淡水鱼类对3种农药的敏感性分布(SSDs)初探硕士论文

1、MASTER DISSERTATIoNTentative Exploration of Sensitivity Distribution(SSDs)on FreshwaterFish to 3 kinds of PesticidesInstitute of Pesticide&Environmental ToxicologyCollege of Agriculture&BiotechnologyZhejiang UniversityHangzhou，PRChinaJune，2013浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中

2、特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得逝江态堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。，学位论文作者签名：乏款签字日期：劫膨年占月肛日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解逝姿态鲎 有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权迸婆盘鲎可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。本学位论文未经作者本人或导师或浙江大学允许，其他人不得擅自翻印或出版。学位

3、论文作者签名：乏叛导师签名：7签字日期：加净占月2，日签字日期：犟凰参驯；年多月2日浙江大学硕士毕业论文目录目录目录 。1摘要 4Abtract 第1章绪论 。711课题背景和研究现状 7111稻田农药和鱼类研究背景与现状 7112农药毒性和鱼类相关的国内外研究 10 113物种敏感性分布(SSD)研究背景与现状 15 12本文研究的提出和意义 18121 农药对鱼类的风险预测 18 122稻田施药与鱼类生长关系 18 123水生态环境安全评价 19第2章三种农药对12种淡水鱼和泽蛙的急性毒性SSDs 2021材料与方法 2l211 药剂与试剂 21 212仪器设备 21 213试验方法 22

4、 22鱼类驯养 23221仪器设备 23222驯养条件 23223 鱼类品种规格和来源 24 23结果与分析 252-31 96h急性毒性Lc50测定结果 25232鱼类对农药敏感性SSDsI出线绘制 28233根据SSDs计算HC5和PAF 3 11，浙江大学硕士毕业论文目录24小结与讨论 32第3章毒死蜱暴露下12种鱼和泽蛙的鱼脑AchE活性影响比较 3431材料与方法 34311 药剂与试剂 34 312器材设备 34 313蛋白含量测定方法 34 314毒死蜱暴露下鱼脑提取及鱼脑AchE酶提取方法 36 315酶活测定方法 3732结果与分析 37321蛋白含量测定 37322鱼脑Ac

5、hE测定结果 38323毒死蜱对鱼脑AchE作用的SSDs 。4233小结与讨论 一45第4章水沉积物体系中3种农药对4种鱼的毒性 4641材料与方法 46411试验材料 46412仪器设备 46413毒性试验步骤 47414样品前处理方法和检测方法 474153种农药的标准曲线绘制 4842结果与分析 48421 标准曲线和样品添加回收率 48 422水沉积物体系中鱼类急性毒性 49 423水沉积物体系中水和沉积物的农药残留监测结果 50 43小结与讨论 53第5章3种鱼对3种农药的生物富集及体内分布 54浙江大学硕士毕业论文目录51材料与方法 54511仪器设备和 54512试验材料 54

6、513富集试验方法 54514农药在鱼体内分布试验方法 55515残留检测方法 5552结果与分析 56521 添加回收率 56 522农药在水中的浓度变化 56523 富集过程中鱼肉中的农药残留 60 524农药富集过程中鱼体内各组织残留分布 65 53小结与讨论 69第6章总结与展望 7061总结与讨论 7062主要创新点 7263不足与展望 72附件1原药纯度分析 73附件2急性毒性测定中受试物浓度 75附件3水质参数测定 76附件4试验鱼种图片 78丢烤文献 80作者简介 。85致谢 86386浙江大学硕士毕业论文摘要摘要毒死蜱、丁草胺、三唑酮作为稻田常用的代表性农药品种，普遍存在于稻

7、田沟渠池塘河流水域中，研究它们对淡水鱼类的生态毒理效应具有十分重要的意义。本文研究了上述3种农药对12种淡水鱼和泽蛙的急性毒性及其物种敏感性分布(SSDs)、毒死蜱对鱼脑AchE活性的影响、水一沉积物体系中3种农药对鱼类急性毒性效应、以及在鱼体内的生物富集作用与分布。试验以9个科12种淡水鱼和泽蛙为对象，研究了淡水鱼对3种农药SSDs曲线的构建，用于敏感物种的筛选并计算出农药对鱼类的安全浓度，进而可根据环境实测农药残留的浓度来评价对鱼类安全性的生态风险。结果显示，太阳鱼、麦穗鱼和稀有绚鲫分别对毒死蜱、丁草胺和三唑酮最为敏感。相对于标准试验体系，在模拟池塘水一沉积物体系中，农药对鱼类的急性毒性效

