药品无菌生产工艺验证

1、1无菌生产工艺验证的无菌生产工艺验证的主要内容与方法主要内容与方法2内容内容前言前言 - 药品的风险药品的风险无菌生产工艺验证原则与申报资料要求无菌生产工艺验证原则与申报资料要求无菌生产工艺验证的内容与方法无菌生产工艺验证的内容与方法无菌生产工艺的再验证无菌生产工艺的再验证小结小结3一、前言一、前言 药品的风险取决于其给药途径药品的风险取决于其给药途径1类类 注射剂注射剂 （静脉，肌内（静脉，肌内，皮内，皮下，脊椎腔，动脉皮内，皮下，脊椎腔，动脉内内）2类类 口服制剂口服制剂3类类 局部给药局部给药 手术、烧伤及严重创伤手术、烧伤及严重创伤 眼部给药眼部给药 耳、鼻及呼吸道吸入耳、鼻及呼吸道吸

2、入 阴道、尿道给药阴道、尿道给药 直肠给药直肠给药4类类 含动物组织的口服制剂含动物组织的口服制剂5类类 兼用兼用途径4注射剂的风险注射剂的风险风险风险1 - 微生物污染微生物污染 风险风险2 - 热原的污染热原的污染风险风险3 - 不溶性微粒不溶性微粒风险风险4 - 纯度纯度 其他风险：其他风险：安全性（组织的刺激性，毒性发应）安全性（组织的刺激性，毒性发应）渗透压渗透压pH5注射剂风险控制手段注射剂风险控制手段微生物污染风险微生物污染风险 注射剂必须是无菌注射剂必须是无菌热原污染热原污染 控制限度控制限度不溶性微粒不溶性微粒 控制限度控制限度纯度纯度 原料工艺原料工艺其他风险控制手段：其他

3、风险控制手段：安全性临床实验安全性临床实验等渗，等张，等渗，等张，pH调节调节6无菌药品的制造工艺类别无菌药品的制造工艺类别最终灭菌工艺最终灭菌工艺先将药品的各个部件（产品，容器和密封件）在符先将药品的各个部件（产品，容器和密封件）在符合要求的环境下组成最终的包装形式，最后让产品合要求的环境下组成最终的包装形式，最后让产品在其最终容器中进行灭菌处理（通常使用热力学灭在其最终容器中进行灭菌处理（通常使用热力学灭菌或辐射灭菌）。菌或辐射灭菌）。无菌生产工艺无菌生产工艺药品的各个部件（产品，容器和密封件）分别经过药品的各个部件（产品，容器和密封件）分别经过灭菌处理，再在高洁净度的环境中组装最终产品，

4、灭菌处理，再在高洁净度的环境中组装最终产品，但产品装入其最终容器后不再进行灭菌处理。但产品装入其最终容器后不再进行灭菌处理。7如何制造出高质量的无菌药品？如何制造出高质量的无菌药品？对生产工艺的深刻理解对生产工艺的深刻理解识别、评估各工艺步骤对无菌性，热原，微粒识别、评估各工艺步骤对无菌性，热原，微粒等质量因素及其影响程度等质量因素及其影响程度在工艺过程中采取有效控制手段在工艺过程中采取有效控制手段对这些手段的有效性进行验证对这些手段的有效性进行验证遵循相关法规的要求遵循相关法规的要求8二、二、无菌生产工艺验证原则与无菌生产工艺验证原则与申报资料要求申报资料要求无菌生产工艺验证原则无菌生产工艺

