牛磺鹅去氧胆酸的长期稳定性试验[精选]

1、牛磺鹅去氧胆酸的长期稳定性试验【摘要】目的：检测我公司中间产品牛磺鹅去氧胆酸在中国药典四部长期稳定性试验条件下的含量以及有关物质的含量是否符合质量标准规定，判断我公司所生产的牛磺鹅去氧胆酸是否合格。方法：根据中国药典原料药物与制剂稳定性试验指导原则，采用agilent zorbax extend-c18250mm，5m），rid检测器uv210nm，柱温30，流动相为磷酸二氢钾缓冲液（/l ph4.0）-甲醇（3:7）和乙腈-（400ml甲醇+900ml水+0.4ml磷酸）（50:50），考察牛磺鹅去氧胆酸在不同时间的性状、含量以及有关物质含量。结果：牛磺鹅去氧胆酸的含量和有关物质的含量均无明

2、显变化。结论：我公司所用工艺生产的牛磺鹅去氧胆酸产品稳定性较好，达到药典的标准。【关键词】牛磺鹅去氧胆酸；有关物质；含量；高相液相色谱法the long-term stability of the taurochenodeoxycholic acid testabstractobjective：to test the content of the taurochenodeoxycholic acid in the four long-term stability tests under the chinese pharmacopoeia and whether the content of t

3、he related substances conforms to the quality standard,and to determine whether the taurochenodeoxycholic acid produced by our company is qualified. methods:according to chinese pharmacopoeia raw material medicine and preparation stability test guidelines,agilent zorbax extend-c18 250mm，5m) was uesd

4、 in the study ,the rid detection was uv210nm,the column temperture was 30, results: the content of the taurochenodeoxycholic acid and the content of related substances produced by our company had no obvious change. conclusion: our company used the technology to produce the taurochenodeoxycholic acid

5、 products with good stability and qualified，and our product reach the pharmacopoeia standard. keywords the taurochenodeoxycholic acid; related substances; content; high phase liquid chromatography.1 前言牛磺鹅去氧胆酸概述1.1.1牛磺鹅去氧胆酸现状 甾体类化合物具有十分重要的生物学功能，同时也是在自然界中广泛存在的天然化合物。并且，鸡、鸭、鹅、猪、牛等动物的胆汁中含有大量的牛磺鹅去氧胆酸（tcdc

6、a），该成分就属于甾体类化合物中的一种，是由牛磺酸(tca)的氨基和鹅去氧胆酸（cdca）的羧基以酰胺键形式键合而成的一种结合型胆酸1，是合成牛磺熊去氧胆酸(tudca)的中间产品。牛磺鹅去氧胆酸的分子式为c26h45no6s，英文名为taurochenodeoxycholic acid，简称tcdca，在临床应用上可用作镇咳、抗炎、抑菌、抗氧化2、祛痰3-4的药物，具有免疫调节功能5和抗热应激作用6。另外，牛磺鹅去氧胆酸能水解生成熊去氧胆酸（udca），熊去氧胆酸在临床上主要用于治疗病毒性肝炎7、原发性胆汁性肝硬化、溶解和预防胆结石8；在过去，熊去氧胆酸主要是从熊科动物黑熊身上，经胆囊手术引

7、流胆汁再提取而得，原材料比较稀缺，而且此方法有违伦理道德，现有专家指出，新工艺可人工合成熊去氧胆酸在7-羟基类固醇脱氢酶（7-hsdh）和7-羟基类固醇脱氢酶（7-hsdh）的作用下，牛磺鹅去氧胆酸直接转化为了牛磺熊去氧胆酸，进而转化为熊去氧胆酸，这种生物转化熊去氧胆酸的方法，比较便利而且容易实行，因为不用拆离纯化结合态的鹅去氧胆酸，因而为制备结合态的熊去氧胆酸提供了新的简便的方法9，有关文献中测定牛磺鹅去氧胆酸有关物质检查有hplc和tlc两种，10-11。本公司主要是以反相高效液相色谱法测定牛磺鹅去氧胆酸的含量及其有关物质的含量。1.1.2牛磺鹅去氧胆酸的性状及药理作用牛磺鹅去氧胆酸为白色

