双脱甲氧基姜黄素PLGA微球药代动力学研究

1、目 录中文摘要1Abstract2前言31 实验材料41.1 仪器41.2 动物41.3 药物与试剂42 实验方法与结果42.1 色谱条件42.2 标准溶液的配制42.3 生物样品的处理42.4 专属性考察52.5 标准曲线的制备及定量下限92.6 精密度与准确度实验92.7 回收率实验102.8 稳定性试验112.9 BDMC与BDMC -PLGA-MS大鼠体内单剂量给药后药代动力学研究132.10 BDMC-PLGA-MS大鼠体内单剂量给药后药代动力学研究162.11 药代动力学参数182.12 BDMC-PLGA-MS在大鼠体内靶向性初步考察183讨论214 结论22参考文献23致谢24

2、综述25中文摘要目的：研究双脱甲氧基姜黄素聚乳酸-羟基乙酸微球（BDMC-PLGA-MS）在大鼠体内经时过程以及组织分布趋向。方法：本研究采用高效液相色谱法，研究注射后的体内药物动力学过程，并研究了该制剂在大鼠体内的组织分布，对其肺靶向性进行了评价。结果： 静脉注射（i.v.）给药后，BDMC在大鼠体内迅速代谢，在2h后已经几乎检测不出，而BDMC-PLGA-MS持续释放78h，具有较好的缓释效果。BDMC-PLGA-MS在大鼠体内的组织分布实验结果显示BDMC-PLGA-MS在给药后24h、48h、72h均在肺组织中浓度最高，表明BDMC-PLGA-MS混悬剂趋于聚集在肺组织。结论：BDMC

3、-PLGA-MS具有缓释效果和肺靶向性。关键词：姜黄素；双脱甲氧基姜黄素；微球；药物代谢动力学；肺靶向AbstractObjective: The purpose of this study is investigating the vivo process of BDMC loaded PLGA microspheres (BDMC-PLGA-MS) and tissue distribution in rats.Methods: Pharmacokinetics process and tissue distribution was studied by using high perfor

4、mance liquid chromatography. Results: After i.v administration, BDMC rapidly eliminated in rats in 2h while BDMC -PLGA-MS sustained release for 78h, showing a slow-release effect. In the tissue distribution study, BDMC -PLGA-MS has the highest concentrations in the lung tissue when 24h, 48h and 72h

5、after administration, indicating that BDMC -PLGA-MS was more concentrated in lung tissue. Conclusions: BDMC-PLGA-MS suspension with slow-release effect and lung targetingKey words：Curcumin；Bisdemethoxycurcumin； microspheres；pharmacokinetics ；lung targeting双脱甲氧基姜黄素PLGA微球药代动力学研究 前 言肺癌是严重威胁人类生命和健康的恶性肿瘤

6、之一，根据全国肿瘤防治研究办公室调查统计，20世纪70年代中期开展的全国第一次死因回顾调查表明，我国肺癌死亡率为5.47/10万，在癌症死因中，排在胃癌、食管癌、肝癌及宫颈癌之后，居第5位，占全部癌症死亡7.43%。与同期其它国家的肺癌死亡率水平相比，处于较低水平。90年代初的全国第二次死因抽样调查结果中，肺癌死亡率为17.27/10万，居癌症死因第3位，仅次于胃癌和食管癌。21世纪，卫生部开展了第三次死因回顾调查发现，肺癌的死亡率明显升高1。双脱甲氧基姜黄素（bisdemethoxycurcumin，BDMC）是从姜科姜黄属植物姜黄根茎中提取的一种酚性色素，近年来人们对于其抗癌活性的研究也有

7、了很大的突破，发现其对乳腺癌SKOV3细胞2、人肺腺癌A549细胞3等均有一定的抑制作用。可影响肿瘤发生、发展的各个阶段(始发、促进和演进)，并可通过抑制血管生成达到抗肿瘤侵袭和转移的目的。但双脱甲氧基姜黄素水溶性差，性质不稳定，体内代谢迅速，生物利用度低，体内难以达到有效浓度，严重制约了其开发成有效的抗癌药。 可降解微粒载药系统可以延长药物在体内的滞留时间，通过特定的靶向作用提高病灶局部的药物浓度，从而增强治疗效果，减小毒性反应。PLGA，即聚乳酸-羟基乙酸poly(1actic-co-glycolic acid)是聚乳酸(PLA)、聚羟基乙酸(PGA)两者的共聚物，具有优良的生物可降解性和

