




版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领
文档简介
1、第七章第七章 外源基因表达外源基因表达n一、表达机制表达机制n1起始转录起始转录:转录起始的速率是gene表达的限速步骤,用诱导型启动子(lac、trp、 pl/pr、 tac、组成型启动子:t7)n2mrnamrna延伸与稳定延伸与稳定:正常终止序列、减少dna反向转录产生反义mrna、polya掺入对3正确加工n3mrnamrna有效翻译有效翻译:aug首选起始codon、sd序列与16srrna互补结合,含有至少aggagg中4个碱基、sd与atg间距离3-9bp、翻译起始区周围不形成明显二级结构、codon选择性相近(没有明显偏好性不同)n4prpr稳定性稳定性:构建融合pr、分泌pr
2、、包涵体pr、pr水解酶缺陷型受体细胞第七章第七章 基因表达系统n外源基因表达系统外源基因表达系统n泛指目的基因与表达载体重组后,导入合适受体细胞,并在其中有效表达,产生目的基因产物n1e. colie. coli表达系统表达系统:n常用常用lac & taclac & tac:以lac操纵子调控机制为基础:lacp laco 结构基因(lacz, y, a),laci 阻遏pr,iptg诱导,npl & prpl & pr:以phage溶原/溶菌循环nt7t7启动子启动子:t7rna聚合酶识别序列在pet中mcs上端,rna聚合酶位于bl21(de3)基因组中,上端为lac启动子调控,ipt
3、g第七章第七章 基因表达系统n外源外源prpr表达形式表达形式:n包涵体pr:n融合pr:n寡聚型pr:多表达单元重组、多顺反子、多编码序列第七章高效表达策略第七章高效表达策略n优化表达载体设计优化表达载体设计:启动子和mrna中sd序列优化,强启动子,sdatg间距,rbs茎环结构n稀有codon trna,n外源mrna稳定性、n外源pr稳定性:pr分泌胞外,pr e缺失,pr e敏感序列修饰,pr稳定性因子n优化发酵过程:工艺 生物学:菌体生长,表达条件,产物总量the expression vectormost important elements in the vectoruprom
4、oter f-35: ttgaca (e. coli )f-10: tataat (e. coli )uterminator (hairpin)uribosome binding site (rbs)uselection markeruvector replication sequence (ori)upolylinker (mcs)in the gene/vectorustart (atg)ustop (1-2 taa, (tag, tga)usignal peptidetac promoterhybrid promoter fusion from lac and trp promoters
5、+ combines strong rna polymerase binding sequences+ 5 x stronger than lac promoter+ 20-30% of total protein+ induced by iptg l lpl promoterisolated from l bacteriophage - l repressor (ci) binds to lpl promoter+/- ci 857 variant heat inducible 30 degrees, expression+/-alternatively use special strain
6、s with l repressor under control of trp promoter which is induced by trp addition+tightly regulated - good for toxic proteins target protein target genelplrepressor geneci repressortrp promotertrp+t7 system (pet-system)nt7 rna polymerase gene controlled by lac promoterniptg induces t7 rna polymerase productionnt7 rna polymerase transcribes gene controlled by t7 promoterntarget gene can not be activated by host rna polymerasenspecial strain needednlaco in pet and plyss reduces leakinessgal systemgene cloned under control ofthe gal4 promoterinduction by galactose as thesole carbon
温馨提示
- 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
- 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
- 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
- 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
- 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
- 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
最新文档
- 夏季行车安全考题及答案
- 物理研究参考题目及答案
- 吉林省农安县新农中学2024届中考三模数学试题含解析
- 《穿靴子的猫》读后感
- 2025年安全员-C证证考试题库及答案
- 云南锡业职业技术学院《马克思主义中国化》2023-2024学年第二学期期末试卷
- 江西环境工程职业学院《动物生物学实验双语》2023-2024学年第二学期期末试卷
- 2025年江西省赣县三中高三毕业班第十七模历史试题含解析
- 长沙医学院《影视美术》2023-2024学年第二学期期末试卷
- 南昌航空大学科技学院《聚合物近代仪器分析》2023-2024学年第二学期期末试卷
- 四川省广安市2021年中考地理真题(含答案)
- 化工过程的在线监测与控制
- 粮油烘干培训课件
- crrt的治疗与护理
- 互联网汽车金融外文文献翻译
- 行政法(中国政法大学版)
- 2020网络与信息安全管理员职业技能标准(职业编码:4-04-04-02)
- 部编版六年级下册道德与法治全册表格式教学设计
- DC-DC反激变压器计算
- DL/T 5182-2021 火力发电厂仪表与控制就地设备安装、管路、电缆设计规程
- 人民医院能源托管服务项目可研技术方案书
评论
0/150
提交评论