5、验证原则以无菌保证为核心，在充分评估工艺各步骤微生物以无菌保证为核心，在充分评估工艺各步骤微生物污染风险的基础上，利用现有的科学技术，对风险污染风险的基础上，利用现有的科学技术，对风险控制手段的有效性进行确认。控制手段的有效性进行确认。9无菌冻干粉针剂生产工艺流程无菌冻干粉针剂生产工艺流程配料配料原料，辅料，配料器具，环境，人员操作容器，WFI，配液器具，环境，操作胶塞，过滤器，灌装部件，清洁工具，灭菌釜，清洁及灭菌过程西林瓶，WFI，洗瓶机，干热灭菌设备气体，容器管道过滤器及安装操作，过滤前溶液含菌量环境，人员操作，转移冻干机密闭性压盖前储存时间，转移，胶塞密闭性，压盖后的密闭性10无菌工艺

6、无菌性的保证因素无菌工艺无菌性的保证因素水水原料药原料药辅料辅料气体气体容器容器/密封件密封件设施设施容器、设备的清洗容器、设备的清洗灭菌灭菌配料、配液、过滤配料、配液、过滤、灌装全过程、灌装全过程人员人员环境及培养基灌装环境及培养基灌装无菌试验无菌试验无菌包装无菌包装产品产品 生产过程生产过程原材料原材料11遵循的法规要求遵循的法规要求中国中国GMP有关无菌生产工艺的有关规定以及洁净室悬有关无菌生产工艺的有关规定以及洁净室悬浮粒子、沉降菌和浮游菌检测的国家标准浮粒子、沉降菌和浮游菌检测的国家标准药品生产质量管理规范实施指南中有关无菌生产的药品生产质量管理规范实施指南中有关无菌生产的指导原则指

7、导原则药品生产验证指南药品生产验证指南FDA无菌生产工艺指南无菌生产工艺指南FDA工艺验证一般原则新药申报资料对灭菌工艺工艺验证一般原则新药申报资料对灭菌工艺验证的要求验证的要求欧盟欧盟GMP附录附录1无菌药品生产无菌药品生产12美国美国FDA要求的新药申报资料要求的新药申报资料1.适应症适应症2.药学和毒理学研究药学和毒理学研究3.化合物研究化合物研究4.生产工艺生产工艺5.标准和控制标准和控制6.微生物学研究微生物学研究7.现场检查现场检查8.样品测试样品测试9.动物试验动物试验10.临床研究临床研究11.生物利用生物利用13FDAFDA新药申报资料对新药申报资料对无菌药品工艺无菌药品工艺

8、验证的要求验证的要求原则：只有当药品的检验方法、生产设施、工艺流程、原则：只有当药品的检验方法、生产设施、工艺流程、包装等能确保药品的性质、含量、质量和纯度时，新药包装等能确保药品的性质、含量、质量和纯度时，新药申请才会被批准申请才会被批准资料要求：无菌药品的工艺验证必须包含在申报资料中资料要求：无菌药品的工艺验证必须包含在申报资料中两级责任制：两级责任制：CDER负责资料的审核负责资料的审核地方药监负责现场核查地方药监负责现场核查目的目的1：申报资料的真实性：申报资料的真实性目的目的2：GMP符合性检查符合性检查 14FDAFDA新药申报资料对新药申报资料对无菌药品工艺无菌药品工艺验证具体内

9、容要求（验证具体内容要求（1）A. 厂房和设施厂房和设施布局图，包括洁区划分布局图，包括洁区划分设备分布图设备分布图B. 总体生产流程介绍总体生产流程介绍产品过滤产品过滤溶液储存时间溶液储存时间关键操作关键操作C. 容器、密封部件、设备和器具的灭菌去热原过程容器、密封部件、设备和器具的灭菌去热原过程分别灭菌溶液的工艺过程分别灭菌溶液的工艺过程完整的批生产记录完整的批生产记录15FDAFDA新药申报资料对新药申报资料对无菌药品工艺无菌药品工艺验证具体内容要求（验证具体内容要求（2）C. 培养基灌装的程序和标准培养基灌装的程序和标准灌装房间灌装房间密封系统类型和尺寸密封系统类型和尺寸每个容器灌装体

