杯叶海绵和厚叶解曼藻次级代谢产物及其生物活性的研究

1、杯叶海绵和厚叶解曼藻次级代谢产物及其生物活性的研究 谨以此论文献给所有关心和帮助过我的人们杯叶海绵和厚叶解曼藻次级代谢产物及其生物活性研究.加、警学位论文完成日期:指导教师签字:二琢答辩委员会成员签字:.、 搠比懈扔毒匆一妇以。/一?独创声 明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含未获得洼翅遗直基丝盂要挂型直盟笪奎拦亘窒或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。庞 签字日期:力/年,月

2、至/日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。本人授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到中国学位论文全文数据库,并通过网络向社会公众提供信息服务。保密的学位论文在解密后适用本授权书办脚沦 者签名学位 文作 导师签字:签字日 : 年期件叫签字日期:力年月日力嘲四基金资助:国家自然科学基金;国家教育部高等学校博士学科点专项科研基金杯叶海绵和厚叶解曼藻次级代谢产物

3、及其生物活性研究摘 要海洋特殊的生态环境高压、高盐、缺氧、避光等,赋予了海洋生物独特的生存机制,代谢产生了大量的结构新颖、活性显著的次级代谢产物,成为创新药物以及先导化合物筛选发现的宝贵资源。本研究依据海洋天然产物研究方法,对中国南海杯叶海绵中的活性次级代和日本北海道海域厚叶解曼藻谢产物进行了初步研究。综合运用各种色谱分离技术 一,等和现代波谱分析技术,等,从两个物种中分离得到个单体化合物,鉴定了其中个化合物的结构,其中个为新化合物。从海绵中分离鉴定了个化合物的结构,分别为二倍半萜?, , ,二萜一,一,习,一,?,倍半萜一一 一?,?够筇一? ,? ,甾体,伊,?伊,蒽醌,核苷,不饱和醇?

4、。其中化合物?,为新化合物,化合物为首次从海绵中分离得到。从厚叶解曼藻足中分离得到个化合物,分别为甾体,一一,一,一一, , ,一, ,伊 ,三萜,一,二萜,苯衍生物一一和直链醇.。这些化合物均为首次从该物种中分离得到,其中化合物为首次从藻类中分离得到。采用多种生物活性模型抗附着、鱼毒、卤虫致死、克藻、抗菌、抗肿瘤等对次级代谢产物的生物活性进行了评价。海绵来源的化合物,表现出显著的抗附着活性,其中和的.嵋.;化合物和还显示出较强的鱼毒活性;以上结果表明二倍半萜类化合物在该海绵的化学防御中起着关键作用。这些活性化合物显示了进一步研究的价值。对杯叶海绵和厚叶解曼藻中次级代谢产物及其生物活性的研究,

5、为进一步探讨其化学防御物质及作用机制作了基础性铺垫,为化学生态学及相关药物的研究提供了基础资料。关键词:杯叶海绵;厚叶解曼藻;次级代谢产物;生物活性;化学生态学?, ,.、廿 , 、杭 . , . , , . ,. , ,一,一 ,一,?一,一,一,?,一,?,. 弱,. ,. ,一, 似, ,靳,。,一.,辘,., .,. , . . . .比,.:, ,从杯叶海绵中分离鉴定的化合物.:毪儿土洲从厚叶解曼藻中分离鉴定的化合物柏缩写注释缩写 全称 注释反相硅胶?高效液相电喷雾质谱.电子轰击质谱 红外光谱紫外光谱核磁共振 核欧沃豪斯效应相关谱异核多级量子相干 异核多键相关? 核欧豪斯效应分光光度

6、法目 录第一章前言属海绵次级代谢产物及其活性研究进展.属海绵中的型二倍半萜类化合物.中国南海海域?一:?一.新几内亚海域.澳大利亚大堡礁海域一.其他海域?.属海绵中的溴二苯醚类化合物?.属海绵中的其它结构类型的化合物?。褐藻次级代谢产物及其活性研究进展.褐藻中的二萜类化合物.褐藻中的酚类化合物?.褐藻中的其它结构类型的化合物。本研究的目的和意义第二章杯叶海绵中次级代谢产物及其生物活性的研究一弓言?. 实验部分.实验材料与试剂.实验仪器?.:.实验方法?.粗提物及各相浸膏的获得?.生物样品中次级代谢产物的分离和纯化?.次级代谢产物的结构鉴定?.抗附着活性模型.鱼毒活性模型.卤虫致死活性模型?.克

