培养基及其制备课件

1、培养基及其制备第六章第六章 培养基及其制备培养基及其制备6 Medium and its preparation培养基及其制备提纲提纲 培养基的成分培养基的成分能源物质能源物质 碳源物质碳源物质 氮源物质氮源物质 无机盐无机盐 微量元微量元素和生长因子素和生长因子 水水 前体物质前体物质 促进剂和抑制剂促进剂和抑制剂 淀粉水解糖的制备：淀粉水解糖的制备：酸解法、酶解法、酶酸结合法酸解法、酶解法、酶酸结合法 营养物质的调节营养物质的调节 不同碳源的利用速度不同碳源的利用速度 氮源利用及与碳源利用的关系氮源利用及与碳源利用的关系 碳、氮比例的调节碳、氮比例的调节 前体的控制前体的控制 补料补料 培

2、养基的类型培养基的类型 培养基的优化举例培养基的优化举例培养基及其制备第一节、培养基的成分第一节、培养基的成分培养基及其制备培养基及其制备天然培养基天然培养基 这是一种利用动、植物或微生物体或其提取物制成的培这是一种利用动、植物或微生物体或其提取物制成的培养基，人们无法确切知道其中成分。养基，人们无法确切知道其中成分。培养基及其制备M培养基培养基(1L)： Na2HPO4 6g，KH2PO4 3g， NaCl 0.5g， NH4Cl 1g， MgSO4.7H2O 0.5g， CaCl2 0.011g，葡萄糖，葡萄糖 2-10g, pH 7.0 培养大肠杆菌常用培养基培养大肠杆菌常用培养基合成培

3、合成培养基养基培养基及其制备按培养基的成分和目的按培养基的成分和目的 1 1、 选择性培养基选择性培养基 ：就是根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化就是根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基。学、物理因素的抗性而设计的培养基。 其功能是从混合菌样本中的选取优势菌，从而提高该菌的筛其功能是从混合菌样本中的选取优势菌，从而提高该菌的筛选效率。选效率。 1)1)加富性选择培养基：加富性选择培养基： 用作加富的营养物主要是一些特殊的碳源或氮源，如甘露醇、用作加富的营养物主要是一些特殊的碳源或氮源，如甘露醇、纤维素、石蜡油、糖液等。纤维素、石蜡油、糖液等。2)2)抑制性

4、选择培养基：抑制性选择培养基： 选择性抑制剂有染料、抗生素、脱氧胆酸钠、叠氮化钠等。选择性抑制剂有染料、抗生素、脱氧胆酸钠、叠氮化钠等。 用于选择性的其他理化因素还有温度、氧、用于选择性的其他理化因素还有温度、氧、pHpH和渗透压等。和渗透压等。培养基及其制备三、按培养基的成分和目的三、按培养基的成分和目的2、 鉴别性培养基鉴别性培养基 培养基中加有能与某一菌的无色代谢培养基中加有能与某一菌的无色代谢产物产物发生显色反应的指示剂发生显色反应的指示剂，从而达到只，从而达到只须用肉眼辨别颜色就能方便的从近似菌落须用肉眼辨别颜色就能方便的从近似菌落中找出目的菌菌落的培养基。中找出目的菌菌落的培养基。

5、 最常见的鉴别性培养基是最常见的鉴别性培养基是伊红美蓝乳糖伊红美蓝乳糖培养基培养基，即，即EMB 培养基。培养基。培养基及其制备培养基的成分培养基的成分 一、能源物质一、能源物质 微生物的一切行为都需要能源微生物的一切行为都需要能源 光能自养微生物：光能光能自养微生物：光能 如：螺旋藻生产单细胞蛋白如：螺旋藻生产单细胞蛋白 化能自养微生物：氢、硫、氨、亚硝酸化能自养微生物：氢、硫、氨、亚硝酸 盐、盐、亚铁盐亚铁盐等无机物等无机物 如：细菌炼铜，铁硫杆菌如：细菌炼铜，铁硫杆菌 异养微生物：碳水化合物、石油、天然异养微生物：碳水化合物、石油、天然 气及石化产品气及石化产品工业菌种绝大多数为化能异养