8、生物相容性，且降解速度可控，是理想的载体材料4-5。药物动力学是应用动力学原理研究药物在机体内吸收、分布、代谢、排泄的经时过程，揭示机体对药物处置规律，以及这些处置对药物疗效和毒性的影响，对指导临床安全、合理用药非常重要，同时对新药的设计、开发和研制也具有重要的意义。在本研究中建立了生物样本中双脱甲氧基姜黄素的高灵敏度分析方法，并对该方法进行专属性、精密度、准确度、回收率、稳定性等指标的考察，得出该方法完全符合生物样本测定要求后，将其应用于BDMC药代动力学研究中。本实验通过对体内BDMC的测定考察BDMC -PLGA-MS的静脉给物代谢动力学。1 实验材料1.1 仪器LC-15C HPLC仪

9、（紫外检测仪：SPD-15C；流动泵：LC-15C；数据处理软件：LC solution 15C）：日本岛津公司；AB-135型分析天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）；Anke TGL-16GB高速离心机：上海安亭科学仪器厂；LC-4016 低速离心机（安徽中科中佳科学仪器有限公司）；XW-80A微型旋涡混合仪（上海沪西分析仪器厂有限公司）；KQ-300B型超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司。1.2 动物 SPF级SD大鼠，体重200-250g，由安徽医科大学实验动物中心提供。1.3 药物与试剂 BDMC、Cur 标准品(纯度：HPLC99%、HPLC98%）：上海锐谷生物科技有限公

10、司；BDMC -PLGA-MS：由安徽中医学院临床药学实验室自制; 甲醇、乙腈（色谱纯）：上海星可生化有限公司。2 实验方法与结果2.1 色谱条件色谱柱：COSMOSIL C18色谱柱(250mm4.6mm，5m)；流动相：乙腈-4%冰醋酸（48:52)；流速：1.0ml/min； 检测波长：430nm；柱温：30；进样量20L。理论板数应不低于4000。2.2 标准溶液的配制BDMC标准品的配制：精密称取BDMC标准品5.04mg，用甲醇溶解定容为10mL，配制为504g/mL的贮备液，用甲醇稀释成浓度为50.40、25.20、12.60、6.30、3.15、1.575、0.788、0.39

11、4、0.197、0.098g/mL的标准溶液。内标液：精密称取BDMC 5.13mg，用甲醇溶解后，稀释到5.13g/mL备用。2.3 生物样品的处理2.3.1 血浆样品的处理取大鼠血浆100L，加入甲醇溶液300L及内标溶液（5.13g/mL姜黄素标准液）20L，混匀后，涡旋震荡5min，3000r.p.m离心15min；取上清液过滤后进样，用样品与内标峰面积比进行定量分析。2.3.2 组织样品的处理精密称取大鼠相应组织0.3g，加1.0mL生理盐水将组织制成匀浆液，移取组织匀浆液100L，加入甲醇溶液300L及内标溶液（5.13g/mL姜黄素标准液）20L，混匀后，涡旋震荡5min，300

12、0r.p.m离心15min；取上清液过滤后进样，用样品与内标峰面积比进行定量分析。2.4 专属性考察取大鼠空白组织样品，按上述相应方法进行处理，并与给药后生物样品以及标准品对照，所得的色谱图见下图。双脱甲氧基姜黄素的保留时间约为7.5min，内标姜黄素保留时间约为9min，由图可见，血浆中内源性物质不干扰双脱甲氧基姜黄素色谱峰和内标峰。图1-1 肾与心组织液液相色谱图：A1：空白肾组织液 A2:空白肾组织液+3.15g/mL Cur标准品 A3：大鼠i.v. 10mg/kg BDMC -PLGA-MS后的样品色谱图；B1：心组织液 B2:空白心组织液+3.15g/mL标准品 B3：大鼠i.v.