7、藻活性模型.抑菌活性模型.抗肿瘤活性模型结果与讨论. .杯叶海绵中次级代谢产物的提取与分离?.杯叶海绵中次级代谢产物的结构解析.新化合物的结构解析.其他化合物的结构解析.化合物的波谱数据.杯叶海绵中次级代谢产物的生物活性评价?一.抗附着活性评价.鱼毒活性评价.卤虫致死活性评价?.克藻活性评价.抑菌活性评价.杯叶海绵中次级代谢产物构效关系的探讨?一.二倍半萜类化合物构效关系探讨?.二萜类化合物构效关系探讨小结?.第三章厚叶解曼藻 中次级代谢产物及其生物活性研究?.弓言?.实验部分?一.实验材料与试剂?一.实验仪器见第二章.?.实验方法见第二章.?结果与讨论?.厚叶解曼藻中次级代谢产物的提取与分离

8、.厚叶解曼藻中次级代谢产物的结构解析?.化合物的波谱数据. .厚叶解曼藻中次级代谢产物的生物活性评价.抗附着活性评价.鱼毒活性评价.卤虫致死活性评价?.克藻活性评价.抗肿瘤活性评价,、结?.结论与创新点结论.创新点.研究展望.参考文献?.致 谢.附 图一杯叶海绵和厚叶解曼藻次级代谢产物及其生物活性研究第一章前言海洋生物的数量占地球生物种群数量的%以上,而且由于海洋这一独特的生存环境高压、高盐、缺氧、避光等,使得海洋生物的体内合成、代谢等都与陆地生物有着明显的不同,在其生命过程中能够代谢产生一些结构新颖、生物活性显著的次级代谢产物,这为创新药物研究以及先导化合物筛选发现提供了丰富的化合物资源。以

9、种类繁多的海洋生物资源为对象进行药物开发的系统研究始于上世纪年代,经历近半个多世纪的探索和发展,在海洋药物研究特别是海洋活性天然产物方面已经取得了巨大的成就。迄今,全世界范围内己从海洋动植物及微生物中分离得到新化合物多种。已发现的海洋天然产物包括萜类、生物碱、肽类、大环内酯、醌类、聚醚、黄酮类、甾体等多种类型,而每种类型的化合物中又包含着许多结构不同的化合物。近年来,随着生物技术的迅猛发展和提取分离、分析测试等技术的进步与更新,为海洋药物的发展提供了更为强劲的动力。海绵等海洋无脊椎动物及海藻是海洋天然产物研究的重点物种。已从海绵、海藻等生物中分离获得了大量的各种结构类型的化合物,显示了潜在的应

10、用前景。以下综述了海绵以属为例和褐藻中次级代谢产物的研究进展。属海绵次级代谢产物及其活性研究进展海绵动物门,也称多孔动物门,是低等多细胞动物一个特殊的分支,分为寻常海绵纲、六放海绵纲、钙质海绵纲、硬骨海绵纲四纲,约有一万种,其中寻常海绵纲占%。海绵中富含各种次级代谢产物,在已发现的余种海洋天然产物中,来源于海绵的就占/以上。目前,已从海绵中分离出的化合物主要有萜类、生物碱、甾醇、肽类、大环内酯类等结构类型,许多具有罕见的结构,并具有抗癌、抗菌、抗病毒等显著的生物活性,己成为海洋药物研究开发最重要的生物资源之一。.属海绵属于寻常纲网角杯叶海绵和厚叶解曼藻次级代谢产物及其生物活性研究海绵目科。从上

11、世纪年代开始,该属海绵就是海洋天然产物研究领域的热点。目前针对于属海绵的化学成分研究多集中在只,户 ,只等,种。已得到的化学成分主要结构类型包括型二倍半萜类、二溴苯基醚类、二萜类、甾体类、磺酸类以及核苷类等,其中以型二倍半萜类化合物最为丰富而。下面按照结构类型对这些化合物及其相关药理活性进行概述。.属海绵中的型二倍半萜类化合物型二倍半萜类化合物为属海绵中最为典型的活性次级代谢产物,其在海绵化学防御中起着关键性作用,还被认为是海绵在化学分类学上的代表型标记【。迄今为止,海洋天然产物中,型二倍半萜类化合物已超过多个,而且大多数型二倍半萜类化合物都表现出了良好白酶抑制剂活性【】等,具有潜在的药用价值

