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文档简介
1、血清肌酸激酶 (CK) DGKC推荐方法测定1. 实验原理德国临床化学学会(DGKC)和国际临床化学学会(IFCC) 推荐的连续监测法。ADP+磷酸肌酸CK肌酸+ATPATP+葡萄糖己糖激酶(HK)ADP+葡萄糖 -6-磷酸+葡 萄 糖 -6-磷 酸 +NADP(G6P-DH)6- 磷 酸 葡 萄 糖 酸+NADPH+H+NADPH 在 340nm 处 有 特 异 吸 收 ,通 过 测 定 NADPH 生 成 速 率 计 算 出 CK 活 性 。2. 标 本 :2.1病人准备:无特殊要求。2.2类型:血清,肝素或 EDTA血浆。3.标本存放:稳定性:28保存稳定 7 天;1525保存稳定 1
2、天;-20 保存稳定 4 周(避光保存)。3 天内的活性损失:28保存 24 小时或 1822保存 1小时至少损失 10%。4. 标本运输:常温条件下保存运输。5. 标本拒收标准:细菌污染的标本。6. 实验材料6.1试 剂 利 德 曼 CK 测 定 试 剂 盒 ( 试 剂 1 6 64ml试 剂 26 16ml )6.1.1试剂组成:试剂 1( R1) +试剂 2( R2):咪唑缓冲液pH6.7100mmol/L磷酸肌酸30mmol/L葡 萄 糖20mmol/LN-乙酰半胱氨酸(NAC)20mmol/LEDTA-Na 22mmol/LADP2mmol/LNADP2mmol/L二腺苷 -5-磷
3、酸10 mol/L6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6P-DH)1500U/L已糖激酶(HK)2500U/L6.1.2试剂准备:试剂为即用式。6.1.3试剂稳定性与贮存:试剂避光保存于 28,若无污染,可稳定至失效期。试剂不可冰冻。6.1.4变质指示:当试剂有看得见的微生物生长,有浊度,或者未开盖的液体有沉淀时,表明试剂已变质,不能继续使用。6.1.5注 意 事 项 :试 剂 中 含 叠 氮 钠( 0.95g/L )为 防 腐 剂 。不 可 入 口 !避 免 接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂。6.2校 准 品 : 使 用 DiaSys 公 司 提 供 的 TruCal U校准品对自动分析仪进
4、行校准,具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。6.3质控品:具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。7. 仪器:贝克曼 AU680 生化分析仪8. 操作步骤8.1项目基本参数:参见 AU680 生化分析仪项目测定参数.SOP 文件8.2仪器操作步骤:参见 AU680 生化分析仪操作规程.SOP 文件9. 检验结果的判断与分析10.质量控制:在每一批标本中都应把非定值血清水平 I 与 II质控做为未知标本进行分析,以 2S 为质控警告限,3S 为失控限,绘制质控图,判断是否在控。质控规则参见室内质控操作规程.SOP 文件。11. 计 算 方 法 : 以 TruCal U 复 合 校
5、 准 品 CK 校 准 值 校 准 仪 器 后 , 在 病 人 结 果可报告范围内,仪器直接报告可靠的检测结果。不 使用校准品进行 CK活力检测 , 可 以 直 接 使 用A/min均 值 乘 以 计 算 因 子 得 到 结 果 , 但 是 这 样 所 得 结 果的 可 靠 性 不 如 使 用 校 准 品 。计 算 CK 活 力 的 计 算 因 子 见 下 表 :A/min因 子=CK 活 力U/L计 算 因 子 ( 37 ):340nm4127334nm4207365nm472912. 参考值范围1:(U/L )成人:女性24 167男 性24 190参考值因性别、 年龄、饮食和地域的不同而
6、有所差别。根据好的实验室经验,每个实验室应建立自己的参考值。13. 临床意义1、2:肌酸激酶(CK)主要由存在于肌肉中的同工酶(CK-M)和存在于脑中的同工酶(CK-B)组成。在血清中 CK 形式为 CK-MM,CK-MB,CK-BB 和巨酶等的二聚物。在心肌损伤或骨骼肌疾病时可以观测到 CK活力的升高。CK和 CK-MB 一起检测有助于心肌梗死的诊断和监视。14. 操作性能14.1线 性 范 围 1200U/L14.2 精密度:精密度的评估是根据 NCCLS推荐的标准方法,AU680 批内精密度小于 3%,总精密度小于 3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。批内精密度
7、xsCV批间精密度xsCVn=20(U/L)(U/L)(%)n=20(U/L)(U/L)(%)样品 11593.182.00样品 149.51.052.12样品 22201.540.70样品 21571.631.04样品 35083.690.73样品 32282.311.0114.3方 法 学 比 较 : 本 公 司 的 试 剂 盒 (y)与 某 商 品 化 试 剂 盒 (x),同时对 71 个样品进行 CK 活力检测,将检测结果作方法学比较,其统计结果如下:y=0.98x+0.02( U/L ); r=1.000 。14.4灵敏度:本试剂的检测限为 5U/L。14.5病人结果可报告范围:5-
8、1200U/L。16. 病危报警值的处理:无。17. 方法局限性17.1本法对 CK活力的线性上限为 1200U/L ,当测定值超过上限时,应将样品用 9g/L 氯 化 钠 溶 液 作 1+10 稀 释 , 重 新 测 定 , 结 果 乘 以 11 。17.2干扰物质:当样品中抗坏血酸浓度1704 mol/L,胆红素浓度684mol/L , 血 红 蛋 白 2.00g/L , 甘 油 三 酯 浓 度22.6mmol/L时没有观察到干 扰 。18. 补救措施:当仪器发生故障时,迅速联系仪器厂家进行维修。19. 参考文献1.SteinW. Creatinekinase(totalactivity)
9、,creatinekinaseisoenzymesandvariants.In:ThomasLed.Clinicallaboratorydiagnostics. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998.p.71-80.2.MossDW, HendersonAR. Clinicalenzymology.In:BurtisCA, AshwoodER.editors.TietzTextbookofClinicalChemistry.3rded.Philadelphia: W. B. Saunders Company; 1999. P.617-721
10、.3.RecommendationsoftheGermanSocietyforClinicalChemistry.Standardization of methods for the estimation of enzyme activities inbiological fluids: Standard method for the determination of creatinekinase activity. J Clin Chem Clin Biochem 1977;15:255-60.4.LorentzK,RohleG,SiekmannL.Introductionofnewstandardmethods
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