13、 10mg/kg BDMC -PLGA-MS后的样品色谱图Fig.1-1 HPLC chromatograms of A1) Blank kidney; A2) Blank kidney spike with 3.15 g/mL BDMC; A3) Rat kidney sample after a single i.v. Administration of 10mg/kg；B1) Blank heart; B2) Blank heart spike with 3.15 g/mL BDMC; B3) Rat heart sample after a single i.v. Administra

14、tion of 10mg/kg. 图1-2 肝与脾组织液液相色谱图：C1空白肝组织液 C2:空白肝组织液+3.15g/mL Cur标准品 C3：大鼠i.v. 10mg/kg BDMC -PLGA-MS后的样品色谱图；D1：脾组织液 D2:空白脾组织液+3.15g/mL标准品 D3：大鼠i.v. 10mg/kg BDMC -PLGA-MS后的样品色谱图Fig.1-2 HPLC chromatograms of C1) Blank liver; C2) Blank liver spike with 3.15 g/mL BDMC; C3) Rat liver sample after a singl

15、e i.v. Administration of 10mg/kg；D1) Blank spleen; D2) Blank spleen spike with 3.15 g/mL BDMC; D3) Rat spleen sample after a single i.v. Administration of 10mg/kg. 图1-3 肺组织液与血浆液相色谱图：E1：空白肺组织液 E2:空白肺组织液+3.15g/mL Cur标准品 E3：大鼠i.v. 10mg/kg BDMC -PLGA-MS后的样品色谱图；F1：空白血浆 F2:空白血浆+3.15g/mL标准品 F3：大鼠i.v. 10mg/

16、kg BDMC -PLGA-MS后的样品色谱图Fig.1-3 HPLC chromatograms of E1) Blank lung; E2) Blank lung spike with 3.15 g/mL BDMC; E3) Rat lung sample after a single i.v. Administration of 10mg/kg；F1) Blank plasma; F2) Blank plasma spike with 3.15 g/mL BDMC; F3) Rat plasma sample after a single i.v. Administration of 1

17、0mg/kg. 2.5 标准曲线的制备及定量下限取空白血浆100L，加入BDMC系列标准溶液，配制成相当于双脱甲氧基姜黄素浓度为6.30、3.15、1.575、0.788、0.394、0.197、0.098、0.0098g/mL的血浆样品，按“2.3.1血浆样品处理”项下处理后，取20L进样，以待测浓度（C）为横坐标，利用待测物与内标物的峰面积比值Ri为纵坐标，用加权最小二乘法进行回归计算，求得的直线回归方程即为标准曲线（如图所示）。获得的标准曲线线性相关系数R2值的范围是0.99940.9998，线性范围为0.09850.4g/mL，血浆中定量下限为0.0098g/mL，结果见图1-4。图1

18、-4 双脱甲氧基姜黄素在大鼠血浆中的标准曲线 Fig.1-4 Average one of calibration curves of BDMC in rat plasma2.6 精密度与准确度实验取大鼠空白血浆100L，按“2.5标准曲线的制备”项下方法配制双脱甲氧基姜黄素高、中、低3个浓度（分别为3.15、1.575、0.394g/mL）的质控样品，3样本，按“2.3.1血浆样品处理”项下处理后，取20L进样，用样品峰面积与内标峰面积比Ri代入同一条工作曲线，计算得到的相应浓度，考察日内和日间精密度，连续测定3天，求得的相对标准偏差均小于5%，结果见表1-1与表1-2。表1-1 日内精密度

19、结果Tab.1-1 The precision result of BDMC within-day 加入浓度（g/mL）0.3941.5753.15测得浓度（g/mL）10.386 1.526 3.206 20.423 1.606 3.157 30.399 1.548 3.354 Mean0.402 1.560 3.239 SD0.019 0.041 0.103 RSD(%)4.657 2.631 3.174 表1-2 日间精密度结果Tab.1-2 The precision result of BDMC between-day 加入浓度（g/mL）1230.3941.5753.150.394