12、。根据核心骨架的不同,型二倍半萜类化合物还可分为四元环二倍半萜和五元环二倍半萜两类。以下根据从采自不同海域海绵中分离得至型二倍半萜类化合物分别介绍如下:.中国南海海域近二十年来,中山大学化学学院等相关研究小组已从中国南海南沙和西沙海域的该属海绵中分离得到了个新的二倍半萜类化合物。他们从海绵户.【】、孓图.,中分离得到了化合物其中化合物 与【一、?【、?【,】得到了化合物和对人肿瘤细以及 乇】图,其中胞表现出一定的细胞毒性,为腭?。年,等还从该属海绵中分到了图?。另外,年,等还从海绵 图.,其中化合中分离得到了三个二倍半萜类化合物物具有细胞毒活性,对淋巴白血病细胞.的为嵋?。这些化合杯叶海绵和厚

13、叶解曼藻次级代谢产物及其生物活性研究物除了、为四元环二倍半萜外,其它均为五元环二倍半萜。. 黟毗一 , . . . . . . . 。. 图中国南海属海绵中的二倍半萜类化合物杯叶海绵和厚叶解曼藻次级代谢产物及其生物活性研究.新几内亚海域从新几内亚部分海域的该属海绵中也有分离得到多种类型的二倍半萜类化】从采自新几内亚莱城岛附近海域的海合物。年,和绵 中分离得到了一个新的二倍半萜类化合物图.。同年,等也从该海域的同种海绵中分离得到了四个新的二倍半萜类化合物图.。此外,年,等【】还从新几内亚巴布亚海域的中分离得到了个新的二倍半萜类化合物,分别为图.,这些化合物对伊连环蛋白厂的络合物无活性。图从新几内

14、亚海域属海绵中的二倍半萜类化合物.澳大利亚大堡礁海域澳大利亚大堡礁海域属海绵中也含有二倍半萜类化合物。杯叶海绵和厚叶解曼藻次级代谢产物及其生物活性研究半萜图?。年,和【】从海绵中分离得到了两个二倍半萜图.。年,等【】也从中分离得到了一个五元环二倍半萜类化合物图一。. 图澳大利亚大堡礁海域属海绵中的二倍半萜类化合物.其他海域此外,从其他海域中的该属海绵中也有分离得到多种二倍半萜类化合物。年,等【】从印尼望加锡附近海域的&腑厂瓶印馏如属海绵中分离得到了八个二倍半萜类化合物图.;年,等【】也从该海域的海绵.中分离得到了六个二倍半萜类化合物图.,其中,化合物等从采自,具有.蛋白酶抑制剂活性。年,印度洋

15、安曼达和尼柯巴岛附近海域的海绵中分离得到了四个二倍半萜中类化合物图一。年,等【】从印西太平洋海绵分离得到了五个具有抑制病毒被膜介导融合作用的五元环二倍半萜类化合物她图。年,等【】从马达加斯“图.,其中化合物具有不常见的氧杂七元环结构。杯叶海绵和厚叶解曼藻次级代谢产物及其生物活性研究 奎矗 图其他海域属海绵中的二倍半萜类化合物.属海绵中的溴二苯醚类化合物该属中已报道的溴二苯醚类化合物多为从帕劳海域海绵中分离得到的,体现出一定的地域性。年,等瞄从采自帕劳的海绵中分离得到了五个溴二苯醚类化合物,分别为图。这些化合物对巨藻 具有杯叶海绵和厚叶解曼藻次级代谢产物及其生物活性研究抑制活性,它们的值为. .

16、;当它们浓度为. .时,还对多种微藻包括、 具有抑制作用。年,等又从该种海绵中分离得到了十二个溴二苯醚类化合物,分别为、图.。其中,化合物、对海星卵母细胞微管的形成和海星卵母细胞减数分裂进入成熟期具有抑制作用,分别为.,.,.和.,.,.州。其他化合物在州时没有表现出活性。年,等刚又研究了化合物,对.受激的.细胞中.生成的影响,结果表明,当浓度为时,化合物、能促进.的生成。卧卧分洲审卧晰卑。直卧町众审: . : :,: , : : 。,.: .: . .:. .酊:。:,。: 。 。,啼卧奉三带 ,众婶卧电斡:。.属海绵中的其它结构类型的化合物除了二倍半萜类化合物和溴二苯醚类化合物外,研究者们

