应倒回原试管中，计算无误后方可倒掉。【实验报告第二部分（实验记录）:主要实验条件（如材料的来源、质量；试剂的规 格、用量、浓度；实验时间、操作要点中的技巧、失误等，以便总结实验时进行核对和作为查找成败原因的参考依据）：实验中观察到的现象（如加入试剂后溶液颜色的变 化）；原始实验数据。评分（满分20分）：XX1、主要实验条件：（1）牛血清白蛋白标准液：称取牛

37、血清白蛋白粉末50mg,用O.1mol/LNaOH溶液溶解，再加蒸馏水（2） 硫酸铜溶液：Na?。溶于100ml 0.1mol/L NaOH中CuSO4.5H2O0.5g溶于100ml 35mmol/L酒石酸钾钠中使用前将两种物质按50:1混合即成。使用时需新鲜配制（3）Folin-酚试剂：溶液呈黄色（如带绿色则不能用），保存于棕色 瓶中置冷暗处备用。如配置时间较长，试剂转呈绿色，可再加液体溴数滴，煮沸15分钟。若能恢复原有颜色则可继续使用。（4）操作技巧：加试剂最好用加样枪，方便快捷，用滴定管操作较反复，也有读数误差。（5）操作失误：在第一次实验时，管未做标记，加错了试剂，后又重新标记，重新

38、开始。2、实验中观察到的现象：Folin酚试剂中的磷钼酸盐一磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸 和苯丙氨酸残基还原，产生蓝色（钼兰和钨兰的混合物） 。在一定的条件下，蓝色深度 与蛋白的量成正比。原始实验数据：500nm波长吸光度值记录测定次数500nm处各管吸光度值2345610.0830.1580.2370.3040.20920.0830.1590.2340.3040.20930.0830.1600.2340.3040.209各管平均值0.0830.1590.2350.3040.209【实验报告第三部分（结果与讨论）：结果（定量实验包括计算）：应把所得的实验结 果（如观察现象）和数据进行整理、归纳、分析、对比，尽量用图表的形式概括实验的 结果；讨论：不应是实验结果的重述，而是以结果为基础的逻辑推论。结论：简单 扼要，说明本次实验所获得的结果。（包括思考题）。评分（满分45分）:XX1、结果：（1）绘制标准曲线标准曲线C C (ug/ml)(ug/ml)从图中我们可以看到线性方程：y=0.0019x，将样品溶液的吸光度（即y值）代入方程,可得出样品浓度（即x值）计算结果：样品吸光度为A=0.209,代入方程可得X=110ug/ml血清蛋白浓度（卩g/ml）=样品蛋白质浓度x2X300=66000ug/ml=66