8、应显著降低，水中农药明显向沉积物中转移。毒死蜱对12种淡水鱼和泽蛙的鱼脑AchE活性影响，研究结果表明，鱼脑中AchE活性均受抑制，影响最明显的是虹鳟，最不敏感为食蚊鱼。用96h鱼脑酶活数据绘制SSD曲线，将其与急性毒性LC50的SSD对比，并非完全吻合，说明鱼脑酶活抑制率与鱼的死亡率之间在一定程度上缺乏对应关系。选择代表性鱼种对3种农药的生物富集试验，结果显示，鱼体对毒死蜱富集系 数(BCF)最高、丁草胺次之、三唑酮在鱼体内几乎不富集。鱼体内富集的农药主 要分布于肠、肝脏和鳃等器官中。论文初步构建了12种淡水鱼类和泽蛙对稻田常用代表性杀虫剂(毒死蜱)、杀菌 剂(三唑酮)和除草剂(丁草胺)的敏

9、感性分布曲线，从种群死亡率和酶抑制率生化水平 上比较了12种代表性鱼类对毒死蜱的敏感性分布与差异，进一步分析了在模拟池塘 体系(水沉积物)中农药对鱼类急性毒性差异与环境效应，并明确了3种代表性农药 在鱼体内的富集作用与主要分布器官。研究结果为稻田常用农药对水生态环境中鱼 类安全的风险性评价提供了科学依据，丰富了水生毒理学的内涵。关键词：物种敏感性分布；淡水鱼；农药；急性毒性；乙酰胆碱酯酶；生物富集浙江大学硕士毕业论文AbtraetAbtractAs it is commonly used，chlorpyrifos，butachlor,and triadimefon a陀widespread i

10、n the paddy field，ditch，pond and riverThe research ecological toxicology of these three kinds of pesticides to freshwater fish is of great significanceThis paper discussed thetoxicology effect and Species Sensitivity Distribution(SSDs)of above three kinds of pesticides to 1 2 species of freshwater f

11、ish and one species of frog，influence of chlorpyrifos on AchE activity in the brains of 1 2 species of fish and one species of frog，the acute toxicity ofthe 3 kinds ofpesticides to fish in water-sediment system，and the bioaccumulation and distribution ofthe pesticides in fishFreshwater fish that bel

12、ong to 9 families and 1 2 species were tested in this research SSDs for the 3 kinds of pesticides on the freshwater fish was built for sensitive species selection and calculation of the safe concentration of the pesticides to the fishThe resultshowed that sunfish，Pseudorasbora parva，and Gobiocypris

13、mn岱were the most sensitive species for chlorpyrifos，butachlor and triadimefon separatelyCompared with the standard test system，the acute toxicity of pesticides to fish WaS significantly reducedin the pond water-sediment system，and the pesticides in the water significantly shifted to the sedimentStud

14、y of chlorpyrifos on AchE activity in the brain of 1 2 species of freshwater fish and the frog indicated that the AchE activity were all inhibitedThe results showed that the most obviously affected Was trout and the least WaS mosquitofishUsed 96h enzyme activity of fish brain to draw the SSD curve，i

15、t was found that the curve be not completely consistent with LCs0 SSDIt indicated that enzyme activity level and mortality of fishwere lack of corresponding relationThe representative fish species WaS used to conduct bioaccumulation test of three kinds of pesticidesThe results showed that bio-enrich

16、ment coefficient(BCF)ofchlorpyrifos Was the highest，butachlor took the second place，and triadimefon had almostno enrichment in fish bodyThe experiment showed that the pesticides were mainly distributed in the intestine，liver,gillThis paper preliminary builded up sensitivity distribution carve of 1 2

17、 kinds of freshwater fish and one species of frog to representative insecticide(chlorpyrifos)， herbicide(butachlor)and fungicide(triadimefon)which were commonly used in paddy fieldIt used population mortality and the level of enzyme inhibition rate to compare586浙江大学硕士毕业论文Abtractsensitivity distribut