17、还从该属中分离得到了少量其它类型的化合物,包括二萜类、甾体类、磺酸类以及神经酰胺类等。两个含有呋喃环结构的二萜类化合物 和,.?分别从澳大利亚大堡礁海域海绵尸】和】中分离得到图.。该属中报道的甾体一般比较常见,如等年从中国南海属海绵中分离得到了七个常见的甾体。另外,年,等从中国南海海绵中分离得到了一个新的甾体骼图.。此外,年,等还从菲律宾附近海域的.属海绵中得到了三个磺酸类化合物【】图.,这三个化合物对.筇有抑制作用。年,等】从澳大利亚大堡礁海域的属海绵中分到了五个常见的核苷类化杯叶海绵和厚叶解曼藻次级代谢产物及其生物活性研究合物。年,锄等【还从中国南海的属海绵中分离得到了。一个神经酰胺类化合

18、物. .。一./、占。.图属海绵中的其它类化合物褐藻次级代谢产物及其活性研究进展褐藻是一类较高级的藻类,约有属,种。根据世代交替的有无和类型,一般分为个纲,即等世代纲、不等世代纲和无孢子纲。除少数种属生活于淡水中外,绝大部分生活在海洋中,营固着生活。褐藻从呈异丝体的附生藻水云属,到长? 的大型褐藻海带属、巨藻属及属,其形状和大小各异。褐藻曾是碘和钾碱的主要来源,现仍是褐藻胶的重要来源。褐藻中许多种类都可食用,同时也可药用,如海带鹿角菜,昆布 ,裙带菜羊栖菜 等。相对于红藻来说,对褐藻中次级代谢产物的研杯叶海绵和厚叶解曼藻次级代谢产物及其生物活性研究究较少。迄今,己从褐藻中分离得到的化合物多为萜

19、类化合物,此外还有酚类、甾体类、醌类、脂类、糖类等化合物。.褐藻中的二萜类化合物从褐藻中分离得到的萜类化合物,除少量的倍半萜外,主要为二萜。二萜类化合物包括线型二萜 、型二萜、型二萜和混源型二萜等结构类型。.线型二萜从褐藻中获得了一系列线型二萜类化合物。如,年,等四从采自大西洋摩洛哥海域的褐藻 中分离得到种线型无环二萜图.:年,等】从采自大西洋布里坦尼南部海域的同种褐藻丑中分离得到了另外种线型二萜。推测,这些线型二萜是由一衍生而来。:图褐藻中线型二硒化合物的结构.型二萜褐藻中还存在型二萜化合物。如,年,等【】从采自巴西海域的褐藻中分离得到一种型二萜化合物图一,对海胆、鱼类等海洋食草动物具有拒食

20、作用,是 的主要次级代谢产物。杯叶海绵和厚叶解曼藻次级代谢产物及其生物活性研究.型二萜在褐藻中还发现型二萜化合物。年,等【】从采自巴西中分离得到两种型二萜类里约热内卢海域的褐藻化合物,.和,.,图?,对豚鼠脑和肾的.酶有抑制作用,当浓度为. 时,抑制率分别为%和%。?,?.。,.混源型二萜从褐藻中发现了一系列的混源型二萜化合物。年,等【】从褐藻中分离得到种色原烯类混源型二萜,在测定中表现出较好的抗氧化活性。其中,和图.还对丁基胆碱酯酶有抑制作用。 年,等【】从采自法国里维埃拉海域的褐藻.中分离得至和 图一 ;年,等, , 和图.;年,等【刀从澳大利亚南部海域的褐藻/中分离得至,和 图,这些化合

21、物均为混源型二萜。年,等【从大西洋摩洛哥海域的褐藻。僦咄施分离得到种新,抗贻贝碳酸氧化酶活性,对牡蛎和海胆的幼体无毒性。杯叶海绵和厚叶解曼藻次级代谢产物及其生物活性研究. .:. . . :. . 脚., .和础中混源型二萜图.褐凇,化合物的结构图.褐藻 中混源型二萜化合物的结构.其他类型二萜匀,等【】从褐藻讹叻淞魄讼胁淞中分离得到种二萜类化合杯叶海绵和厚叶解曼藻次级代谢产物及其生物活性研究物 , ,和图?,对多种肿瘤细胞具有强细胞毒活性表。、:.,/弋/。. .:。.:.图褐藻中二萜类化合物的结构表褐藻.中二萜化合物的细胞毒活性,?住对照年,等从热带褐藻耙们幻中分离得至 ,和 图,对温带和热