20、1.5753.150.3941.5753.15测得浓度（g/mL）0.386 1.435 3.286 0.406 1.608 3.219 0.419 1.645 3.237 0.422 1.546 3.320 0.392 1.580 3.357 0.397 1.565 3.101 0.419 1560 3.121 0.399 1.660 3.294 0.408 1.648 3.209 Mean0.409 1.513 3.242 0.399 1.616 3.290 0.408 1.619 3.182 SD0.020 0.068 0.106 0.007 0.040 0.069 0.011 0.04

21、7 0.072 RSD(%)4.910 4.512 3.277 1.701 2.504 2.101 2.757 2.874 2.263 2.7 回收率实验将20L不同浓度的BDMC系列标准溶液加入离心管中，加入甲醇溶液200L及20L内标溶液（5.13g/mL姜黄素标准液），混匀后进样，记录样品峰面积与内标峰面积比值Ri，用Ri与稀释后的样品浓度作直线回归，得到标准品的回归方程；另取离心管加大鼠空白血浆100L，加入20L的不同浓度的标准品溶液，使其浓度为3.15、1.575、0.394g/mL，加入甲醇溶液200L及20L内标溶液（5.13g/mL姜黄素标准液），混匀后，涡旋震荡5min，3

22、000r.p.m离心15min；取上清液过滤后进样，将样品峰面积与内标峰面积比值Ri代入标准品的回归方程，得到相应浓度求得血浆中双脱甲氧基姜黄素的提取回收率。提取回收率=测得的浓度/加入浓度100%，重复测定5次，3个浓度的提取回收率分别为98.73%、99.01%、99.19%（n=5），总体平均为98.98%（n=15），结果见表1-3。表1-3 双脱甲氧基姜黄素在大鼠血浆中的提取回收率Tab.1-3 Extraaction recovery of BDMC in rat plasma 加入值(g/mL)0.3941.5753.15测得值回收率测得值回收率测得值回收率(g/mL)(%)(g

23、/mL)(%)(g/mL)(%)10.38497.46 1.54698.16 3.12499.17 20.398101.02 1.581100.38 3.172100.70 30.38397.21 1.56599.37 3.09298.16 40.38898.48 1.55798.86 3.09998.38 50.39299.49 1.54898.29 3.13599.52 Mean0.38998.73 1.559499.01 3.124499.19 SD0.006 1.565 0.014 0.905 0.032 1.013 RSD(%)1.58 1.58 0.91 0.91 1.02 1.0

24、2 2.8 稳定性试验为了考察双脱甲氧基姜黄素在测试过程中的稳定性，以保证所得数据的真实、可靠，进行了血浆样品室温放置实验，血浆样品反复冻融实验，长期冻存实验和血浆样品处理后放置实验。2.8.1 室温放置实验取离心管加大鼠空白血浆100L，加入浓度为0.08、1.50、4.00g/mL的标准品溶液200L及20L内标溶液（5.13g/mL Cur标准液），在室温下放置6h，按“血浆样品处理”项下处理后，取20L进样，并以当日是标准曲线计算浓度，所有样品的相对标准差（RSD），均小于15%，由表可知，样品在室温条件下放置6h，其稳定性良好。结果见表1-4。表1-4 双脱甲氧基姜黄素在大鼠血浆样品

25、中室温放置6h稳定性实验结果Tab.1-4 Stability of BDMC in rat plasma at room temperature 6 hours placed at test results 加入值(g/mL)12345MeanSDRSD(%)0.080.079 0.080 0.082 0.076 0.076 0.079 0.002 3.148 1.501.519 1.483 1.487 1.421 1.433 1.469 0.041 2.783 4.004.174 4.220 3.496 3.987 4.135 4.003 0.296 7.403 2.8.2 反复冻融实验取