6、型工业菌种绝大多数为化能异养型培养基及其制备二、碳源物质二、碳源物质 碳源物质是培养基主要成分；碳源物质是培养基主要成分； 占细胞干物质的占细胞干物质的50左右，提供能源、碳架、代谢左右，提供能源、碳架、代谢产物。产物。 碳源物质碳源物质 葡萄糖（单）：淀粉加工制备葡萄糖（单）：淀粉加工制备 蔗糖、麦芽糖、乳糖蔗糖、麦芽糖、乳糖 （双）：（双）：糖蜜、乳清糖蜜、乳清 糊精、淀粉：糊精、淀粉： 其他碳源物质：其他碳源物质： 脂类（霉菌、放线菌）：充分通氧脂类（霉菌、放线菌）：充分通氧 有机酸、醇、石油产品：有机酸、醇、石油产品：培养基及其制备谷谷 氨氨 酸酸 和和 味味 精精 生生 产产 工工艺

7、艺 就目前的状况而言，发酵工业所用的原料作以淀粉或糖质为主，而许多微生物并不能直接利用淀粉。例如，在以糖质为原料发酵生产氨基酸过程中，几乎所有的氨基酸生产菌都不能直接利用（或只能微弱地利用）淀粉和糊精。同样在酒精发酵过程中，酵母菌也不能直接利用淀粉或糊精，这些淀粉或糊精必须经过水解制成淀粉糖以后才能被酵母菌所利用。此外，在抗生素、有机酸、有机溶剂以及酶制剂发酵过程中，大都也要求对淀粉进行加工处理以提供给微生物可利用的碳源。当然有些微生物能够直接利用淀粉作原料，但这一过程必须在微生物分解出胞外淀粉酶类以后才能进行，过程非常缓慢，致使发酵过程周期过长，实际生产上无法被采用。 玉米淀粉、谷物、马铃薯

8、、木薯淀粉淀粉蓝糊精红糊精无色糊精麦芽糖葡萄糖（C6H10O5)n+nH2O n C6H12O6酸或酶淀粉水解糖的制备淀粉水解糖的制备培养基及其制备一、淀粉水解糖的制备方法 葡萄糖值葡萄糖值-DE值值 工业上用DE值（也称葡萄糖值）表示淀粉糖的糖组成。糖化液中的还原糖含量（以葡萄糖计算）占干物质的百分率 还原糖含量DE值 = 100% 干物质含量 用于制备淀粉的原料主要有薯类、玉米、小麦、大米等富含淀粉的农产品。根据原料淀粉的性质及采用的催化剂不同，淀粉水解为葡萄糖的方法有酸解法、酶解法以及酸酶结合法等三种。 培养基及其制备1、酸水解法原理、酸水解法原理 淀粉蓝糊精红糊精无色糊精麦芽糖葡萄糖水

9、解过程：水解过程中存在三大化学反应： 复合二糖 复合低聚糖 水解淀粉 葡萄糖 5-羟甲基糖醛 有机酸、有色物质132培养基及其制备酶解法是利用专一性很强的淀粉酶及糖化酶将淀粉水解为葡萄糖的方法。酶解法可分为两步：第一步，利用-淀粉酶将淀粉液化；第二步，利用糖化酶将糊精或低聚糖进一步水解转化为葡萄糖。生产上这两步分别称为液化和糖化。由于在该过程中淀粉的液化和糖化都是在酶的作用下进行的。因此酶解法又称为双酶法或多酶法。 2、酶解法、酶解法 培养基及其制备 缺点酶解法是在酶的作用下进行的，反应条件较温和，不需要耐高温高压或 而酸腐蚀的设备；酶作为催化剂的特点是专一性强，副反应少，故水解糖液纯度高，淀

10、粉转化率高；可在较高的淀粉乳浓度下水解。如酸解法一般使用10-12Bx（含18%-20%淀粉）的淀粉乳，而酶解法可用2023Bx（含34%-40%淀粉）的淀粉乳，并且可以采用粗原料。用酶解法制得的糖液较纯净、颜色浅、无苦味、质量高，有利于糖液的充分利用。 酶解法反应时间较长，设备要求较多，且酶是蛋白质，易引起糖液过滤困难。当然，随着酶制剂生产及应用技术的提高，酶解法制糖将逐渐取代酸解法制糖。 优点培养基及其制备3、酸酶结合法、酸酶结合法 酸酶结合法是集中了酸解法和酶解法制糖的优点而采用的生产方法，它又可分为： 酸酶法 酶酸法培养基及其制备酶酸结合法之一，酸酶法酶酸结合法之一，酸酶法反应原理：反

