疫检测常用方法及运用秦伟ppt课件

1、免疫检测常用方法及运用免疫检测常用方法及运用肥城市人民医院检验科肥城市人民医院检验科秦秦 伟伟l免疫学检测方法是运用免疫学实际设计的一系列测定抗原、抗体、补体、细胞因子等免疫相关物质及微量物质如激素、酶、血浆微量蛋白、血液药物浓度、微量元素、毒品等实验方法。l这些方法所具有的特异性好、敏感性高、简单、快速和稳定的特点为临床上确定诊断、分析病情、调整治疗方案和判别预后等提供有效的实验根据，使它们在临床的运用进一步普及和推行。l颗粒性抗原(细菌、细胞等)与相应的抗体，或可溶性抗原(亦可用抗体)吸附于与免疫无关的载体构成致敏颗粒与相应的抗体(或抗原)，在有适量电解质存在下，构成肉眼可见的凝集小块。l

2、直接凝集反响l间接凝集反响l抗人球蛋白实验Coombs实验l颗粒性抗原(细菌、细胞等)与相应的抗体在有适量电解质存在下，构成肉眼可见的凝集小块。l常见的运用是血型的鉴定l将可溶性抗原或抗体先吸附于适当大小颗粒性载体的外表，然后与相应抗体或抗原作用，在适宜的电解质存在的条件下，出现特异性凝集的景象称间接凝集反响indirectagglutination或被动凝集反响assiveagglutination。l常用的载体微球有人O型血红细胞、绵羊或家兔红细胞、聚苯乙烯乳胶、活性炭/甲苯胺红、明胶颗粒等l正向间接凝集反响l反向间接凝集反响l用抗原致敏载体以检测标本中的相应抗体l所用载体颗粒为羧化的聚苯

3、乙烯胶乳，是一种直径约为0.8m大小的圆形颗粒，带有负电荷，可物理性吸附蛋白分子。l将溶血素O 吸附在羧化的聚苯乙烯胶乳颗粒上检测抗O。l将变性IgG包被于羧化的聚苯乙烯胶乳颗粒上检测RF。l血浆反响素实验(RPR)l 所用载体颗粒为活性炭颗粒l甲苯胺红不加热血清反响素实验l TRUSTl 所用载体颗粒为甲苯胺红颗粒l所用载体为人工合成的惰性明胶颗粒l梅毒螺旋体明胶凝集实验TPPAl肺炎支原体抗体检测MP-Abl检测肺炎支原体的总抗体IgM, IgA IgG)l以滴度的方式报告检测结果1:80 1:80、1：160、1:320 )l用知特异性抗体致敏载体以检测标用知特异性抗体致敏载体以检测标本

4、中的相应抗原。本中的相应抗原。l抗人球蛋白抗体参与的间接血凝实验，用于检测抗红细胞不完全抗体l分类：l 直接Coombs实验l 间接Coombs实验l 一、直接凝集反响 血型鉴定二、间接凝集反响 胶乳凝集实验 ASO/RF1正向间接凝集反响 RPP/TRUST 明胶颗粒凝集 TPPA/MP2反向间接凝集反响三、抗人球蛋白实验 直接/间接Coombs实验 l 使抗原或抗体结合到某种固相载体外表，并坚持其免疫活性。 l 使抗原或抗体与酶衔接成酶标抗原或抗体，且既保管其免疫活性又保管酶的活性。 l 标本中的抗原或抗体、酶标抗原或抗体按一定的次序与固相载体外表的抗体或抗原反响，并经过底物与酶的反响来反

5、映标本中的抗原或抗体的量。 l双抗体夹心法l双抗原夹心法l间接法l竞争法 l捕获法测 IgM 抗体l用特异性抗体进展包被和制备酶标抗体，以检测相应的抗原。l乙肝标志物中HBsAg、 HBeAg的检测常采用本法l用特异性抗原进展包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。l抗HBs的检测l抗HCV的检测l抗HIV的检测l标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。如受检标本中无抗体，那么酶标抗体能顺利地与固相抗原结合。参与酶标抗原后就显色深。如受检标本中含有抗体，那么与酶标抗体以同样的时机与固相抗原结合，竞争性地占去了酶标抗体与固相抗原结合的时机，使酶标抗原与固相载体的结合量减少。参与酶标抗原后

6、就显色浅或不显色。l最常见的运用：l乙肝HBeAb、 HBcAb检测l1将抗人 IgM 抗体抗人 IgM 链抗体衔接在固相载体上，构成固相抗人 IgM。 l2参与标本， IgM 抗体被固相抗体捕获。洗涤除去其他抗体。l3参与特异性抗原试剂，它只与固相上的特异性 IgM 结合，洗涤。 l4参与针对特异性抗原的酶标抗体，构成固相二抗 IgM抗体抗原 酶标抗体复合物。l5加底物显色，如有颜色显示，那么表示血清标本中的特异性 IgM 抗体存在，是为阳性反响。l以优生四项IgM抗体检测为例l甲肝IgM抗体测定l酶免疫测定具有高度的敏感性和特异性， 几乎一切的可溶性抗原抗体系统均可用以检测。它的最小可测值

7、达 ng 甚至 pg 程度。酶免疫测定标志试剂比较稳定，且无放射性危害。因此，酶免疫测定的运用日新月异，酶免疫测定的新方法、新技术不断开展。l利用微孔膜主要是醋酸纤维素膜作为固相进展免疫检测的方法l根据标志物的不同分为两类：l 酶标固相膜免疫测定：l 酶免疫斑点法l 酶免疫印迹法 l 金标法：l 胶体金斑点渗滤实验l 胶体金免疫层析实验l常运用于本身抗体的检测l金标双抗体夹心法测抗原l将试纸条下端浸入液体标本中，下端吸水资料即汲取液体向上端挪动，流经C处时使干片上的免疫金复合物复溶，并带动其向膜条渗移。假设标本中有待测特异抗原，其时可与免疫金复合物之抗体结合，此抗原抗体复合物流至测试区即被固相抗体所获，在膜上显出红色反响线条T。过剩的免疫金复合物继续前行，至参照区与固相小鼠IgG结合免疫金复合物中的单克隆抗体为小鼠IgG，而显出红色质控线条R。反之，阴性标本那么无反响线条，而仅显示质控线条。l检测HIVAb的双抗原夹心法lHCG的检测lHBs-Ag的检测l大便潜血实验FOBl轮状病毒和腺病毒抗原检测l幽门螺杆菌HP抗原检测lO1群霍乱弧菌检测lHCV-Ab检测l艾滋病抗体金标检测l上述两种实验的共同特点是：简便、快速、单份测定、可立等结果，除试剂外无需任何仪器设备，且试剂稳定。因此特别适用于急诊检验。l