26、离心管加大鼠空白血浆100L，加入浓度为0.08、1.50、4.00g/mL的标准品溶液200L及20L内标溶液（5.13g/mL Cur标准液），在-20冰箱冷冻24h，取出，室温融化后再放入冰箱中，反复3次后，按“2.3.1血浆样品处理”项下处理，取20L进样，并以当日是标准曲线计算浓度，所有样品的相对标准差（RSD），均小于15%，双脱甲氧基姜黄素的血浆样品反复冻融仍然比较稳定。结果见表1-5。表1-5 双脱甲氧基姜黄素在大鼠血浆中反复冻融稳定性实验结果Tab.1-5 Stability of BDMC in rat plasma after reduplicate freeze tha

27、wing加入值(g/mL)12345MeanSDRSD(%)0.080.079 0.080 0.082 0.076 0.078 0.079 0.002 2.645 1.501.519 1.487 1.654 1.541 1.552 1.551 0.063 4.040 4.004.199 4.483 4.220 3.884 3.906 4.138 0.249 6.014 2.8.3 长期冻存实验 取离心管加大鼠空白血浆100L，加入浓度为0.08、1.50、4.00g/mL的标准品溶液200L及20L内标溶液（5.13g/mL Cur标准液），放置-20冰箱冷冻两周，37水浴解冻后，按“2.3.

28、1血浆样品处理”项下处理，取20L进样，并以当日是标准曲线计算浓度，所有样品的相对标准差（RSD），均小于15%，结果表明，双脱甲氧基姜黄素血浆样品放置-20冰箱中冷冻两周后降解较少，血浆样品依然很稳定。结果见表1-6。表1-6 双脱甲氧基姜黄素在大鼠血浆中长期冻存稳定性实验结果Tab.1-6 Stability of BDMC in rat plasma long-term freeze-stored test results加入值(g/mL)12345MeanSDRSD(%)0.080.079 0.080 0.082 0.076 0.074 0.078 0.004 4.503 1.501.

29、519 1.483 1.487 1.653 1.473 1.524 0.086 5.653 4.004.199 4.403 4.220 4.184 4.210 4.254 0.100 2.354 2.8.4 处理后放置实验取离心管加大鼠空白血浆100L，加入浓度为0.08、1.50、4.00g/mL的标准品溶液200L及20L内标溶液（5.13g/mL Cur标准液），按“2.3.1血浆样品处理”项下处理，在处理后0h和24h分别取20L进样，并以当日是标准曲线计算浓度，所有样品的相对标准差（RSD），均小于15%，血浆样品处理后在室温条件下放置24h内，其稳定性良好，说明每天可以处理大批量的

30、样品。结果见表1-7。表1-7 双脱甲氧基姜黄素在大鼠血浆中室温放置24h稳定性结果Tab.1-7 Stability of BDMC in rat plasma after treatment for 24 hour at room temperature at test results加入值(g/mL)12345MeanSDRSD(%)0.080.077 0.081 0.077 0.078 0.078 0.078 0.002 2.377 1.501.502 1.516 1.450 1.497 1.401 1.473 0.047 3.219 4.004.072 4.170 4.085 4.1

31、63 4.268 4.172 0.092 2.205 2.9 BDMC与BDMC -PLGA-MS大鼠体内单剂量给药后药代动力学研究2.9.1 实验分组及过程 参考文献中大鼠的药效剂量与取血时间制定药代动力学给药剂量与给药时间，并通过预实验调整取血时间和确定最后的给药剂量为10mg/kg6，取SD大鼠10只，雌雄各半，体重180220g，随机分成2组，每组5只，分别为原料药组和制剂组，禁食12h后，尾静脉注射给药，于给药前（0min）和给药后1、5、10、15、30、60、120、180、240、480min，眼底静脉丛连续取血，加入肝素化离心管中，3000r.p.m离心10min，取上层血浆

32、，-20条件下避光保存备用。按血浆样品处理方法和测定方法进行处理和测定，根据血药浓度结果绘制了平均血药浓度-时间曲线。实验数据用药代动力学软件（3p97）进行分析,拟合后判断BDMC -PLGA-MS在体内可能存在的药动学过程。 2.9.2 实验结果大鼠i.v.双脱甲氧基姜黄素原料药及微球后，体内不同时间点对应血药浓度采用excel统计和3p97软件计算获得，其血药浓度-时间数据分别见表2-1、2-2，给药后其药-时曲线见图2-1。表2-1 大鼠单剂量i.v.10mg/kg BDMC 测得的血药浓度-时间数据（g/mL）Tab.2-1 Concentration of BDMC in rat