10、积每个容器灌装体积培养基类型培养基类型灌装数量灌装数量培养数量培养数量阳性数量阳性数量培养条件培养条件灌装日期灌装日期挑战条件叙述挑战条件叙述环境监测环境监测产品正常工艺和培养基灌装工艺的工艺参数产品正常工艺和培养基灌装工艺的工艺参数16FDAFDA新药申报资料对新药申报资料对无菌药品工艺无菌药品工艺验证具体内容要求（验证具体内容要求（3）E. 培养基灌装失败时的措施培养基灌装失败时的措施F. 环境监测环境监测应用的微生物方法应用的微生物方法监测酵母菌、霉菌和厌氧菌的方法和频率监测酵母菌、霉菌和厌氧菌的方法和频率超标时的措施超标时的措施G. 密封系统完整性密封系统完整性H. 无菌检查方法和放行

11、标准无菌检查方法和放行标准I. 内毒素检查方法内毒素检查方法J.有关上述所有内容的文件列表有关上述所有内容的文件列表17三、无菌生产工艺验证的具体内三、无菌生产工艺验证的具体内容和方法容和方法厂房和设施（布局、空气净化系统包括厂房和设施（布局、空气净化系统包括HEPA， WFI系系统）统）器具、容器的灭菌除热原过程器具、容器的灭菌除热原过程灌装部件、胶塞的灭菌过程灌装部件、胶塞的灭菌过程洗瓶、干热去热原过程洗瓶、干热去热原过程配液灌、储液罐及管道、冻干机灭菌过程配液灌、储液罐及管道、冻干机灭菌过程过滤除菌过程过滤除菌过程灌装过程（环境、人员监测）灌装过程（环境、人员监测）容器密闭性容器密闭性综

12、合验证：培养基灌装试验（工艺模拟实验）综合验证：培养基灌装试验（工艺模拟实验）实验室控制（微生物测试标准方法、无菌检查）实验室控制（微生物测试标准方法、无菌检查）183.1 原辅料的控制原辅料的控制无菌原料药无菌原料药其本身的生产工艺应按无菌生产工艺验证原则进行其本身的生产工艺应按无菌生产工艺验证原则进行包装和运输应是考察重点包装和运输应是考察重点非无菌原料或辅料非无菌原料或辅料尽可能降低微生物负荷尽可能降低微生物负荷- 50CFU/g生产的洁净环境生产的洁净环境设备与其他物料及人员设备与其他物料及人员生产用水生产用水19非无菌原料或辅料关键控制点非无菌原料或辅料关键控制点精烘包阶段环境至少十

13、万级以上精烘包阶段环境至少十万级以上人员着装、人流物流控制，环境清洁规程人员着装、人流物流控制，环境清洁规程设备清洁规程，设定内控限度设备清洁规程，设定内控限度预先采取高温或过滤是降低微生物污染的有效预先采取高温或过滤是降低微生物污染的有效方法方法生产用水需要达到纯化水要求，并控制内毒素生产用水需要达到纯化水要求，并控制内毒素对除菌、灭菌或去内毒素步骤需评估对产品理对除菌、灭菌或去内毒素步骤需评估对产品理化性能的影响化性能的影响203.2 生产环境验证和控制生产环境验证和控制范围包含所有工艺步骤范围包含所有工艺步骤遵守相关的遵守相关的GMP规范规范验证时考察静态和动态时的环境质量验证时考察静态

14、和动态时的环境质量生产时实行动态监测生产时实行动态监测21环境验证的范围环境验证的范围空气净化系统的验证（温湿度，压差，空气流空气净化系统的验证（温湿度，压差，空气流向，风速，高效过滤器泄漏测试）向，风速，高效过滤器泄漏测试）环境性能测试（静态动态）环境性能测试（静态动态）悬浮粒子和悬浮粒子和恢复速率测试恢复速率测试 微生物测试：空气浮游菌，沉降菌，表面微生物微生物测试：空气浮游菌，沉降菌，表面微生物日常监控日常监控22为什么环境监测是必不可少的？为什么环境监测是必不可少的？ 在无菌工艺中，产品、容器和密封件分别经过在无菌工艺中，产品、容器和密封件分别经过灭菌后再进行灌封。由于产品装入最终容器