18、ion and difference ofthe 1 2 representative fish and one frog to chlorpyrifosAnd further more the paper analysed the difference of acute toxicity of pesticides to fish in simulated ponds(water-sediment syetems)and environmental effect It defined the enrichment and the main distribution of the three

19、representative pesticides in fish bodiesThe research provided scientific basis for risk assessment of commonlyused pesticides to fish in ecological environment of paddy field and enriched the connotation of aquatic toxicologyKey word：Species sensitivity distribution；Freshwater fish；Pesticide；Acute t

20、oxicity；Acetylcholin esterase(AchE)；Biological enrichment686浙江大学硕士毕业论文第l章绪论第1章绪论11课题背景和研究现状111稻田农药和鱼类研究背景与现状2006年全国耕地12 17759万hm2(1827亿亩)【1】，稻田占有大范围的耕地面积， 南方为水稻种植区，同时稻田是农药的主要施用对象。稻田施药和排灌导致农药排 放到种植区沟渠、池塘、河流等水域中，从而影响水域中淡水鱼类的生长繁殖。淡 水鱼类作为水生生态系统食物链中的消费者，在营养级结构中充当第二营养级和第 三营养级，是水生生态系统中重要的代表性生物种类。农田，特别是稻田使用

21、农药因其田水渗漏、人为主动排水和降雨后产生地表迳流，水中农药随水、土迁移进入水域：其次是因卫生工作需要，如防治血吸虫寄主钉螺、防治蚊子幼虫以及防治水草时直接将某些农药施于水域【2】。农药在水环境中有较复杂的迁移动态，这和自然环境多影响因子有关。农药在水中的环境化学行为，包括农药的光化学降解、水化学降解以及农药对水生生物的毒性，杨仁斌等讨论了各种环境行为的机理和影响因子，指出环境因子在很大程度上影响农药的迁移和降解，可加速农药的降解【3】。在水稻、玉米等粮食作物及蔬菜、棉花、果树等经济作物的种植中，对病虫害的防治经常使用农药，有的作物作物与养殖水体邻近，常出现使用农药时鱼类急性中毒死亡事件，或者

22、经常使用农药，渗入养殖水体，造成水体慢性污染，而引起鱼类死亡【4】。单正军等建立了稻田鱼塘模拟生态系统，以研究氯唑磷农药在稻田一鱼塘模拟生态系统中的迁移、转化规律，及其对鱼、虾等水生生物的影响。结果表明，氯唑磷颗粒剂施入稻田后快速崩解并向水体释放，稻田水及稻田鱼沟水中最高浓度分别达0377 mgL和0084 mgL；施药4h后，将稻田水排入邻近鱼塘，水塘水体中氯唑磷最高浓度达0022 mgL。水生生物对氯唑磷较为敏感，养殖在模拟生态系统中的鱼、虾受到一定的危害。因此氯唑磷在稻田使用时，应注意其对水生生物的安全性【51。研究农药对鱼类作用的相关文献较多，稻田农药对淡水鱼类敏感性研究相对较少。农药

23、用于预防、消灭或者控制危害农业、林业的病、虫、草和其他有害生物，浙江大学硕士毕业论文第1章绪论正是因为农药具有这些特性，它的毒性会对大部分生物产生危害。农药在日常使用过程中，只有大约l作用于靶生物，其余的或残留于土壤中，或通过径流进入水域，影响土壤和水体中的生物。农药对水生动物的影响很大，并容易在水生动物体内蓄积【61。有关污染物对鱼类毒性的报道较多，例如：张彤等采用鲢鱼，鲫鱼，鲤鱼，金鱼，鳊鱼，草鱼，鳙鱼和罗非鱼等八种淡水鱼类为试验生物，研究了丙烯腈，乙腈，硫氰酸钠和二甲基甲酰胺等四种污染物对这八种鱼类的急性毒性效应和不同鱼类的敏感性【71。环境中生长激素也是影响鱼类生长的重要因素，有研究采