33、plasma at different time after single dose i.v. Administration of 10mg/kg BDMC（g/mL）t(min)12345meanSD10.4653 0.3552 0.3485 0.4563 0.3789 0.4008 0.0560 50.2752 0.2733 0.2253 0.2475 0.2598 0.2562 0.0206 100.0859 0.0967 0.0712 0.1023 0.0871 0.0886 0.0119 150.0458 0.0480 0.0358 0.0424 0.0372 0.0418 0.00

34、53 300.0244 0.0222 0.0261 0.0269 0.0208 0.0241 0.0026 600.0173 0.0178 0.0199 0.0172 0.0164 0.0177 0.0013 1200.0102 0.0098 0.0084 0.0093 0.0089 0.0093 0.0007 180- - - - - - - 240- - - - - - - 480- - - - - - - 表2-2 大鼠单剂量i.v.10mg/kg BDMC -PLGA-MS测得的血药浓度-时间数据（g/mL）Tab.2-2 Concentration of BDMC in rat pl

35、asma at different time after single dose i.v. Administration of 10mg/kg BDMC- PLGA-MS（g/mL）t(min)1 2 3 4 5 meanSD10.0146 0.0117 0.0165 0.0141 0.0129 0.0139 0.0018 50.0061 0.0043 0.0053 0.0050 0.0017 0.0045 0.0017 100.0061 0.0080 0.0082 0.0077 0.0093 0.0078 0.0011 150.0104 0.0133 0.0103 0.0129 0.0123

36、 0.0118 0.0014 300.0124 0.0123 0.0126 0.0121 0.0107 0.0120 0.0008 600.0060 0.0048 0.0056 0.0041 0.0053 0.0052 0.0007 1200.0017 0.0017 0.0017 0.0017 0.0017 0.0017 0.0000 1800.0049 0.0017 0.0049 0.0056 0.0043 0.0043 0.0015 2400.0067 0.0079 0.0056 0.0072 0.0062 0.0067 0.0009 4800.0095 0.0115 0.0089 0.0

37、085 0.0125 0.0102 0.0017 图2-1 大鼠单剂量i.v. 10mg/kg BDMC与BDMC-PLGA-MS后的平均血药浓度Fig.2-1 The mean concentration-time curve of five rats after single dose i.v. Administration of 10 mg/kg BDMC and BDMC- PLGA-MS2.10 BDMC-PLGA-MS大鼠体内单剂量给药后药代动力学研究从上述实验结果来看，i.v.给药后，原料药在体内迅速代谢，在2h后已经几乎检测不出，而MS虽然持续释放，但血药浓度一直较低，考虑可能

38、是因为BDMC-PLGA-MS为缓释制剂，具有缓释效果，所以又对MS进行较长时间的血药浓度考察。2.10.1 实验分组及过程取SD大鼠5只，体重180220g，禁食12h后，尾静脉注射给药，于给药前（0min）和给药后8、18、22、26、30、42、46、50、54、66、78h，眼底静脉丛连续取血，加入肝素化离心管中，3000r.p.m离心10min，取上层血浆，-20条件下避光保存备用。按血浆样品处理方法和测定方法进行处理和测定，根据血药浓度结果绘制了平均血药浓度-时间曲线。实验数据用药代动力学软件（3p97）进行分析,拟合后判断BDMC-PLGA-MS在体内可能存在的药动学过程。 2.

39、10.2 实验结果大鼠i.v. BDMC-PLGA-MS后，体内不同时间点对应血药浓度采用excel统计和3p97软件计算获得，其血药浓度-时间数据分别见表2-3，给药后其药-时曲线见图2-2。表2-3 大鼠单剂量i.v.10mg/kg BDMC-PLGA-MS测得的血药浓度-时间数据（g/mL）Tab2-3 Concentration of BDMC in rat plasma at different time after single dose i.v. Administration of 10mg/kg BDMC-PLGA-MS（g/mL）t(h)1 2 3 4 5 meanSD80.