11、应原理：淀粉淀粉糊精、低聚糖糊精、低聚糖 葡萄糖葡萄糖优点：优点： 产品质量高，反应时间较短（产品质量高，反应时间较短（ 糊精、低聚糖糊精、低聚糖 葡萄糖葡萄糖优点：优点：反应时间短（反应时间短（2hrs），产品质量较好），产品质量较好对原料要求较低，淀粉乳浓度较高。对原料要求较低，淀粉乳浓度较高。 淀粉酶淀粉酶酸水解酸水解30min30min淀粉水解糖的制备淀粉水解糖的制备培养基及其制备三、氮源物质三、氮源物质 氮源物质是培养基的主要成分之一。氮源物质是培养基的主要成分之一。 提供菌体结构物质，能源（少），含氮代谢产物，补充碳源。提供菌体结构物质，能源（少），含氮代谢产物，补充碳源。 有机氮

12、源：有机氮源：豆饼粉、花生饼粉、棉子饼粉、酵豆饼粉、花生饼粉、棉子饼粉、酵 母粉、麦麸、鱼粉、玉米浆、蛋白胨、尿素等。母粉、麦麸、鱼粉、玉米浆、蛋白胨、尿素等。 成分复杂，除含蛋白质、多肽、氨基酸外，还含糖、脂、无成分复杂，除含蛋白质、多肽、氨基酸外，还含糖、脂、无机盐、维生素及其他生长因子，对菌体生长非常有利。机盐、维生素及其他生长因子，对菌体生长非常有利。 无机氮源：无机氮源：氨水、铵盐、硝酸盐氨水、铵盐、硝酸盐 被吸收、利用快，但成分单一，常作辅助氮源。被吸收、利用快，但成分单一，常作辅助氮源。培养基及其制备 品种、产地、加工方法对有机氮源质量的品种、产地、加工方法对有机氮源质量的影响影

13、响 黄豆粉：全脂黄豆粉（含油脂黄豆粉：全脂黄豆粉（含油脂18%）、低）、低脂黄豆粉（脂黄豆粉（9%以下）、脱脂黄豆粉（以下）、脱脂黄豆粉（2%以下）以下） 棉籽粉：低温提取油脂后加工品（棉籽粉：低温提取油脂后加工品（pharmamedia）、高温（）、高温（proflo） 玉米浆：玉米淀粉副产物，干玉米浆、液玉米浆：玉米淀粉副产物，干玉米浆、液态玉米浆、（国际知名品牌态玉米浆、（国际知名品牌solulys L）三、氮源物质三、氮源物质培养基及其制备三、氮源物质三、氮源物质质量不稳定，引起发酵水平波动质量不稳定，引起发酵水平波动培养基及其制备 无机氮源：铵盐、硝酸盐无机氮源：铵盐、硝酸盐 (NH

14、4)SO4 2NH3+H2SO4 NaNO3+4H2 NH3+H2O+NaOH 代谢后产生酸性物质的营养成分叫生理酸代谢后产生酸性物质的营养成分叫生理酸性物质，反之叫生理碱性物质。性物质，反之叫生理碱性物质。 注意溶液注意溶液PH变化。变化。三、氮源物质三、氮源物质培养基及其制备四、无机盐和微量元素四、无机盐和微量元素 1) 无机盐无机盐 成为菌体的组分或菌体内酶的调节剂、维成为菌体的组分或菌体内酶的调节剂、维持培养基一定的离子强度。持培养基一定的离子强度。 对微生物的作用呈浓度相关对微生物的作用呈浓度相关培养基及其制备 无机磷：无机磷： 菌体、核酸组成成分菌体、核酸组成成分 AMP，ADP，

15、以及，以及ATP合成合成 酶或中间代谢产物的修饰剂酶或中间代谢产物的修饰剂 某些酶的调节剂某些酶的调节剂 有利于糖代谢，菌体生长，但不利于代谢产有利于糖代谢，菌体生长，但不利于代谢产物合成物合成培养基及其制备铁离子铁离子 为细胞色素、细胞色素氧化酶和过氧化氢为细胞色素、细胞色素氧化酶和过氧化氢酶的组成成分。酶的组成成分。 一般不必加入。一般不必加入。 在有些品种的发酵中有害，如青霉素、四在有些品种的发酵中有害，如青霉素、四环素、麦迪霉素、柠檬酸、啤酒等。环素、麦迪霉素、柠檬酸、啤酒等。培养基及其制备钙离子钙离子 作为微生物体内酶的激活剂，碳酸钙还可以作为控制作为微生物体内酶的激活剂，碳酸钙还可