24、用放射免疫分析法分别测定了养殖与野生黑鲷、花尾胡椒鲷、军曹鱼、青鲈、白鲳5种常见湛江海域养殖鱼类肌肉中生长激素、雌二醇、孕酮、睾酮及绒毛膜促性腺激素的残留量。结果表明，在5种养殖与野生鱼类肌肉中均检出5种激素，各种激素的残留量依鱼类种类不同而有差异，在同种鱼类中的任一种激素残留量均是养殖鱼类显著高于相应的野生鱼类【引。农药作为环境污染物的一个大类，引起广大科研人员的关注，农药对水生生物的毒性作用也不容忽视，已有研究者开展稻田鱼塘模拟生态系统中农药对鱼类、虾类的风险。高亚男等研究了丁醚脲乳油和悬浮剂2种剂型对水生生物的急性毒性。结果表明，质量分数25丁醚脲乳油对斑马鱼、河虾为高毒，对河蟹为低毒；

25、质量分数50丁醚脲悬浮剂对斑马鱼为高毒，对河虾为中毒，对河蟹为低毒。在室内毒性试验的基础上，应用多层次生态风险评价方法，评价丁醚脲对稻田鱼塘模拟生态系统中水生生物的风险性。鉴于丁醚脲对水生生物有较高的风险性，为保护环境有益生物，应当禁止或限制其在稻田中使用【9】。水体中重金属含量对水生生物的影响也备受关注，例如水体的污染使镉在水生物体内得以富集，从而进入食物链，镉摄入人体内部被吸收后，排出非常缓慢，在 人体的生物半衰期很长，约为16-38年。镉在人体的肾和肝中蓄积，造成积累性 中毒，并可能引发癌症；在肾脏中蓄积还会引起高血压；镉对心脏亦有损害作用。水中含CdCl2为001 mgL时，能使鲤鱼在

26、818 h内死亡。孟晓红等采用鲤鱼为试 验生物，实验室模拟实际环境中镉在鱼体中的分布和蓄积，结果表明鱼体中肌肉部 分对镉的富集量最少，内脏的富集能力较强；鱼体各部位对镉的富集作用随时间的 增加而增加，并在四十至五十天左右趋平衡；鱼体中各部位对镉的生物富集作用存 在较大差异11 01。铬为动物营养所必需，饲料中添加不同形式的铬能一定程度上促进浙江大学硕士毕业论文第l章绪论动物的生长，提高饲料转化率，增强免疫，提高存活率。吡啶羧酸铬作为一种有机铬，已在畜禽饲料中广泛添加。江孝军等研究了吡啶羧酸对建鲤幼鱼内脏器官的影响，试验结果表明饲料中添加适量的吡啶羧酸铬对提高建鲤幼鱼的肠体指数、肠长指数、脏体指

27、数、头肾体指数和肝体指数有促进作用，对脾体指数有降低作用11】。 虹鳟鱼暴露于有机磷农药毒死蜱96 h，建立基准浓度(BMC)值范围对鱼脑乙酰 胆碱酯酶(Ache)的抑制。美国环境保护署(EPA)基准剂量软件被用于拟合数据。基准浓度确定了5、10和20一系列抑制水平，在一个实验检测极限水平为25。 Sandahl，JE等通过实验室毒死蜱BMCs与美国环保署96 h水质量标准和到的西北地 表水(虹鳟受威胁)检测到的浓度水平。美国环保署96 h水质量标准0083 mggL，低于BMC 025。毒死蜱的在两周内地表水流检测平均浓度为0127 mggL，和BMC025接近【l 21。Tilak等分别研

28、究了静态法和动态循环方法中丁草胺原药和丁草胺制剂 (50乳油)对黑鱼急性毒性。静态法24小时和48小时的丁草胺原药LC50分别为0297 mgL和0247 mgL，丁草胺制剂LCso分别为0636 mgL和0546 mgL。动态循环系统中原药LCso分别为0270 mgL和0233 mgL，制剂LCso分别为0567 mgL和0481 mgL【13】。该研究表明，静态法测得的LC50高于动态循环法；由于制剂中有效成分含量远低于原药，因而制剂测得的LC50高于原药；随着暴露时间增长LC50值会随之减小。刘毅华等评价了三唑酮对鱼类的毒性，采用静态试验法，研究了三唑酮对彭泽鲫的急性毒性作用和水体酸碱