40、0178 0.0178 0.0244 0.0175 0.0185 0.0192 0.0029 180.0118 0.0318 0.0186 0.0222 0.1001 0.0369 0.0361 220.0380 0.0347 0.0606 0.0321 0.0186 0.0368 0.0152 260.1663 0.0306 0.0952 0.0289 0.0085 0.0659 0.0649 300.2531 0.0311 0.1430 0.0206 0.0098 0.0915 0.1050 420.1137 0.1110 0.0969 0.1430 0.0186 0.0966 0.046

41、7 460.2972 0.0784 0.1058 0.1644 - 0.1292 0.1110 500.1541 0.0673 0.0716 0.0913 0.1573 0.1083 0.0442 540.1826 -0.0061 - 0.0081 0.0394 0.0802 660.0822 0.0344 -0.0124 - 0.0258 0.0345 780.0369 0.0064 0.0089 0.0191 0.0279 0.0198 0.0128 图2-2 大鼠单剂量i.v. 10mg/kg BDMC-PLGA-MS后的平均血药浓度Fig.2-1 The mean concentrat

42、ion-time curve of five rats after single dose i.v. Administration of 10 mg/kg BDMC-PLGA-MS2.11 药代动力学参数BDMC与BDMC-PLGA-MS注射给药后，BDMC在大鼠体内的药代动力学参数采用3p97药代动力学软件计算，计算结果见表2-4与2-5。表2-4 大鼠单剂量i.v. BDMC 后计算的主要药代动力学参数Tab.2-4 The main pharmacokinetic parameters of BDMC after single dose i.v. Administration of BD

43、MC in rats参数数值V（c）(L/kg)177.09T1/2(min)40.76CL(s)(mL/min)3.01AUC(g/min/mL)3.32表2-5 大鼠单剂量i.v. BDMC-PLGA-MS后计算的主要药代动力学参数Tab.2-5 The main pharmacokinetic parameters of BDMC after single dose i.v. Administration of BDMC-PLGA-MS in rats参数数值V（c）(L/kg)867.95T1/2(min)0.0033T1/2(min)0.1974CL(s)(mL/min)57.71A

44、UC(g/min/mL)0.17322.12 BDMC-PLGA-MS在大鼠体内靶向性初步考察2.12.1 实验分组及过程取SD大鼠18只，随机分成3组，每组6只，按10mg/kg尾静脉注射BDMC-PLGA-MS后，分别于24、48、72h处死，取血以及心、肝、脾、肺、肾，洗净、称量后分别按血浆样品处理方法和组织样品处理方法处理，HPLC法测定血浆与组织中双脱甲氧基姜黄素的浓度，比较微球在大鼠体内靶向性效果，以及给药时间与微球在组织器官中的分布的相关性。2.12.2实验结果样品测定按“组织匀浆处理方法”项下操作进样后，测定静脉注射给药后不同时间点大鼠各组织中双脱甲氧基姜黄素含量。静脉注射给药

45、后，24、48、72h时主要分布在肺中，肝、脾、血次之，心、肾最少。结果可知静脉注射后，双脱甲氧基姜黄素PLGA微球在体内主要分布在肺中，不同时间点各组织中药物浓度与血浆药物浓度比较，结果显示随着时间的延长各组织中的药物浓度先升高然后逐渐降低。实验数据结果见下表3-1、3-2、3-3及给药后不同时间点组织分布图3-1。表3-1 大鼠i.v. BDMC-PLGA-MS 24h后，组织中药物浓度（g/mL）Tab.3-1 The concentration in different rat tissue at 24h after i.v.administration of BDMC-PLGA-MS

46、NO.心肝脾肺肾血10.0430 0.1350 0.0321 2.5355 0.0214 0.0057 20.0168 0.1987 0.0473 1.4294 0.0009 0.0192 30.1272 0.1339 0.0319 3.2299 0.0759 0.0067 40.0136 0.0184 0.0044 3.1101 0.0083 0.0103 50.0160 0.8939 0.2128 3.9785 0.0025 0.0018 60.0020 0.4579 0.1090 5.2106 0.0018 0.0396 mean0.0364 0.3063 0.0729 3.2490 0