22、带的草食性鱼类和中分离得到了种二萜类化合物,其中和具有新颖的骨架图.。这些化合物对幼小鲍鱼表现出拒食活性。生,等【从澳大利亚南部海域的褐藻咖纰舶加册括中分离得到种萜类化合物,其中,和杯叶海绵和厚叶解曼藻次级代谢产物及其生物活性研究为环松烯二元醇结构图。三.:. . 伦:. . 图.褐藻.和 萜化合物的结构.褐藻中的酚类化合物褐藻中含有大量褐藻酚类化合物,根据其组成可以分成简单酚类化合物和多酚类化合物。褐藻酚类化合物一般具有抗菌、抗氧化、细胞毒等活性。年,等【】从褐藻 昆以和中分离得到种间苯三酚衍生物有抗菌活性,还图.,对 和希能够抑制海胆受精卵的分裂,对卤鲋 虹鲻鱼硅藻具有毒性。图?褐藻中苯三

23、酚衍生物的结构杯叶海绵和厚叶解曼藻次级代谢产物及其生物活性研究年,等从采自日本南部海域的褐藻肪厅切口而旭口中分离得到单宁类化合物图。研究表明,该化合物具有抗过敏活性,能够抑制细胞组胺的释放,其为.。.图褐藻 中酚类化合物的结构年,等从褐藻阳中分离得到种酚类化合物,和 ,一一”,”,?,一, 图.。其中,和,.分别对人类嗜碱性粒细胞和大鼠嗜碱性白血病细胞.组胺的释放有抑制作用,分别为.岬和.。杯叶海绵和厚叶解曼藻次级代谢产物及其生物活性研究洲洲帅洲洲纹丫审洲.?。.。.;.图.褐藻 中多酚类化合物的结构.褐藻中的其它结构类型的化合物研究者们还在褐藻中发现了一些甾体化合物。女年,汤海峰等】从采中分

24、离得到了种甾醇类化合物自中国东海南麂岛的褐藻铁钉菜/【,.过氧麦角甾.,.二烯.醇,马尾藻甾醇,岩藻甾醇,.谷甾醇和胡萝苷。其中,岩藻甾醇对.白血病细胞有显著的细胞毒性,为.嵋?。还得到了少量结构独特的醌类化合物。如年,等从采自日本富山海中分离得到种质体醌及其湾的褐藻衍生物?图.,显示了较强的抗氧化活性及对结肠癌细胞.的细胞毒活性。杯叶海绵和厚叶解曼藻次级代谢产物及其生物活性研究 此外,研究者还从褐藻中分离得到了一些脂类化合物和糖类化合物。如等【研究表明, 对红细菌科细菌 有抗中的菌活性,而且能够抑制硅藻矽刀加舭似胁耙一姗的生长. ?,在浓度为嵋?。时还能抑制石莼研阳伽,黝孢子的繁殖。还有研究

25、表明,褐藻多糖硫酸酯具有抗氧化活性,能抑制活性氧自由基的生成并促进其清除【】。本研究的目的和意义大量文献查阅表明,海绵和褐藻中存在大量结构独特的次级代谢产物,而且许多都具有显著的生物活性,包括细胞毒、抗菌、抗炎、抗真菌、抗.、鱼毒、抗氧化等。这些活性次级代谢产物不仅是海洋药物先导化合物的重要来源,而且在物种本身的化学防御中也发挥着重要的作用。本研究选择采自中国南海三亚海域的杯叶海绵和采自日本北海道海域的厚叶解曼藻为研究对象,以海洋化学生态学的研究方法为指导,综合运用天然产物化学色谱分离手段和现代波谱学技术,对两个物种中的次级代谢产物进行了分离鉴定,并运用多种活性模型评价次级代谢产物的生物活性和

26、化学防御作用。本研究不仅为海洋天然产物化学的研究提供了新的研究思路,而且为海洋化学生态学的探讨和海洋药物先导化合物的发现提供了基础资料。杯叶海绵和厚叶解曼藻次级代谢产物及其生物活性研究第二章杯叶海绵中次级代谢产物及其生物活性的研究引言以分子中含有四元环或五元环结构为特征的倍半萜类化合物是目科海绵中比较典型的次级代谢产物。迄今为止,在海洋天然产物中,己报道的该类型化合物已超过多个。该类型的许多化合物不仅具有良好的药理活性,包括细胞毒、抗菌、抗炎、抗真菌、抗.、鱼毒【以及.蛋白酶抑制剂活性【】等,而且它们在海绵自身的化学防御功能中也发挥着重要作用。本研究中,我们对采自中国海南三亚梅山海域的杯叶海绵