15、后灭菌后再进行灌封。由于产品装入最终容器后不再作进一步灭菌处理，容器在极高洁净环境不再作进一步灭菌处理，容器在极高洁净环境下进行灌封是至关重要的。下进行灌封是至关重要的。 FDA无菌生产工艺指南第五页无菌生产工艺指南第五页23制订环境监控方案的原则制订环境监控方案的原则明确监控的关键控制点明确监控的关键控制点给产品构成最大风险的位置，如产品暴露位置、直接接给产品构成最大风险的位置，如产品暴露位置、直接接触表面触表面人员人员科学建立控制标准和方案科学建立控制标准和方案标准应满足无菌生产微生物控制要求，并结合取样点位标准应满足无菌生产微生物控制要求，并结合取样点位置和生产操作的相互关系置和生产操作

16、的相互关系建立警戒和纠偏标准建立警戒和纠偏标准进行数据分析进行数据分析全面监控、动态监控全面监控、动态监控定期的环境再验证定期的环境再验证24无菌灌装区环境监控频率无菌灌装区环境监控频率洁净室洁净室测试项目测试项目监测频率监测频率无菌灌装间无菌灌装间产品转移间产品转移间灭菌釜卸载间灭菌釜卸载间更衣间更衣间空气悬浮粒子空气悬浮粒子空气浮游菌空气浮游菌表面微生物表面微生物沉降菌沉降菌操作人员操作人员每批一次每批一次或无生产时每周或无生产时每周一次一次产品转移间产品转移间清洁间清洁间物流缓冲间物流缓冲间更衣间更衣间 空气悬浮粒子空气悬浮粒子空气浮游菌空气浮游菌表面微生物表面微生物每周一次每周一次25

17、物料准备区环境监控频率物料准备区环境监控频率洁净室洁净室测试项目测试项目监测频率监测频率配液间配液间压盖间压盖间空气悬浮粒子空气悬浮粒子*空气浮游菌空气浮游菌表面微生物表面微生物沉降菌沉降菌每周一次每周一次（* 每月一次）每月一次）更衣间更衣间清洁清洁/灭菌间灭菌间空气悬浮粒子空气悬浮粒子*空气浮游菌空气浮游菌表面微生物表面微生物每周一次每周一次（* 每月一次）每月一次）其他其他C级区房间级区房间空气悬浮粒子空气悬浮粒子空气浮游菌空气浮游菌表面微生物表面微生物每月一次每月一次26辅助区环境监测频率辅助区环境监测频率洁净室洁净室测试项目测试项目监测频率监测频率辅助区所有房间辅助区所有房间 空气悬

18、浮粒子空气悬浮粒子空气浮游菌空气浮游菌表面微生物表面微生物每三个月一次每三个月一次27微生物检测方法的特点微生物检测方法的特点空气浮游菌空气浮游菌定量、准确、取样量大，但易干扰气流定量、准确、取样量大，但易干扰气流沉降菌沉降菌取样时间长，不干扰气流，但非定量、检出率低取样时间长，不干扰气流，但非定量、检出率低接触碟接触碟光滑表面，方便，但需特殊的培养碟光滑表面，方便，但需特殊的培养碟棉签法棉签法不规则表面，操作稍复杂不规则表面，操作稍复杂28监测的实施监测的实施 在生产过程中，无菌灌装线上沉降碟的放置应在所有操在生产过程中，无菌灌装线上沉降碟的放置应在所有操作开始前完成作开始前完成空气浮游菌的

