地胆草腋芽茎段的离体培养研究

1、地胆草腋芽茎段的离体培养研究 摘要 为了探索地胆草组织培养的方法，试验以无菌的地胆草腋芽茎段为外植体，研究6-ba和naa不同激素水平配比对地胆草芽的诱导和继代增殖的影响。结果表明，适宜于地胆草芽诱导分化的培养基配方为ms+6-ba 1.5 mg/l+naa 0 mg/l，繁殖系数为2.6倍，适宜于地胆草芽继代增值的培养基配方为ms+6-ba 0 mg/l，繁殖系数为2.3倍。 关键词 地胆草；腑芽茎段；离体培养 中图分类号 r282.71 文献标识码 a 文章编号 1007-5739（2014）07-0098-02 study on stem segment with axillary bu

2、d culture of elephantopus scaber l. in vitro cheng jing 1 gao hong-hua 1 * gu xiao-chuan 1 zheng ding-hua 1 yu shu-hua 2 zhang yi-shan 2 fan gao-jun 1 wang xiu-quan 1 zhang zhi-yang 1 li yan 1 （1 rubber research institute，chinese academy of tropical agricultural sciences，danzhou hainan 571737； 2 chi

3、nese academy of tropical agricultural sciences） abstract to explore the effects of different time of hormones combination and concentrations in vitro culture of elephantopus scaber l.，using sterile elephantopus scaber l.stem with axillary bud as explants，effect of induction and mulitiplication of el

4、ephantopus scaber l.in different levels of hormone 6-ba and naa ratio was studied.the results showed that the better suitable for shoot induction of explants was culture of ms+6-ba 1.5 mg/l+naa 0 mg/l，propagation coefficient was 2.6 times，and the better suitable for secondary culture of explants was

5、 culture medium of ms+6-ba 0 mg/l，propagation coefficient was 2.3 times. key words elephantopus scaber l.；axillary bud；culture in vitro 菊科地胆草属植物地胆草（elephantopus scaber l.）为我国长江以南，尤其是华南地区常用的民间药物。港澳地区习称土蒲公英、地胆头。台湾民间又称灯竖朽、丁茄芋，多用于治疗胃病、肝炎、肾炎、支气管炎等1。西南地区少数民族民间亦喜用此药用植物，如中国民族药志记载傣、苗、瑶、壮、黎、侗、景颇、拉枯、基诺、布依族人民用此

6、药治疗牙痛、痢疾等病。东南亚国家传统医学文献中均有使用此种植物不同部位治疗发热、咳嗽、关节炎、水肿等的记载。南美洲的巴西民间认为它具有利尿、抗炎功效，非洲的尼日利亚、马达加斯加土著人则用此药作解热剂，治疗痢疾、关节炎等疾病2。因其较高的药用价值，目前在民间应用广泛，其中在广东、海南和港澳台地区作为药用食材，使用非常普遍，但由于长期进行营养繁殖，不仅用种量大，扩繁速度慢，还因连续种植使病毒不断积累导致种性退化，使其种植面积和数量逐年下降，严重影响了质量和产量的提高3-4。本文利用植物组织培养技术建立地胆草离体再生体系，为加快地胆草种苗繁殖速度，提供一定的理论依据5-6。 1 材料与方法 1.1

7、试验材料 1.1.1 材料处理。12月待地胆草种子全部成熟、果盘变干以后，用剪刀剪取果盘，进行收集。将收集好的果盘放在5 mm筛孔的筛子上用手进行揉搓，使种子和果盘分离，然后再用2 mm筛孔的筛子，将更纯净的种子筛出。将收集好的种子装入密封袋中，排掉空气密封好，放在黑暗干燥的实验柜中保存待用。外植体的灭菌：取成熟饱满的地胆草种子，用流动水冲洗10 min，在超净台上用75%酒精浸泡1 min，用0.1%升汞灭菌15 min，无菌水漂洗57次，然后用解剖针剥开种子顶尖部位，接种在盛有ms培养基的培养皿中；将种子发芽的地胆草植株接种到盛有ms培养基的培养瓶中培养50 d左右。芽的诱导分化：将培养出