29、度的影响，同时研究了彭泽鲫对三唑酮的回避反应。结果表明：三唑酮对彭泽鲫96hLC50值为1360 mgL，水体碱度的升高增强了三唑酮的毒性作用。彭泽鲫对三唑酮有明显的回避性能。极限回避浓度为348 mgL14】。Lin等对三个稻田主要除草剂丁草胺、禾草丹、甲氧除草醚进行了生物浓缩动力学和消解实验，生物材料为黑鲢(鳙鱼)。三个除草剂在高浓度和低浓度生物半衰期分别为116 d和231 d(丁草胺)，139 d和173 d(禾草丹)，56 d和45 d(甲氧除草醚)。在平衡状态时高浓度条件下BCF排序为禾草丹甲氧除草醚丁草胺，低浓度条件下BCF为丁草胺禾草丹甲氧除草醚。一室和双室模型被用来阐明生物浓

30、缩动力学，评估这些污染物对生物的影响时，一室模型适合预测丁草胺和禾草丹，双室模型适合预测甲氧除草醚【l51。浙江大学硕士毕业论文第l章绪论112农药毒性和鱼类相关的国内外研究Karen等通过毒死蜱对食蚊鱼(花鲻科)的短期暴露试验，观察到有机磷酸酯类 农药对实验室的和野生的鱼类脑部乙酰胆碱酯酶活动和脊椎屈服强度影响，分别将 鱼脑乙酰胆碱酯酶和脊椎弯曲强度选为指示器。试验表明已最低环境浓度范围的毒 死蜱也可能危害河口生物。食蚊鱼脊椎屈服强度指示器表现更为敏感，的情相同浓 度的毒死蜱对75实验室食蚊鱼有显著影响，而只对25野生食蚊鱼有显著影响。这些结果表明，实验室条件下乙酰胆碱酯酶和脊椎弯曲强度可作

31、为有机磷酸酯类农药短期暴露的敏感指标【16J。 Chang等在研究中发现，对成年雄性和雌性斑马鱼(Danio rerio)暴露于不同浓度的丁草胺(0、25、50、100m熠几)30 d，影响生殖和内分泌干扰评估使用繁殖力、条件因素(CF)，性成熟指数(GSI)、肝体指数(LSI)、血浆卵黄蛋白原TG)、性固醇激素和甲状腺激素水平作为指示终点。结果表明，丁草胺50 m鹇几和100 m熠几时斑马鱼繁殖力率均明显降低，鱼体内睾酮和雌二醇含量降低，甲状腺激素含量升高，不利于斑马鱼正常生殖，扰乱了甲状腺、性腺内分泌系绀171。余向阳等采用气相色谱质谱联用定性定量分析，建立了鱼体不同组织中二嗪农和毒死蜱残

32、留的检测方法，并应用于鲤鱼对2种农药的生物富集量测定。建立的测定方法对毒死蜱和二嗪农最低检测限分别为0001 mgkg和0005 mgkg，在添加浓度为005-一100 mgkg时，该方法的回收率为80-105。经10 d培养，鲤鱼肉、 肝脏和鳃对水中毒死蜱和二嗪农均有很强的富集作用，鱼鳃中富集农药量最大，鱼 体对毒死蜱的富集作用高于二嗪农【l引。韩克文在研究论文中论述了水果中三唑酮残 留用丙酮提取，经液液分配净化，用气相色谱电子捕获检测器测定，并用气相色谱 质谱进行确证【19】。程滢与张莘民采用火焰原子吸收分光光度法测定鱼内脏及河流底 泥中的铜。鱼内脏经组织捣碎机捣成匀浆后，加硝酸消解；底泥

33、则经氢氟酸和高氯 酸消化。该方法具有灵敏度高，精密度和回收率较好等特点【201。建立赣江鱼类中有 机氯农药残留的气相色谱测定方法。方法：采用索式萃取、浓硫酸净化、国产OV-17 毛细管色谱柱和ECD检测器，检测器温度为330。C、进样器温度为240C、柱温275。C、 载气压力为15 psi、分流比为1：50、尾吹气流速714 mlmin。加标平均回收率在 723-一957，RSD为420983。结论：该方法快速、有效，对赣江鱼类中 有机氯农药残留的测定具有好的适用性1211。张海燕建立了沉积物中多氯联苯和有机浙江大学硕士毕业论文第l章绪论氯农药等39种持久性有机污染物的同时测定方法。样品用正