47、.0184 0.0139 SD0.0465 0.3230 0.0769 1.2822 0.0292 0.0139 表3-2 大鼠i.v. BDMC-PLGA-MS 48h后，组织中药物浓度（g/mL）Tab.3-2 The concentration in different rat tissue at 48h after i.v.administration of BDMC-PLGA-MSNO.心肝脾肺肾血10.0207 0.0282 0.0895 8.7950 0.0066 0.1544 20.0411 0.3864 0.1394 5.9594 0.0020 0.2366 30.0542

48、0.2086 0.0775 6.6508 0.0033 0.0993 40.0646 0.5335 0.2194 8.8915 0.0182 0.0653 50.0214 0.0027 0.0342 8.8220 0.0278 0.0990 60.0855 0.0679 0.1568 7.2693 0.0087 0.2061 mean0.0479 0.2046 0.1194 7.7313 0.0111 0.1434 SD0.0254 0.2153 0.0659 1.2797 0.0100 0.0675 表3-3 大鼠i.v. BDMC-PLGA-MS 72h后，组织中药物浓度（g/mL）Tab

49、.3-3 The concentration in different rat tissue at 72h after i.v.administration of BDMC-PLGA-MSNO.心肝脾肺肾血10.0572 0.0074 0.0184 1.3037 0.0348 0.0147 20.0180 0.1107 0.0290 1.3959 0.0033 0.0242 30.0299 0.0004 0.0010 0.7420 0.0040 0.0080 40.0489 0.2259 0.7650 1.0847 0.0170 0.0019 50.0155 0.0053 0.0838 0.9

50、670 0.0048 0.0272 60.0043 0.0023 0.1072 1.0423 0.0021 0.0066 mean0.0290 0.0587 0.1674 1.0893 0.0110 0.0138 SD0.0205 0.0925 0.2955 0.2357 0.0129 0.0101 图3-1 大鼠单剂量 i.v. BDMC-PLGA-MS后大鼠组织分布图Fig.3-1 Distribution of BDMC in rat tissue after i.v. Administration BDMC-PLGA-MS3讨论双脱甲氧基姜黄是从姜科姜黄属(curcuma L.)植物中

51、提取的一种天然有效成分的单体，具有广泛的预防和治疗肿瘤作用，且毒副作用小，具有广阔的药物应用前景。但在新药研发中，药物不仅应具有很强的体内外活性和较低的毒性，同时还应有合理的药代动力学行为。因此，本部分采用了HPLC法测定静脉注射BDMC与BDMC-PLGA-MS给药后BDMC在大鼠血浆含量及其药动学研究。实验中大鼠注射微球混悬液后，活动正常，无异常表现，无死亡现象，未发现不良反应，说明微球是静脉注射中比较安全的制剂。大鼠单剂量i.v. BDMC与BDMC-PLGA-MS给药后，血浆中药物浓度较低，可能是因为注射用的BDMC混悬液中BDMC的颗粒较细小，在体内也有一定的分布，使血浆中的药物浓度

52、减小，这需要在以后的实验中进一步研究。BDMC-PLGA-MS微球静脉注射后绝大部分被肺的最小毛细血管床以机械滤过方式截留，由于BDMC在体内代谢较快，组织中微球释放出的药物逐步被代谢而使得血浆中的药物浓度始终较低。大鼠单剂量i.v. BDMC后估算的半衰期为40.76min，表观分布容积为177.09L/kg，清除率为3.01mL/min，AUC为3.32g/min/mL，所研究的剂量范围内BDMC体内过程符合一室房室模型。大鼠单剂量i.v. BDMC-PLGA-MS后估算的T1/2=0.0033min，T1/2=0.1974min，表观分布容积为867.95L/kg，清除率为57.71mL/min，AUC为0.1732g/min/mL，所研究的剂量范围内BDMC-PLGA-MS体内过程符合二室房室模型。 微