蛋白质的颜色反应

1、实验二、蛋白质的颜色反应实验二、蛋白质的颜色反应1 1原理：原理： 尿素加热至尿素加热至180180左右，生成双缩脲并放出一分氨。双缩脲左右，生成双缩脲并放出一分氨。双缩脲在碱性环境中能与在碱性环境中能与cucu2+2+结合生成紫红色化合物，此反应称为双缩结合生成紫红色化合物，此反应称为双缩脲反应。蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生脲反应。蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生此反应。可用于蛋白质的定性或定量测定。此反应。可用于蛋白质的定性或定量测定。 反应式如下：反应式如下：（一）双缩脲反应（一）双缩脲反应二、实验内容二、实验内容实验二、蛋白质的颜色反应和沉淀反应实验

2、二、蛋白质的颜色反应和沉淀反应二、实验内容：二、实验内容：实验二、蛋白质的颜色反应实验二、蛋白质的颜色反应反应式如下：反应式如下：cnh 2nh 2ocnh 2nh 2ocnh 2nhcnh 2oo+nh 2180occnh2nh2ocnh2nh2ocnhnhcohnhcunconh2chnhooh2cu2+oh- 双缩脲反应不仅为含有两个以上肽键的物质所有。含双缩脲反应不仅为含有两个以上肽键的物质所有。含有一个肽键和一个有一个肽键和一个csnhcsnh2 2，chch2 2nhnh2 2，crhcrhnhnh2 2，chch2 2nhnh2 2chnhchnh2 2chch2 2ohoh或或

3、chohchchohch2 2nhnh2 2等基团等基团 nh nh2 2 nh nh2 2 以及乙二酰二胺（以及乙二酰二胺（o occcco o）等物质也有此反应。）等物质也有此反应。 nhnh3 3也干扰此反应，因为也干扰此反应，因为nhnh3 3与与cucu2+2+可生成暗蓝色的络离可生成暗蓝色的络离子子cucu（nhnh3 3）4 42+2+。因此，一切蛋白质或二肽以上的多肽都。因此，一切蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。或多肽。2 2试剂：试剂：尿素尿素10%10%氢氧化钠溶液氢氧化钠溶

4、液1%1%硫酸铜溶液硫酸铜溶液2%2%卵清蛋白溶液卵清蛋白溶液（一）双缩脲反应（一）双缩脲反应二、实验内容：二、实验内容：实验二、蛋白质的颜色反应实验二、蛋白质的颜色反应 取少量尿素结晶，放在干燥试管中。用微火加热使尿素熔化。熔化的尿取少量尿素结晶，放在干燥试管中。用微火加热使尿素熔化。熔化的尿素开始硬化时，停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。冷后，加素开始硬化时，停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。冷后，加10%10%氢氢氧化钠溶液约氧化钠溶液约1ml1ml，振荡混匀，再加，振荡混匀，再加1%1%硫酸铜溶液硫酸铜溶液1 1滴，再振荡。观察出滴，再振荡。观察出现的现的粉红颜色粉红颜色。要避免添加过

5、量硫酸铜，否则，生成的蓝色氢氧化铜能。要避免添加过量硫酸铜，否则，生成的蓝色氢氧化铜能掩盖粉红色。掩盖粉红色。 向另一试管加卵清蛋白溶液约向另一试管加卵清蛋白溶液约1ml1ml和和10%10%氢氧化钠溶液约氢氧化钠溶液约2ml2ml，摇匀，再，摇匀，再加加1%1%硫酸铜溶液硫酸铜溶液2 2滴，随加随摇。观察滴，随加随摇。观察紫玫瑰色紫玫瑰色的出现。的出现。（一）双缩脲反应（一）双缩脲反应二、实验内容：二、实验内容：实验二、蛋白质的颜色反应实验二、蛋白质的颜色反应3 3操作：操作：1 1原理：原理： 除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外，所有除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外，

6、所有氨基酸氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。 丙氨酸、氨和许多一级胺都呈阳性反应。尿素、马尿酸、二酮吡丙氨酸、氨和许多一级胺都呈阳性反应。尿素、马尿酸、二酮吡唪和肽键上的亚氨基不呈现此反应。因此，虽然蛋白质和氨基酸均唪和肽键上的亚氨基不呈现此反应。因此，虽然蛋白质和氨基酸均有茚三酮反应，但能与茚三酮呈阳性反应的不一定就是蛋白质或氨有茚三酮反应，但能与茚三酮呈阳性反应的不一定就是蛋白质或氨基酸。在定性、定量测定中，应严防干扰物存在。基酸。在定性、定量测定中，应严防干扰物存在。 该反应十分灵敏，该反应十分灵敏，11 500 00011 5

7、00 000浓度的氨基酸水溶液即能给出反应，浓度的氨基酸水溶液即能给出反应，是一种常用的氨基酸定量测定方法。是一种常用的氨基酸定量测定方法。 茚三酮反应分为两步，第一步是氨基酸被氧化形成茚三酮反应分为两步，第一步是氨基酸被氧化形成coco2 2、nhnh3 3和醛，和醛，水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成有色物质。酮同另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成有色物质。（二）茚三酮反应（二）茚三酮反应二、实验内容：二、实验内容：实验二、蛋白质的颜色反应实验二、蛋白质的颜色反应反应机理：反