16、以作为控制发酵液发酵液pHpH的缓冲剂。的缓冲剂。镁离子镁离子 作为微生物体内酶的激活剂。作为微生物体内酶的激活剂。硫硫 为蛋白质的组成成分，有时为某些代谢产物的组成成为蛋白质的组成成分，有时为某些代谢产物的组成成分。分。钠、钾离子钠、钾离子 调节渗透压和微生物细胞的通透性，调节某些酶的催调节渗透压和微生物细胞的通透性，调节某些酶的催化活性。化活性。培养基及其制备 2) 微量元素微量元素 锌、钴、锰、铜、硼等锌、钴、锰、铜、硼等 作为酶的辅基或调节剂作为酶的辅基或调节剂 一般而言不必另外加入一般而言不必另外加入培养基及其制备l3) 无机盐及微量元素使用注意点无机盐及微量元素使用注意点A. 对于

17、其它渠道有可能带入的过多的某种无机离对于其它渠道有可能带入的过多的某种无机离子和微量元素在发酵过程中必须加以考虑。子和微量元素在发酵过程中必须加以考虑。例：铁离子例：铁离子 青霉素发酵中，铁离子的浓度要小于青霉素发酵中，铁离子的浓度要小于20g/ml20g/ml 发酵罐必须进行表面处理。发酵罐必须进行表面处理。B B、使用时注意盐的形式（、使用时注意盐的形式（pHpH的变化）的变化）培养基及其制备 从广义上讲，凡是微生物生长不可缺少的微量的有从广义上讲，凡是微生物生长不可缺少的微量的有机物质，如氨基酸、嘌呤、嘧啶、维生素等均称生机物质，如氨基酸、嘌呤、嘧啶、维生素等均称生长因子。长因子。 在合

18、成培养基中需要补充在合成培养基中需要补充 在复合培养基中一般不须加入在复合培养基中一般不须加入 在某些特定的情况下需要加入一种或数种生长因子在某些特定的情况下需要加入一种或数种生长因子 营养缺陷型菌种，如谷氨酸发酵中使用的菌种为生物素缺陷型营养缺陷型菌种，如谷氨酸发酵中使用的菌种为生物素缺陷型 五、生长因子五、生长因子培养基及其制备六、前体物质六、前体物质 前体物质前体物质(Precursor)：最终所需的代谢产最终所需的代谢产物的前身或其结构中的一部分。物的前身或其结构中的一部分。 在生物合成中直接结合到产物分子中，自身结在生物合成中直接结合到产物分子中，自身结构变化不大，能显著提高产量的小

19、分子物质。构变化不大，能显著提高产量的小分子物质。 抗生素抗生素(Antibiotin)发酵中常用的前体物质：发酵中常用的前体物质：抗生素抗生素前前 体体 物物 质质青霉素青霉素苯乙酸（或在发酵中生成苯乙酸的物质）苯乙酸（或在发酵中生成苯乙酸的物质）链霉素链霉素肌醇、精氨酸、甲硫氨酸肌醇、精氨酸、甲硫氨酸红霉素红霉素丙酸、丙醇、丙酸盐、乙酸盐丙酸、丙醇、丙酸盐、乙酸盐培养基及其制备青霉素G青霉素V培养基及其制备六、前体物质六、前体物质 影响前体物质效力的因素影响前体物质效力的因素 菌种的特性菌种的特性 前体物质的投入量前体物质的投入量(Inoculation concentration) 前体

20、物质的毒性前体物质的毒性(Toxicity)苯乙酸用量（）苯乙酸用量（）青霉素产量（单位青霉素产量（单位/ml)青霉素比例（）青霉素比例（）0.157.30.273.00.390.60.495.6培养基及其制备七、七、 促进剂和抑制剂促进剂和抑制剂 促进剂促进剂Accelerator（刺激剂（刺激剂Stimulant） 并非前体或营养物，可影响正常代谢或中间代谢物并非前体或营养物，可影响正常代谢或中间代谢物积累、或提高次级代谢物的产量的一类刺激因子。积累、或提高次级代谢物的产量的一类刺激因子。 作用原理：作用原理： 改变细胞的渗透性，或改变细胞的渗透性，或“启动启动”微生物体内的生产微生物体内