19、测试应根据生产情况开空气取样仪空气浮游菌的测试应根据生产情况开空气取样仪灌装线上的表面微生物测试应在灌装结束后进行灌装线上的表面微生物测试应在灌装结束后进行监测人员根据生产和人员操作的情况，可随时要求进行监测人员根据生产和人员操作的情况，可随时要求进行操作人员手套的微生物测试，操作人员在测试前不应喷操作人员手套的微生物测试，操作人员在测试前不应喷洒无菌酒精，在测试后应更换手套。对于无菌服的微生洒无菌酒精，在测试后应更换手套。对于无菌服的微生物测试一般在操作人员退出物测试一般在操作人员退出B B级区之前进行。级区之前进行。 所有的样品在测试后都应装入灭菌袋中适当包裹，以所有的样品在测试后都应装入

20、灭菌袋中适当包裹，以避免样品在转移途中受到污染。避免样品在转移途中受到污染。 29人员控制人员控制无菌服、头套、眼罩、人员操作行为无菌服、头套、眼罩、人员操作行为无菌灌装人数控制无菌灌装人数控制人员资格认定人员资格认定体检，操作培训，着装培训，着装测试体检，操作培训，着装培训，着装测试着装测试方法着装测试方法年度资格再确认制度年度资格再确认制度30眼罩也为取样点31环境监测数据的分析环境监测数据的分析ISP Room17 Environmental TrendingISP Room17 Environmental Trending2004.04-2005.032004.04-2005.0301

21、23456789103-4-044-23-046-12-048-1-049-20-0411-9-0412-29-042-17-054-8-055-28-05CFU/mCFU/m3 3 or CFU/25cmor CFU/25cm2 2 Airborne MicrobeWallFloor32细菌鉴定细菌鉴定确定污染源，为制订整改措施提供帮助确定污染源，为制订整改措施提供帮助提供放行提供放行/报废依据报废依据用于培养基灌装用于培养基灌装用于消毒剂的效率测试用于消毒剂的效率测试33B/A grade Bacteria ID Results01020304050607080Aer.hydrophila

22、 gr.1 嗜水气单胞菌 Bacillus mycoides 蕈状芽孢杆菌 Bacillus cereus 蜡状芽孢杆菌 Bacillus firmus，坚硬芽孢杆菌属 Bacillus pumilus 短小芽孢杆菌 Bacillus sphaericus 球形芽孢杆菌 Burkhol.cepacia 洋葱假单胞菌 Chryseomonas luteola浅金黄色单胞菌 G+杆菌 非芽孢杆菌 Micrococcus spp. 微球菌属的某些种 Ochrobac.anthropi 人苍白杆菌 Past.pneumo./haemol 溶血巴斯德氏菌 Prov.alcal./rustig.产碱/拉氏

23、普罗威斯登菌 34Bacteria ID ResultsJul.01Nov.04G-杆菌 8%G+ 非芽孢杆菌 4%芽孢杆菌 5%G+球菌 77%霉菌 1%G-球菌 5%353.3 过滤系统的验证过滤系统的验证无菌过滤是截留微生物无菌过滤是截留微生物具有一定的风险具有一定的风险制造过程中的不均一性制造过程中的不均一性对过滤介质的化学腐蚀对过滤介质的化学腐蚀机械缺陷机械缺陷过高的压力过高的压力36过滤器验证过滤器验证项目项目 生物性能生物性能微生物截留微生物截留客户定制客户定制流速流速产量产量操作温度操作温度压力压力系统尺寸大小系统尺寸大小 物理性能物理性能完整性完整性产品水起泡点产品水起泡点扩

24、散流扩散流吸附吸附4000350030002500200015001000W avenum ber cm -1FTI R Ref er ence Spect r um ofPol ycar bonat e 化学性能化学性能兼容性兼容性析出物析出物验证必须是以产品为介质，在最差的条件下进行37过滤器的选择过滤器的选择工艺特性工艺特性所要求的流量所要求的流量所要求的压差所要求的压差可使用的灭菌方法可使用的灭菌方法过滤介质的寿命过滤介质的寿命过滤器结构过滤器结构筒式，平板式筒式，平板式38过滤器的选择过滤器的选择化学相容性化学相容性证明过滤介质不会把外来物质带进产品证明过滤介质不会把外来物质带进产品