8、来的地胆草无菌苗，切除叶片，用解剖刀将地胆草截取成2 cm左右带腋芽的茎段（图1），注意不能伤到芽点，放在无菌滤纸上吸干后接入含6-ba和naa的ms培养基中培养45 d左右。继代增殖：诱导培养基上萌发出的丛生定芽（图2）长到带2片或2片以上叶片的时候，切取单芽接种在继代增殖培养基中进行增殖培养（图3）。生根培养：将高2 cm以上、带有2片叶的健壮小苗切下，转入含0.1 mg/l naa的ms培养基中进行生根培养（图4）。 1.1.2 培养条件。培养温度为（282），光照强度1 2001 500 lx，每天光照16 h，培养基中琼脂的含量为2.5 g/l，蔗糖的含量为30 g/l，ph值5.8

9、。 1.2 试验设计 1.2.1 芽的诱导分化试验。将无菌的地胆草茎段接种在添加不同浓度的6-ba和naa的ms培养基中，接种30 d后统计剩余外植体数、褐死数、抽芽外植体数、愈伤数、抽芽总数等确定适宜芽分化的培养基。激素浓度设置9个处理，分别为：ms+6-ba 0 mg/l+naa 0 mg/l；ms+6-ba 0.5 mg/l+naa 0.05 mg/l；ms+6-ba 0.5 mg/l+naa 0 mg/l；ms+6-ba 1.0 mg/l+naa 0.05 mg/l；ms+6-ba 1.0 mg/l+naa 0 mg/l；ms+6-ba 1.5 mg/l+naa 0.05 mg/l；m

10、s+6-ba 1.5 mg/l+naa 0 mg/l；ms+6-ba 2.0 mg/l+naa 0.05 mg/l；ms+6-ba 2.0 mg/l+naa 0 mg/l。 1.2.2 继代增殖试验。诱导培养基上萌发的不定芽长到带2片和2片以上叶片的时候，切取单芽接种在添加不同浓度的6-ba和naa的ms培养基中，24 d后观察其增殖倍数。激素浓度设置6个处理。继代培养基为以下6种，分别为：ms+6-ba 0 mg/l；ms+6-ba 0.05 mg/l；ms+6-ba 0.50 mg/l；ms+6-ba 1.00 mg/l；ms+6-ba 1.50 mg/l；ms+6-ba 2.00 mg/

11、l。 1.3 数据统计与分析 分别记录芽的诱导分化、增殖、生根情况，并用excel 2003进行数据统计与分析。 2 结果与分析 2.1 不同激素配比条件对诱导芽分化的影响 从表1可以看出，培养基ms+6-ba 0.5 mg/l+naa 0 mg/l、ms+6-ba 1.5 mg/l+naa 0 mg/l、ms+6-ba 2.0 mg/l+naa 0 mg/诱导的不定芽数量明显优于其他几个培养基，其中以培养基ms+6-ba 1.5 mg/l+naa 0 mg/l诱导的芽数量最多，诱导率最高达2.6倍。随着6-ba浓度的升高，诱导芽的数量增加，当6-ba浓度大于1.5 mg/l时，诱导芽的数量开

12、始降低；在同一6-ba浓度水平下，低浓度的naa更有利于芽的诱导。 2.2 不同6-ba浓度对芽继代增殖的影响 从表2可以看出，ms+6-ba 0 mg/l、ms+6-ba 1.50 mg/l、ms+6-ba 2.00 mg/l培养基诱导的不定芽数量明显优于其他几个培养基，其中以ms+6-ba 0 mg/l培养基诱导的芽数量最多，平均抽芽率为260.94%，诱导率最高达5倍，平均诱导率为2.3倍。 2.3 生根培养效果 将以上获得的不定芽转入生根培养基中进行生根获得64株强壮的地胆草植株和32株弱小且根小的植株。转入ms培养基中能生根的有93株，生根率达96.9%。然后转入沙床进行炼苗（图5）

13、，最后进行大田移栽（图6）。 3 结论与讨论 通过不同激素配比试验获得了适宜于通过组织培养获取无菌地胆草植株的芽的诱导分化和芽继代增殖的培养基（下转第103页） （上接第99页） 配方，为以后更广领域的研究提供了条件。通过本试验方案获得无菌地胆草的增殖系数为5，由于选择试验材料及方法的局限，导致繁殖系数还较低，今后的研究可以考虑运用其他几种激素进行配比，可能会获得更好的试验结果。 4 参考文献 1 曹晖，成文，毕培曦.地胆草属药用植物的研究概述j.国外医学中医中药分册，1998，20（2）：11-15. 2 曹晖.第二届中国新医药博士论坛学术会议论文集摘要c/北京：国家科委生命科学技术发展中心，1996：19. 3 王建军，刘宇婧，徐家星，等.地胆草属药用植物研究进展j.