21、的生产部位，否则这些部位是被阻遏的，因此促进剂的添加部位，否则这些部位是被阻遏的，因此促进剂的添加可以大大提高产量。可以大大提高产量。 常用促进剂：常用促进剂：各种表面活性剂各种表面活性剂Surfactant（洗涤剂、吐（洗涤剂、吐温温80、 EDTA、植酸等）、大豆油提炼物、甲醇等。、植酸等）、大豆油提炼物、甲醇等。培养基及其制备Org. Biomol. Chem., 2009, 7, 17531760 | 1753七、七、 促进剂和抑制剂促进剂和抑制剂培养基及其制备七、促进剂和抑制剂七、促进剂和抑制剂 抑制剂抑制剂(Inhibitor)的作用原理：的作用原理：通过通过抑制抑制某些合成其它产

22、物的途径某些合成其它产物的途径而使而使所需产物所需产物的合成的合成得到加强。得到加强。 抗生素生产中的抑制剂：抗生素生产中的抑制剂：抗生素抗生素被抑制的产物被抑制的产物抑制剂抑制剂链霉素链霉素甘露糖链霉素甘露糖链霉素甘露聚糖甘露聚糖四环素四环素金霉素金霉素溴化物、硫脲等溴化物、硫脲等头孢霉素头孢霉素C头孢霉素头孢霉素NL-蛋氨酸蛋氨酸利福霉素利福霉素B其它利福霉素其它利福霉素巴比妥药物巴比妥药物培养基及其制备八、水分八、水分 细胞的重要组分；细胞的重要组分； 细胞内一切生化反应的介质细胞内一切生化反应的介质 优良溶剂；（物质进出细胞）优良溶剂；（物质进出细胞） 维持大分子结构的稳定；维持大分子

23、结构的稳定； 重要的物理性质：重要的物理性质： 如：高比热；高汽化热；如：高比热；高汽化热； 高沸点；冰的密度小于水等，保证高沸点；冰的密度小于水等，保证 生命活动的正常进行。生命活动的正常进行。 其质量对产品质量影响很大。其质量对产品质量影响很大。培养基及其制备九九 消沫剂消沫剂 工业中利用消沫剂消除发酵中产生的泡沫工业中利用消沫剂消除发酵中产生的泡沫：防止逃液和染菌：防止逃液和染菌 植物、动物油脂（豆油、玉米油、猪油）植物、动物油脂（豆油、玉米油、猪油）、化学合成的高分子化合物、化学合成的高分子化合物培养基及其制备第二节、营养物质的调节第二节、营养物质的调节 培养基中各营养物的浓度和比例很

24、严格。直接培养基中各营养物的浓度和比例很严格。直接影响菌体的繁殖和产物的积累。尤其是碳氮比。影响菌体的繁殖和产物的积累。尤其是碳氮比。（维持正常渗透压，节约原料也必需）。（维持正常渗透压，节约原料也必需）。 1.不同碳源的利用速度不同碳源的利用速度 2.氮源利用及碳源利用的关系氮源利用及碳源利用的关系 3.碳氮比例的调节碳氮比例的调节 4.前体的控制前体的控制 5.补料补料培养基及其制备培养基的种类培养基的种类 （一）孢子培养基：形成孢子。基质浓度（一）孢子培养基：形成孢子。基质浓度（有机氮源）低，适当无机盐有机氮源）低，适当无机盐 （二）种子培养基：孢子发芽、菌体生长。（二）种子培养基：孢子

25、发芽、菌体生长。快速碳氮源、氮源和维生素含量高快速碳氮源、氮源和维生素含量高 （三）发酵培养基：菌体生长繁殖、合成大（三）发酵培养基：菌体生长繁殖、合成大量产物量产物培养基及其制备一、不同碳源的利用速度一、不同碳源的利用速度 不同菌能利用的碳源不同，同一菌种对不同菌能利用的碳源不同，同一菌种对不同碳源利用速度不同。不同碳源利用速度不同。 如：青霉素产生菌利用葡萄糖快（如：青霉素产生菌利用葡萄糖快（30-40小时），小时），利用乳糖速度慢（利用乳糖速度慢（6天）。天）。 一般情况：单糖比双糖快；双糖比多糖一般情况：单糖比双糖快；双糖比多糖快；纯多糖比杂多糖快。快；纯多糖比杂多糖快。 快者为快者为

