总糖和还原糖的测定及葡萄糖标准曲线的绘制-3,5-二硝基水杨酸法ppt课件

1、实验一、总糖和复原糖的测定 3,5-二硝基水杨酸法一、实验目的1、掌握复原糖和总糖测定的根本原理；、掌握复原糖和总糖测定的根本原理；2、学惯用、学惯用3,5-二硝基水杨酸法测定复原二硝基水杨酸法测定复原糖的方法。糖的方法。 二、实验原理二、实验原理 复原糖是指含有自在醛基或者酮基的糖类，复原糖是指含有自在醛基或者酮基的糖类，单糖都是复原糖，双糖和多糖不一定是复单糖都是复原糖，双糖和多糖不一定是复原糖；利用糖的溶解度不同，可将植物样原糖；利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来；品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来；对没有复原性的双糖和多糖，可用酸水解对没有复原性的双糖和多

2、糖，可用酸水解法使其降解成有复原性的单糖进展测定，法使其降解成有复原性的单糖进展测定，再分别求出样品中复原糖和总糖的含量再分别求出样品中复原糖和总糖的含量复原糖以葡萄糖含量计。复原糖以葡萄糖含量计。 复原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及复原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，其它产物，3,5-二硝基水杨酸那么被复原二硝基水杨酸那么被复原为棕红色的为棕红色的3-氨基氨基-5-硝基水杨酸。硝基水杨酸。NaOH黄色黄色棕红色棕红色加热加热 在过量的在过量的NaOH碱性溶液中，碱性溶液中， 3-氨基氨基-5-硝硝基水杨酸呈橘红色，在基水杨酸呈橘红色，在540nm处有最大吸处有最大吸收，在一定的浓

3、度范围内，复原糖的量与收，在一定的浓度范围内，复原糖的量与光吸收值成线性关系。利用比色法，在光吸收值成线性关系。利用比色法，在540nm 波长下测定光密度值，查对规范曲波长下测定光密度值，查对规范曲线并计算，便可求出样品中复原糖和总糖线并计算，便可求出样品中复原糖和总糖的含量。的含量。三、实验器材1、资料：山芋粉2、仪器：电子分析天平、水浴锅、V-1100可见分光光度计、移液器3、其他：试管、容量瓶、三角烧瓶、量筒、吸管移液管、洗耳球、玻棒、洗瓶、漏斗、离心管、六凹反响盘、pH试纸114四、实验试剂1、规范葡萄糖溶液1.0mg/ml2、DNS试剂3、6mol/L HCl4、6mol/L NaO

4、H5、I2-KI溶液五、操作1、样品中复原糖的提取准确称取0.5g山芋粉置于100ml三角烧瓶中加3ml蒸馏水，调成糊状再加30ml蒸馏水50水浴，30min (不时搅拌)转移至50ml离心管中，4000rpm，5min上清液1沉淀加20ml蒸馏水，洗涤沉淀，4000rpm，5min上清液2沉淀(弃)置于容量瓶中，蒸馏水定容至100ml,混匀，取1ml即可进展复原糖的测定。2、样品中总糖的水解、提取准确称取0.2g山芋粉置于100ml三角烧瓶中加3ml蒸馏水，调成糊状再加12ml蒸馏水，5ml 6mol/L HCl沸水浴，30min (不时搅拌)取取12滴于六凹滴于六凹反响盘中，加反响盘中，加

5、1滴滴I2-KI溶液，假设溶液，假设完全不显蓝色，完全不显蓝色，即可进展下面的即可进展下面的操作。操作。冷却至室温用6mol/L NaOH调pH7.0 pH试纸蒸馏水定容至100ml,混匀滤纸过滤，取10ml滤液用蒸馏水定容至100ml，成稀释1000倍的总糖水解液，混匀,取1ml总糖水解液，测定其复原糖的含量3、制造葡萄糖规范曲线及复原糖、总糖含量的测定。 取8支干净的试管，分别用记号笔标上07号，按照下表进展操作。其中05管，用于规范曲线的制造,以吸光度为纵坐标，各规范液浓度mg/ml为横坐标作图得规范曲线用Excel表制造。 管号管号试剂试剂01234567规范葡萄糖溶液规范葡萄糖溶液/

6、ml00.20.40.60.81.01.01.0蒸馏水蒸馏水/ml1.00.80.60.40.2000DNS试剂试剂/ml2.02.02.02.02.02.02.02.0沸水浴中准确煮沸沸水浴中准确煮沸5min，取出，用自来水冷却至室温，取出，用自来水冷却至室温蒸馏水蒸馏水/ml9.09.09.09.09.09.09.09.0葡萄糖含量葡萄糖含量/mg00.20.40.60.81.0C1C2A540nmab六、计算 C1V1(复原糖)=100% m1 C2V2(总糖)=0.9100% m2附：相关仪器运用附：相关仪器运用1、移液管的运用、移液管的运用2、移液器的运用、移液器的运用3、离心机的运用、离心机的运用 留意配平，对称放留意配平，对称放4、V-1100可见分光光度计的运用可见分光光度计的运用 比色皿比色皿V-1100可见分光光度计可见分光光度计开机预热30min测吸光