8、应机理： 此反应的此反应的适宜适宜phph为为5757，同一浓度的蛋白同一浓度的蛋白质或氨基酸在不质或氨基酸在不同同phph条件下的条件下的颜色深浅不同，颜色深浅不同，酸度过大时甚至酸度过大时甚至不显色。不显色。蛋白质溶液蛋白质溶液2%2%卵清蛋白或新鲜鸡蛋清溶液（蛋清卵清蛋白或新鲜鸡蛋清溶液（蛋清水水=19=19）0.5%0.5%甘氨酸溶液甘氨酸溶液0.1%0.1%茚三酮水溶液茚三酮水溶液0.1%0.1%茚三酮茚三酮- -乙醇溶液乙醇溶液2 2试剂：试剂：（二）茚三酮反应（二）茚三酮反应二、实验内容：二、实验内容：实验二、蛋白质的颜色反应实验二、蛋白质的颜色反应 取取2 2支试管分别加入蛋白

9、质溶液和甘氨酸溶液支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶液1ml1ml，再各加，再各加0.5ml0.1%0.5ml0.1%茚三酮水溶液，混匀，在沸水浴中加热茚三酮水溶液，混匀，在沸水浴中加热1212分钟，观察颜色由分钟，观察颜色由粉色粉色变变紫红色紫红色再变再变蓝蓝。 在一小块滤纸上滴一滴在一小块滤纸上滴一滴0.5%0.5%甘氨酸溶液，风干后，再在原处滴一滴甘氨酸溶液，风干后，再在原处滴一滴0.1%0.1%茚三酮乙醇溶液，在微火旁烘干显色，观察茚三酮乙醇溶液，在微火旁烘干显色，观察紫红色斑点紫红色斑点的出现。的出现。3 3操作：操作：（二）茚三酮反应（二）茚三酮反应二、实验内容：二、实验内容：实验

10、二、蛋白质的颜色反应实验二、蛋白质的颜色反应 含有苯环结构的氨基酸，如酪氨酸和色氨酸，遇硝酸后，可被硝化含有苯环结构的氨基酸，如酪氨酸和色氨酸，遇硝酸后，可被硝化成黄色物质，该化合物在碱性溶液中进一步形成橙黄色的硝醌酸钠。成黄色物质，该化合物在碱性溶液中进一步形成橙黄色的硝醌酸钠。 反应式如下：反应式如下：1 1原理：原理：（三）黄色反应（三）黄色反应二、实验内容二、实验内容实验二、蛋白质的颜色反应和沉淀反应实验二、蛋白质的颜色反应和沉淀反应1 1原理：原理：（三）黄色反应（三）黄色反应二、实验内容：二、实验内容：实验二、蛋白质的颜色反应实验二、蛋白质的颜色反应onoonaho+hno3hon

11、o2naoh硝基酚(黄色)邻硝醌酸钠(橙黄色) 多数蛋白质分子含有带苯环的氨基酸，所以有黄色反应，苯丙氨酸多数蛋白质分子含有带苯环的氨基酸，所以有黄色反应，苯丙氨酸不易硝化，需加入少量浓硫酸才有黄色反应。不易硝化，需加入少量浓硫酸才有黄色反应。反应式如下：反应式如下：鸡蛋清溶液鸡蛋清溶液 将新鲜鸡蛋的蛋清将新鲜鸡蛋的蛋清与水按与水按1 20混匀，然后用混匀，然后用6层层纱布过滤。纱布过滤。头发头发指甲指甲 0.5%0.5%苯酚溶液苯酚溶液浓硝酸溶液浓硝酸溶液 0.3%色氨酸色氨酸 0.3%酪氨酸溶液酪氨酸溶液 10%氢氧化钠氢氧化钠2 2试剂：试剂：（三）黄色反应（三）黄色反应二、实验内容：二

12、、实验内容：实验二、蛋白质的颜色反应实验二、蛋白质的颜色反应管 号123456材 料（滴）鸡蛋清溶液4指甲少许头发少许0.5%苯酚40.3%色氨酸40.3%酪氨酸4浓硝酸（滴）24040444现象3 3操作：操作：（三）黄色反应（三）黄色反应二、实验内容二、实验内容实验二、蛋白质的颜色反应和沉淀反应实验二、蛋白质的颜色反应和沉淀反应 向向6 6个试管中分别按上表加入试剂，观察各管出现的现象，有的个试管中分别按上表加入试剂，观察各管出现的现象，有的试管反应慢可略放置或用微火加热。待各管出现黄色后，于室试管反应慢可略放置或用微火加热。待各管出现黄色后，于室温下逐滴加入温下逐滴加入10%10%氢氧化钠溶液至碱性，观察颜色变化。氢氧化钠溶液至碱性，观察颜色变化。3 3操作：操作：（三）黄色反应（三）黄色反应二、实验内容二、实验内容实验二、蛋白质的颜色反应和沉淀反应实验二、蛋白质的颜色反应和沉淀反应管 号123456材 料（滴）鸡蛋清溶液4指甲少许头发少许0.5%苯酚40.3%色氨酸40.3%酪氨酸4浓硝酸（滴）24040444现象 向向6 6个试管中分别按上表加入试剂，观察各管出现的现象，有的个试管中分别按上表加入试剂，观察各管出现的现象，有的试管反应慢可略放置或用微火加热。待各管出现黄色后，于室试管反应