26、速效碳源速效碳源，慢者为，慢者为迟效碳源迟效碳源。培养基及其制备 速效碳源速效碳源( (快速利用碳源快速利用碳源) )与与迟效碳源迟效碳源( (缓缓慢利用碳源慢利用碳源) )的搭配使用。的搭配使用。控制浓度，控制浓度，生长期生长期利用速效碳源，利用速效碳源，产物合成产物合成期期利用迟效碳源。利用迟效碳源。培养基及其制备二、氮源利用及与碳源利用的关系二、氮源利用及与碳源利用的关系 不同氮源的利用速度也不同。不同氮源的利用速度也不同。 如：铵盐比硝基氮更容易利用。简单的无菌氮源和氨基酸如：铵盐比硝基氮更容易利用。简单的无菌氮源和氨基酸为为速效氮源速效氮源，复杂的有机氮源为，复杂的有机氮源为迟效氮源

27、迟效氮源。 氨及铵盐等氮源的利用速度常随碳源的利用氨及铵盐等氮源的利用速度常随碳源的利用速度而变。速度而变。 糖代谢中间产物是氨基酸的前体。糖代谢中间产物是氨基酸的前体。速效氮源速效氮源与与迟效氮源迟效氮源的搭配使用类似于碳源的情况的搭配使用类似于碳源的情况培养基及其制备三、碳氮比例的调节三、碳氮比例的调节 碳氮比碳氮比能直接影响微生物的生长和发酵产品能直接影响微生物的生长和发酵产品的积累。的积累。 碳氮比严格讲指元素比，但通常指原料比。碳氮比严格讲指元素比，但通常指原料比。 一般情况：一般情况：产物不含氮，细菌，产物不含氮，细菌，100:0.2-2.0；酵母菌，；酵母菌， 100:20；霉菌

28、，；霉菌，100:10。如：酒精发酵。如：酒精发酵产物含氮，碳氮比较高。产物含氮，碳氮比较高。 如：谷氨酸生产，如：谷氨酸生产， 100:15-21。培养基及其制备四、前体的控制四、前体的控制 同前体对不同菌作用不同；同前体对不同菌作用不同； 不同前体对同种菌作用不同；不同前体对同种菌作用不同； 同前体，同种菌，使用不同，效果不同。同前体，同种菌，使用不同，效果不同。 一般前体越多，增产越多；一般前体越多，增产越多； 但大多毒性也增大。但大多毒性也增大。 青霉素青霉素G：苯乙酰胺：苯乙酰胺 （0.05-0.1），多次（），多次（1次次/12小时）。同时要注意前体物质被作为营养物质小时）。同时要

29、注意前体物质被作为营养物质利用。利用。培养基及其制备五、补料五、补料 补料解决的问题：补料解决的问题： 菌体早衰；料粘，搅拌能耗高，消泡难，溶氧降低，菌体早衰；料粘，搅拌能耗高，消泡难，溶氧降低，渗透压高。渗透压高。 补料的目的和方法：补料的目的和方法： 限制生长速度；限制生长速度； 仅维持呼吸，半饥饿状态，利于仅维持呼吸，半饥饿状态，利于产物合成；补足发酵液体积；产物合成；补足发酵液体积； 控制好时间、速率和配比。控制好时间、速率和配比。抗生素的生产：中间补料量达到基础料的抗生素的生产：中间补料量达到基础料的1-3倍。倍。生产上多用丰富培养基提高产量生产上多用丰富培养基提高产量培养基及其制备

30、 红霉素发酵基本培养基：玉米浆、黄豆饼红霉素发酵基本培养基：玉米浆、黄豆饼粉、蔗糖，菌体生长达到高峰。粉、蔗糖，菌体生长达到高峰。 补加蔗糖，红霉素合成重新开始。补加蔗糖，红霉素合成重新开始。五、补料五、补料培养基及其制备 目前还不能完全从生化反应的基本原理来目前还不能完全从生化反应的基本原理来推断推断和计算和计算出适合某一菌种的培养基配方，只能用生出适合某一菌种的培养基配方，只能用生物化学、细胞生物学、微生物学等的基本理论，物化学、细胞生物学、微生物学等的基本理论，参照前人所使用的较适合某一类菌种的经验配方，参照前人所使用的较适合某一类菌种的经验配方，再结合所用菌种和产品的特性，采用摇瓶、玻璃再结合所用菌种和产品的特性