27、.进行了次级代谢产物的分离鉴定以及相关生物活性的研究。文献报道表明】,该物种中存在大量结构新颖、活性显著的.倍半萜类化合物。本研究对该物种进行进一步的研究,综合运用正相和反相硅胶柱层析、凝胶柱层析以及半制备从%乙醇提取物中分离获得个单体化合物,已鉴定出个化合物的结构,其中个为新化合物。实验部分.实验材料与试剂实验材料:杯叶海绵.样品于年采自于海南三亚梅山海域。由荷兰国家自然生物多样性研究中心的.教授鉴定,样品标本保存于中国海洋大学海洋医药学院药用生物资源标本室。实验试剂:冰醋酸、正丁醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、石油醚.。、二氯甲烷等均为分析纯,甲醇为色谱纯和分析纯,水为重蒸水。%硫酸的乙醇显色剂

28、:香草醛.浓硫酸%浓硫酸的香草醛饱和溶液;溶液;碘。杯叶海绵和厚叶解曼藻次级代谢产物及其生物活性研究.实验仪器高效液相色谱仪公司泵,二极管阵列检测器,自动进样器柱:,瑞典公司?型质谱仪美国公司.型核磁共振波谱仪本电子公司型红外波谱仪/色质联用仪色谱柱.,旋转蒸发仪德国公司.型三用紫外分析仪上海顾村电光仪器厂中国分装一凝胶色谱填料反相.层析硅胶板德国公司柱层析硅胶与正相薄层层析板青岛海洋化工厂层析用玻璃减压色谱柱天津公司.实验方法.粗提物及各相浸膏的获得将冰冻的生物样品粉碎,然后用%乙醇和氯仿一甲醇混合液:各提取次,提取液合并,经过真空减压浓缩得到总浸膏。将总浸膏悬浮于蒸馏水中,然后用至倍体积的

29、乙酸乙酯萃取次,减压浓缩各次的萃取液并合并,分别得到乙酸乙酯浸膏和水相浸膏。密封保存在低温条件下备用。.生物样品中次级代谢产物的分离和纯化系统梯度洗脱。将洗脱液减压浓缩,并用薄层色谱跟踪检测合并,得到极性相似、化合物分布相对集中的几亚个组分。各个亚组分再运用各种硅胶柱层析凝胶柱层析以及半制备高加压、常压、反相硅胶柱层析、杯叶海绵和厚叶解曼藻次级代谢产物及其生物活性研究效液相色谱等方法进行分离和纯化。化合物的纯度是运用薄层色谱和分析高效液相色谱来确定的。流动相条件:甲醇/水溶液,流速为/;柱温箱:;检测器:紫外检测器。.次级代谢产物的结构鉴定化合物结构的是通过,.,差谱等波谱和光谱学技术,结合其

30、理化性质, 。来鉴定的。其中 的分辨率为 的分辨率为.测定条件:溶剂:甲醇:水:溶液;流速:皿一;电压:锥孔电压 ,毛细管电压 ;测定时运用空白压片法。.抗附着活性模型采用藤壶幼虫进行实验抗附着活性测定,由香港科技大学钱培元研究组协助测定。测试样品的指标:附着的幼体,未附着的幼体,死亡幼体。幼体附着百分率的计算方式:金星幼体附着率附着的金星幼体只数/金星幼体总数%。.鱼毒活性模型采用斑马鱼 胚胎进行鱼毒实验】。待测样品按一定浓度加入斑马鱼卵培养液中,依次在,在倒置显微镜下观察胚胎发育情况,将给药组与对照组进行比较。记录发育过程中代表性的毒理学终点,计算各.软件计算各化或值。采用对实验数据进行处理;用合物对受试生物的毒性。.卤虫致死活性模型卤虫 卵孵化率为%.%,购于海风集团。取卤虫三角瓶中,加入处理过的海水卵 ,用充气泵缓缓充气,置于水浴中孵化 ,除去卵壳及未孵化的卵,获得卤虫幼体活体备用。海水处杯叶海绵和厚叶解曼藻次级代谢产物及其生物活性研究理方法:天然海水,煮沸,棉花过滤,抽滤掉杂质后备用。卤虫致死活性实验依照的改良法阻,取孔培养板,每孔加含卤虫幼体的溶液每孔个卤虫,制成测试培养板。将粗提物、各有机相浸膏及各单体化合物,用/配置成?。的溶液,加入培养板孔中,每个粗提物及各相浸膏样品设置腭?,烬?, ?三个终浓度,各化合