34、己烷和丙酮(体积比为l：1)进行微波提取，提取溶液经凝胶色谱和弗罗里硅土净化，浓缩后采用气相色谱法测定。回收率在688-842，检出限为005 ngg-一025 ngg。方法适用于沉积物样品中多种多氯联苯和有机氯农药含量的同时测定【22。费勇等建立了淡水鱼类中多氯联苯和有机氯农药等36种半挥发性有机物的同时测定方法。样品用正己烷和丙酮(体积比为l：1)进行提取，提取溶液经凝胶色谱和弗罗里硅土两级净化，浓缩后采用气相色谱法测定，回收率为703-一848，检出限为005 ngg-020 ngg。该方法准确度和回收率较好，适合淡水鱼类中多氯联苯和有机氯农药含量的测定【23】。随着生态毒理学的快速发展

35、，国内外对鱼类的研究主要集中于分子水平【241，尤其是应用生物标志物来评价物质的毒性。谷胱甘肽硫转移酶(GST)代表了一系列解毒酶，这些酶能用带有疏电子中心的物质催化谷胱甘肽的转化，它不具有专一性，可以用来作为不能结合AchE活性点的农药监测的一种手段【251，另外还有采用肝细胞261、卵黄蛋白劂271、金属硫蛋fl(MT)281。鱼类毒性毒理在分子层面的研究有基因和蛋白研究，国内外关于化合物对鱼类基因毒性研究已有较多文献报道。Ali利用微核试验和碱性单细胞凝聚电泳进行基因毒性评价，试验中鲤鱼经过毒死蜱暴露，对鲤鱼腮、淋巴、血球细胞等组织基因检测分卡斤【291。国内有研究为预测和评价多种环境激

36、素对生物的联合毒性效应，通过对雄性鲫鱼卵黄蛋白原诱导作用探讨了1713雌二醇、170a乙炔基雌二醇、双酚A、辛基苯酚等几种环境雌激素联合作用的环境影响。确定了每种化合物的剂量效应曲线，混合物由单个化合物等毒性固定浓度比例混合而成，实验得出的混合物效应与通过浓度相加或反应相加作用模型计算得出的混合物效应比较，结果有很好的一致性【30】。 多溴联苯醚(PBDEs)作为一种新型的持久性有机污染物，在海洋环境中广泛 存在，对海洋生物的影响也日趋加大，孟范平等阐述了PBDEs在海洋浮游生物、底 栖动物、游泳生物体内的富集，其沿海洋生态食物链(网)的传递规律与毒性效应 【3l】。整治调查和可行性研究，生态

37、风险评估作为其中一项内容用于评价水生生物和 水栖野生动植物暴露于环境污染物的风险。评估影响的性质、程度、区域范围，污染物暴露场景、概念模型、测量端点、总结评估，这些都是开展评估的重要内容。利用沉积物质量效应评估方法，可评价污染沉积物对底栖无脊椎动物的潜在影响【321。目前使用农药在水生生物体上的生物富集和生物转化数据较少，Konwick使用虹鳟鱼幼鱼，将其暴露于饮食规定浓度，手性三唑类杀菌剂(糠菌唑、环唑醇、叶菌唑、浙江大学硕士毕业论文第l章绪论腈茵唑、戊菌唑、丙环唑、戊唑醇、氟醚唑、三唑酮)和一个手性杀虫剂(a-六氯环己 烷(a-HCH)，研究这些农药的生物富集和生物转化。研究发现三唑类杀菌

38、剂富集迅速 降解也迅速，容易生物转化，应关注其代谢产物和和可能造成的潜在环境影响；而 六氯环己烷作为持久性污染物富集降解均较慢，但无生物转化【3引。钱芸等采用体内染毒的方法，暴露24 h后取鱼脑测酶活力，以鲤鱼脑乙酰胆碱 酯酶(AchE)活力为指标，研究了有机磷农药对硫磷与氧乐果、甲胺磷涕灭威之间 的联合毒性效应。有机磷农药和氨基甲酸酯农药是目前最常用的两大类杀虫剂，同 时它们也都是乙酰胆碱酯酶(AChE)的强抑制剂【34】。为评价毒死蜱和丙溴磷的环境生 态风险，夏锦瑜等采用半静态法，测定这2种农药对鲫鱼(Carassius aumtus)的急 性毒性，以及在140、120和110 96 h-