25、证明无菌过滤介质不受产品的影响，削弱它证明无菌过滤介质不受产品的影响，削弱它的强度和完整性的强度和完整性测试包括测试包括：可氧化物质可氧化物质溶剂系统中的重量变动溶剂系统中的重量变动析出物分析，吸附分析析出物分析，吸附分析完整性试验完整性试验流量变化流量变化外观物理变化外观物理变化生物截留能力生物截留能力39过滤器的完整性试验过滤器的完整性试验目的是确定过滤系统不存在使液体不经过过滤目的是确定过滤系统不存在使液体不经过过滤介质到达过滤器下游的通道介质到达过滤器下游的通道起泡点试验起泡点试验前向流试验（扩散流）前向流试验（扩散流）压力表压力表滤芯流量计40无菌过滤器微生物挑战试验无菌过滤器微生物

26、挑战试验目的：证实过滤器是有能力截获微生物，而且目的：证实过滤器是有能力截获微生物，而且超过了工艺物流自身最大的生物负荷超过了工艺物流自身最大的生物负荷模拟实际工艺的压力流量等参数模拟实际工艺的压力流量等参数菌种：缺陷型假单胞菌菌种：缺陷型假单胞菌数量：按过滤器面积数量：按过滤器面积107个个/cm2步骤步骤确认过滤器的完整性确认过滤器的完整性用含一定数量细菌的培养基过滤用含一定数量细菌的培养基过滤滤过液进行培养（取样或膜过滤），滤过液进行培养（取样或膜过滤），37度度14天天过滤后进行完整性测试过滤后进行完整性测试连续验证连续验证3次，都应无菌生长次，都应无菌生长41三个需要特别关注的关键点

27、三个需要特别关注的关键点起泡点标准的建立与截留率的相关性起泡点标准的建立与截留率的相关性过滤器的微生物截留验证必须在药液中进行过滤器的微生物截留验证必须在药液中进行在实际的生产参数下进行验证，如压力最高值在实际的生产参数下进行验证，如压力最高值42过滤系统验证小结过滤系统验证小结过滤器的选择应符合工艺和产品的特性过滤器的选择应符合工艺和产品的特性过滤器的验证是一个技术复杂的过程过滤器的验证是一个技术复杂的过程国外一般委托过滤器生产厂家进行选择和验证国外一般委托过滤器生产厂家进行选择和验证433.4 培养基灌装试验培养基灌装试验采用正常的生产工艺，用培养基代替产品进行灌装，以考察生产采用正常的生

28、产工艺，用培养基代替产品进行灌装，以考察生产过程、设备和包装形式、人员操作等整个体系能始终如一地生产过程、设备和包装形式、人员操作等整个体系能始终如一地生产出符合要求的无菌产品出符合要求的无菌产品使用范围使用范围初次验证初次验证 对象：新的无菌生产工艺对象：新的无菌生产工艺连续连续3次合格的无菌工艺模拟次合格的无菌工艺模拟 有足够的时间模拟实际生产时的操作有足够的时间模拟实际生产时的操作 最差状况模拟最差状况模拟年度再验证年度再验证对象：现行工艺对象：现行工艺 每年进行两次再验证每年进行两次再验证 有足够的时间模拟实际生产时的操作有足够的时间模拟实际生产时的操作 最差状况模拟最差状况模拟44培

