脂血对血浆胆固醇测定 (CHOD—PAP法)的干扰评价

1、脂血对血浆胆固醇测定（CHODPAP法）的干扰评价临床综合性设计性实验汇报目录CONTENTS概述目的实验方案实验原理操作试剂与器材实验结果判定与分析讨论与讨论与感想实验目的08思维1.通过实验设计，培养科学严谨的实验态度,熟悉干扰评价方法。方法2.通过构建脂血模型,探讨这种因素对胆固醇测定的干扰并对干扰效应进行评估，为抵消或校正胆固醇测定的干扰提供依据,提高血清胆固醇测定的准确性。3.阐明数据分析方法及结果解释，评价可能存在的干扰影响,提供相关的干扰报告，对检测系统的特异性参数进行验证。分析概述各种脂蛋白所含胆固醇之总和，分为CE和FC。血清中胆固醇在LDL中最多，其次是HDL和VLDL，C

2、M最少。TC检测的是血液中各脂蛋白所含胆固醇的总和，代表总体水平，只能反映人体内胆固醇的总体趋势，临床中需要结合其他检验项目进行评估。临床常规方法推荐为酶法，常用COD-PAP法。应用最广的检测反应是Trinder的过氧化氢显色反应，在POD的作用下，使4-AAP与酚发生氧化缩合反应，产生最大吸收波长为470-550nm的醌亚胺类化合物。干扰物是临床实验室检测误差的一个重要来源，脂血主要是由于乳糜微粒增多对光有散射作用而产生干扰。实验方案071231、根据国家卫生和计划生育委员会2013年发布的干扰试验指南(WS/T416-2013)，明确干扰评价方案。2、针对临床常见的脂血干扰因素制备不同干

3、扰标本模型进行千扰分析。3、测定干扰因素在不同浓度时对胆固醇测定的结果。评价干扰因素对肌胆固醇测定的影响。将干扰物(脂血)加入临床标本不含干扰物的样本中按比例混合，制备一系列的浓度的待测标本(一般5个浓度)。由于干扰物的存在，对测定结果产生干扰，测定各标本中胆固醇浓度，通过回归分析明确干扰物效应，确定有临床意义的干扰物浓度水平。建立数学模型，通过统计学处理评价确定干扰物的浓度和干扰程度间的关系。原理07试剂与器材04试剂与器材胆 固 醇 标 准 溶 液（5.17mmol/L）：胆固醇200mg,溶于异丙醇100mL，于4备用，或采用定值的参考血清作为标准溶液；0.1mL 胆固醇测定酶试剂:Go

4、od缓冲液（pH6.7）50mmol/L，胆固醇酯酶200U/L，胆固醇氧化酶100U/L，过氧化物酶3000U/L，4-AAP0.3mmol/L，苯酚5mmol/L；50mL 脂血标本，临床血清标本，蒸馏水10mL。 一次性试管，试管架，加样枪，一次性吸头，烧杯，移液管，洗耳球，滤纸，半自动生化分光光度仪，恒温水浴箱。 操作步骤01标本标本制备制备数据数据处理处理记录记录检测检测结果结果测定测定步骤步骤分析分析脂血标本脂血标本临床血浆标本临床血浆标本（8ml）标本制备（一）01脂血标本（1）测试材料：含320mmol/L甘油三酯的脂血清样品，约5ml（待定）（参考干扰实验指南-常见内源性干扰

5、物建议实验浓度）（2）高浓度测试样品：未处理的脂血的血清样品（3）低浓度测试样品（对照样品）：用超高速离心除去脂肪，使用澄清的样品部分作为对照样品。5mL（可用生理盐水代替）标本制备（一）01标本制备（二）01（二）将干扰物高实验浓度样品与低实验浓度样品定量混合，可得到干扰物浓度介于两样品之间的一系列实验样品。已知，确定线性剂量相关关系时需要5个浓度水平。具体制备方法见表：1、为了排除方法精密度对结果的影响，每个水平重复测定三次（可根据现实条件适当改变，或两组）：将实验系列样品每份分装三支，将样品按干扰物浓度从低到高的顺序编号命名为样品1、2、3、4、5、6，分为3组：A组、B组、C组，每组均

6、含五份干扰物样品浓度即样品1、2、3、4、5、6。测定步骤01A组组C组组B组组1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 测定步骤01低低高高A组B组C组吸光度浓度吸光度浓度吸光度浓度B0.015-0.014-0.011-S0.5064.850.6244.850.5184.85U10.3323.120.3682.810.3553.30U20.3313.110.3492.660.3513.25U30.3253.060.3552.710.3543.29U40.3263.070.3272.490.3593.33U50.3383.190.3422.610.3963.68实

7、验结果记录011、干扰实验:计算干扰值=干扰管测定值一基础管测定值干扰率(%)=(干扰值基础值)x100%干扰物加后浓度=（V干V总）干扰物加前浓度2、干扰实验:结果判断当干扰物引起的干扰率4.1%则有干扰则有干扰A、B、C3组值平均后求得的干扰值和干扰率结果误差较大，分析整体数据，B组数据与A组合C组数据差异较大，故舍之。后平均A组和C组的数据求得干扰值和干扰率只有U5的干扰率(7.01%)4.1%，产生了干扰，而U1U4可能是因为干扰物产生的干扰小于了操作等因素带来的误差，使得干扰率较低，可忽略。54%03讨论54%74%1.本实验设置了ABC3组水平实验，是为了减小操作对实验结果的影响，由于是不同人操作，量的判定上有所不同，所得实验结果不同，是正常的。但B组结果较AC差异大，故舍之。但是人为误差仍然存在，可能