39、LC50值的作用剂量下持续暴露14 d和在清 水中恢复7 d，对鲫鱼脑部乙酰胆碱酯酶(AChE)和羧酸酯酶(CarE)活性的影响(慢性毒性效应)。利用气相色谱法测定鲫鱼肌肉、鳃、肝脏中2种农药的富集量。 毒死蜱和丙溴磷对鲫鱼的96 h-LCso分别为O1849 mgL和01929 mgL。在110 96hLC50值的作用剂量下连续暴露14 d，毒死蜱和丙溴磷对鲫鱼脑部AChE的活性抑 制率分别为9536和9361，而对CarE的活性抑制率分别为7607和8303。 在清水中恢复饲养7 d后，酶活性均有不同程度的恢复。此外，在鲫鱼组织器官中 均检测到2种农药，且富集量都表现为肝脏鳃肌肉，其中，毒

40、死蜱较易在鱼体 内富集【35】。刘晓宇利用淡水鲫鱼肝脏为主要原材料提取乙酰胆碱酯酶(ACHE)，并 设计正交试验确定了鲫鱼肝脏中乙酰胆碱酯酶的最佳提取条件；通过酶抑制法衡量 敌敌畏、辛硫磷、三唑磷、乐果等四种不同种类有机磷农药对粗酶液的抑制作用； 将鱼肝和鱼脑中乙酰胆碱酯酶活性及蛋白含量的进行对比研究。研究结果表明：提 取液pH值、提取液种类以及原料与提取液的质量体积比对酶液的活性影响显著；被测四种有机磷农药中，敌敌畏对AChE活性抑制作用最强。鱼脑的AChE比酶活是肝脏的AChE比酶活的3-7倍【36|。氰戊菊酯对金鱼的24，48，72，96 h的半致死质量浓度分别为731，240，207，

41、125腭几，氰戊菊酯对金鱼的毒性极大，并有十分明显的时间效应。金鱼对氰戊菊酯的富集系数很大，可达1 10 41 10 5且肝和鳃的富集能力比肌肉要大371。于艳艳研究了将青鲻鱼长期暴露于不同浓度的全氟羧酸类物质全氟十三酸(PFlHDA)后的器官分布和富集系数。结果显示，PFTriDA最高富集在性腺；其次是卵、肝脏；浓度最低的部分是残体。除了性腺之外，该器官分布与野生中华鲟的一致在相同堑兰曼奎学亟毕业论文第1章绪论暴露浓度下，雄鱼体内各器官的PFTriDA的含量高于雌鱼，机理模型计算进一步表明高母子传递系数是造成雌雄差异的可能原因。随着PFTriDA暴露浓度的升高，鱼体内同一器官的生物富集系数(

42、BCF)呈现下降趋势【38】。有机磷农药(OPs)可专一性地抑制乙酰胆碱酯酶(ACHE)的活性，因此AChE可作为地表水遭受OPs污染的生物标志物(biomarker)。陈棵与孙志刚以淡水鲫鱼脑组织中的AChE为酶源，通过测定两种有机磷农药(马拉硫磷和甲基对硫磷)对鲫鱼脑AChE的抑制效应，分析了鲫鱼脑AChE监测地表水OPs的可行性。结果显示，鲫鱼脑AChE在清洁地表水中的最适反应条件为30 min，温度为37。C，pH为75。在低浓度OPs抑制下，酶活性抑制率随马拉硫磷或甲基对硫磷浓度的增加而增大，两者之间存在良好的线性关系(相关系数R099)。通过对20份地表水样品的监测表明，利用鲫鱼脑