29、养基灌装流程培养基灌装流程确认设施设备和各灭菌工艺验证的完成确认设施设备和各灭菌工艺验证的完成确认培养基灌装的范围确认培养基灌装的范围制订培养基灌装方案制订培养基灌装方案培养基选择培养基选择灌装数量和灌装总时间灌装数量和灌装总时间各步骤间的间隔时间各步骤间的间隔时间挑战试验的最差条件设计挑战试验的最差条件设计人员环境监测计划人员环境监测计划培养条件、时间和设备培养条件、时间和设备培养基灵敏度试验培养基灵敏度试验总结和失败原因调查总结和失败原因调查45使用范围使用范围计划外的验证计划外的验证 ： 如工艺重大改变，设施设备改造等如工艺重大改变，设施设备改造等偏差原因：偏差原因：无菌实验失败，根据偏

30、差调查结果的要求无菌实验失败，根据偏差调查结果的要求 环境监测结果明显反常，根据偏差调查结果环境监测结果明显反常，根据偏差调查结果的要求的要求 某个区域的空调关闭时间超过验证的时间段某个区域的空调关闭时间超过验证的时间段46培养基灌装试验应考虑的因素培养基灌装试验应考虑的因素培养基的选择培养基的选择培养基促生长能力培养基促生长能力灌装数量灌装数量环境监测方案环境监测方案收集和培养收集和培养最差条件的挑战最差条件的挑战47培养基的选择培养基的选择适应广谱微生物生长适应广谱微生物生长较好的澄明度，较小的粘度较好的澄明度，较小的粘度可除菌过滤可除菌过滤常用培养基：常用培养基：3大豆胰蛋白肉汤（大豆胰

31、蛋白肉汤（TSB）粉针剂：粉针剂：聚乙二醇，乳糖和聚乙二醇，乳糖和/或肉汤或肉汤粘稠的乳膏剂：粘稠的乳膏剂：混于肉汤中的琼脂和羧甲基纤维素混于肉汤中的琼脂和羧甲基纤维素 48培养基促生长能力培养基促生长能力灵敏度试验灵敏度试验 取灌装前、中、后各阶段的培养基样品取灌装前、中、后各阶段的培养基样品枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠球菌枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠球菌、绿脓杆菌、黑曲霉菌、环境菌、绿脓杆菌、黑曲霉菌、环境菌每个菌种接种每个菌种接种2支，计数支，计数100cfu/瓶瓶20-25C/30-35 C 培养培养5天内生长天内生长49灌装数量灌装数量批次量足够大批次量足够大灌装

32、量一般灌装量一般500010000瓶瓶批量小的批量小的(低于低于5000瓶瓶)以全批数量灌装以全批数量灌装50环境监测环境监测全面、全过程检测全面、全过程检测对无菌生产区环境的评估对无菌生产区环境的评估对人员资格的确认对人员资格的确认(所有无菌区工作人员）所有无菌区工作人员）环境的清洁：灌装结束环境的清洁：灌装结束4小时内小时内51收集和培养收集和培养按灌装的先后顺序轧盖按灌装的先后顺序轧盖翻转接触所有表面翻转接触所有表面培养：培养：20-25度度7天，天，30-35度度7天天 在中间转换温度和培养结束时在中间转换温度和培养结束时100灯检灯检记录污染瓶数记录污染瓶数记录丢弃的数量和原因，不得

33、随意丢弃记录丢弃的数量和原因，不得随意丢弃52最差条件挑战最差条件挑战储存时间：储存时间： 灌装设备、灌装部件、储罐、无菌物料、药液在灌装设备、灌装部件、储罐、无菌物料、药液在实际灌装前能够放置的最长时间实际灌装前能够放置的最长时间例例1: 用需要再灭菌前的灌装设备、灌装部件、用需要再灭菌前的灌装设备、灌装部件、储罐、无菌物料参与培养基灌装储罐、无菌物料参与培养基灌装例例2:无菌过滤后存放在储罐内的培养基到实际无菌过滤后存放在储罐内的培养基到实际生产时产品的最大储存时间后再灌装生产时产品的最大储存时间后再灌装53最差条件挑战最差条件挑战无菌灌装时间无菌灌装时间 在培养基灌装中模拟用时最长的瓶子