43、AChE指示来监测地表水OPs的轻微污染是可行的【391。Njogu等研究8种有机氯农药在三种鱼中的残留和代谢产物：肯尼亚奈瓦夏湖的罗非鱼(Oreochromis leucostictus)、鲤鱼(Cyprinus carpio)、镜像鲤鱼(Cuprinusspectacularlus)。P,PDDT、P,P-DDE、P,P-DDD、七氯、环氧七氯、艾氏剂、狄氏剂和甲氧滴滴涕。收集了内瓦沙大湖2008年11月12月的鱼体样本，分析鱼体农药浓度(烬kg，湿重)范围为：七氯(0420-4185)，环氧七氯(未检出0291)，艾氏剂(04334733)，狄氏剂(未检出一0341)，P,P-DDT(未

44、检出-7261)，P,P-DDE(未检出6691)，P,PDDD(未检出-27153)，甲氧氯(未检出-28867)。物种之间农药残留水平差异很大，这归因于不同鱼体的营养地位和年龄体型大小。结果表明流域附近使用过有机氯杀虫剂，流域鱼体残留低于粮农组织世卫组织(FA0悯矿HO)的最大耐受限量。吴江平等采用GCMS分析方法测试了广东电子垃圾回收地水体沉积物中多氯联苯(PCBs)含量，并利用以前测定的底栖性鱼类(鲮鱼、鲫鱼和乌鳢)PCBs含量数据，计算了生物沉积物富集因子(BSAF)和生物放大因子(B)，研究底栖性鱼类对PCBs的富集能力及其影响因素。研究表明，沉积物中总PCBs含量达到245386

45、 mgkg干重，证实当地环境已受到PCBs严重污染。鲮鱼、鲫鱼和乌鳢的BSAF范围分别为005-252，001120和001503。根据乌鳢鲮鱼和乌鳢，鲫鱼食物关系计算的BMF范围分别为014223和014493，其中大部分PCB同系物的BMF1，表明乌鳢对PCBs具有生物放大作用。BSAF及BMF均与PCBs的Kow和氯原子取代数具有显著相关性，说明化合物的理化性质是控制其生物富集的主要因素【411。浙江大学硕士毕业论文第1章绪论鱼肉含有的蛋白质，脂肪，矿物质，维生素对人的健康起到重要的作用，因而被大多数人所青睐。由于有机氯农药具有较高的杀虫活性，曾被广泛使用。中国早已停产，但由于其性质稳定

46、在自然界不易分解属于高残留农药，残留于植物中有机氯农药，可通过“食物链”或其他途径进入动物体内，鱼类也会受影响。鲁宝权等根据淡水鱼在水中分布状况，选取了扬州市长江段生活在不同水层中三种鱼类为分析对象。选取容易富集有机氯农药的腹部肌肉为实验样品测定部位，采用加速溶剂萃取法前处理分析鱼肉中有机氯农药并对该分析方法进行完善，总结出能满足环境监测工作中对淡水河流中鱼类有机氯农药测定，并能及时掌握淡水鱼类中有机氯农药对人身健康状况的影响【42J。 有机磷农药(OPs)是已知的抑制乙酰胆碱酯酶(AchE)催化活性的环境毒物，在鱼类胚胎发育过程中，OPs可能对胆碱和非胆碱途径都有影响。Jacobson开展了

47、一个 毒死蜱代谢物(CPO)对斑马鱼亚急性毒性模型，将斑马鱼胚胎暴露于非致死剂量的 CPO中。结果表明，CPO的作用下胚胎发育中神经节细胞基因表达受抑制，而肌肉 纤维和烟碱乙酰胆碱受体(n AchE)没有明显受损【431。阿特拉津(ATR)和毒死蜱(CPF)广泛应用于农业，但导致了一系列的毒理学和环境问题。由于频繁使用对鱼和啮齿动物产生有潜在威胁。最近研究显示ATR和CPF可能导致氧化损伤，免疫细胞减少，抑制乙酰胆碱酯酶，并对鱼类繁殖、神经和免疫系统产生副作用【嗍。丁运华以鲢鱼、镛鱼和罗非鱼肌肉组织为材料，研究乙酰胆碱酯酶AChE的盐析提取方法及农药敏感性。结果表明，3种淡水鱼肌肉组织在55硫酸铵饱和度时得到的沉淀酶总活力最高，乙酰胆碱酯酶的比活力分别达到0264、0263、0221 Umg，纯化倍数分别为1222、1277、1190，回收率分别为27626、37621、2