34、满批量生在培养基灌装中模拟用时最长的瓶子满批量生产需要的时间，其中包括正常的干扰时间（产需要的时间，其中包括正常的干扰时间（换班、设备维修）换班、设备维修）灌装速度和瓶子规格灌装速度和瓶子规格灌装速度和瓶子规格的关系灌装速度和瓶子规格的关系最慢的速度，最大的瓶子规格最慢的速度，最大的瓶子规格最小的瓶子规格，最快的速度最小的瓶子规格，最快的速度54最差条件挑战最差条件挑战人员人员培养基灌装时模拟无菌区可能容纳最多的人数培养基灌装时模拟无菌区可能容纳最多的人数无菌区工作人员至少每年参与一次培养基灌装无菌区工作人员至少每年参与一次培养基灌装操作干扰操作干扰正常的（灌装线装配，称量调节，加胶塞，处理倒

35、瓶，取正常的（灌装线装配，称量调节，加胶塞，处理倒瓶，取样，环境监测）样，环境监测） 非正常的（设备故障，灌装线堵塞，轨道调节，拆卸非正常的（设备故障，灌装线堵塞，轨道调节，拆卸/替替换破损的部件）换破损的部件）干扰的次数应该不少于正常生产时发生的次数干扰的次数应该不少于正常生产时发生的次数工艺气体工艺气体使用氮气的，因考虑其不利于微生物生长，以压缩空气代使用氮气的，因考虑其不利于微生物生长，以压缩空气代替替55培养基灌装失败后的调查培养基灌装失败后的调查不管批次量有多大不管批次量有多大,只要培养基灌装中存在污染只要培养基灌装中存在污染就意味着无菌保证有问题就意味着无菌保证有问题设计合理、操作

36、适当的无菌灌装污染水平应为设计合理、操作适当的无菌灌装污染水平应为零零灌装瓶数灌装瓶数结果判断结果判断10000如有如有1瓶污染，进行调查瓶污染，进行调查如有如有2瓶污染，调查并考虑再验证瓶污染，调查并考虑再验证56培养基灌装失败后的调查培养基灌装失败后的调查环境和人员监测数据环境和人员监测数据灭菌记录和设备校验记录灭菌记录和设备校验记录灌装区域清洁消毒记录灌装区域清洁消毒记录人员培训记录人员培训记录高效过滤器完整性测试记录高效过滤器完整性测试记录压差记录压差记录溶液除菌过滤器完整性测试记录溶液除菌过滤器完整性测试记录污染菌来源污染菌来源丢弃的培养基灌装瓶丢弃的培养基灌装瓶灌装时的干扰活动灌装

37、时的干扰活动其他偏差和干扰活动其他偏差和干扰活动573.5 容器密封性验证容器密封性验证目的：保证灭菌过程后和产品有效期内密封系统的完整目的：保证灭菌过程后和产品有效期内密封系统的完整性性密闭系统：安瓿或容器密闭系统：安瓿或容器/胶塞系统胶塞系统方法：方法：物理方法：染料检漏法，盐水渗入法，高压电物理方法：染料检漏法，盐水渗入法，高压电极检测机极检测机微生物检测法：微生物检测法：气溶胶法气溶胶法 将灌装培养基的压盖容器放置在充满微生物的气溶胶腔将灌装培养基的压盖容器放置在充满微生物的气溶胶腔室内，保持一定温度、压力、湿度和时间室内，保持一定温度、压力、湿度和时间微生物浸泡法微生物浸泡法 将灌装培养基的压盖容器倒置在一定浓度的特定微生物将灌装培养基的压盖容器倒置在一定浓度的特定微生物的溶液内，保持一段时间的溶液内，保持一段时间58微生物浸泡法操作步骤微生物浸泡法操作步骤菌液待确认密封口支架培养基容器选择试验菌种（大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、粘质选择试验菌种（大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、粘质