8、结晶性粉末，没有臭味，味道较为苦涩12，其化学名称为 3, 7-二羟基 -5 -24-胆烷酰-n -牛磺酸 ,在乙醇、乙腈等有机溶液中极易溶解。近年来发现牛磺鹅去氧胆酸有许多种功效，比如可以增进分泌内源性胆汁酸，削弱重吸收的作用，抵抗疏水胆酸的毒副反应，具有预防、消融胆固醇性结石、防止肝细胞膜被破坏的作用，还可以经由免疫功能调节作用来抵抗炎症、减缓细胞凋亡。有关文献报道在动物模型实验中，牛磺鹅去氧胆酸之所以能够在一定的程度上起到免疫抑制作用，是因为较高浓度的牛磺鹅去氧胆酸可以明显加速小鼠腹腔巨噬细胞的凋亡 ,减少成熟巨噬细胞的数量。牛磺鹅去氧胆酸可以对小鼠脑损伤、免疫调节、抗热应激起有效作用，

9、牛磺鹅去氧胆酸发挥抗热应激作用，是经由调节热应激小鼠肝脏中sp70、血清及皮质醇分泌实现的13，如能显著降低小鼠毛细血管道的通透性、减缓耳壳的肿胀和防止大鼠角叉菜胶性足肿胀的发生以及进一步恶化,类似于预防与治疗人类的类风湿性关节炎。此外，牛磺鹅去氧胆酸在7-羟基类固醇脱氢酶（7-hsdh）和7-羟基类固醇脱氢酶（7-hsdh）的作用下，直接转化为了牛磺熊去氧胆酸，进一步转化为熊去氧胆酸，熊去氧胆酸可以放松括约肌、抵抗消化酶、消化液的生成，是到现在为止治疗胆管炎、胆结石引起的胆囊炎、原发性硬化性肝硬化的唯一的有效药品14 ，因而可以认定牛磺鹅去氧胆酸是治疗胆囊炎和原发性胆汁肝硬化的间接药物。1.

10、1.3熊去氧胆酸熊去氧胆酸收录在2015年版第二部中国药典，该物质作为珍稀的中药熊胆中所含有的主要成分，熊去氧胆酸可以从天然熊胆及熊胆汁中获取，另一种获得方法是可以用动物胆酸如鹅去氧胆酸、猪去氧胆酸合成，能追溯到的最长历史的来源是从熊胆汁中分离提取精炼得到，具有保护肝胆、防止细胞被破坏和免疫功能调节等功效15，该物质的化学名称为 3，7-二羟基-5-胆烷酸，英文名为 ursodeoxycholic acid ，简称 udca。有新的研究指出，熊去氧胆酸不仅可以有效治疗原发性硬化性胆管炎、胆囊炎、慢性肝炎、原发性胆汁性肝硬化，而且还可以有效治疗慢性活动肝炎和减少进行肝脏移植手术后所表现出来的排斥

11、反应16。熊去氧胆酸的药理作用有以下几点：预防胆固醇在肝脏中的合成、促进胆汁酸的分泌、减少括约肌的收缩时间、增强保护胆脏、减缓消化酶的分泌以及防止合成脂肪肝。1.1.4类风湿性关节炎类风湿关节炎英文名称为rheumatoid arthritis,简称ra，它是一种自身免疫性疾病，特点是慢性、进行性、多发性等,临床表现大多数是关节外病变和关节滑膜炎,中年妇女是高发病人群,女性发病率明显高于男性，不过老年人和学龄儿童也有发病,而且一般都会反复发作或循环渐进，使患者发作时疼痛难耐。类风湿性关节炎发病机制与原理比较复杂,类风湿关节炎患者的关节滑液里一般都会大量存在 ltb4 , 该物质会严重破损关节的

12、骨质和软骨。类风湿性关节炎暂时没有特别有效的方案能够治疗,临床上用于治疗类风湿关节炎的药物有很多,新药和新疗法也一直在更新换代,国内市场大多数是缓控释抗风湿药物、糖皮质激素、非甾体类抗炎药、生物制剂以及中药和中药制剂。1.1.5原发性胆汁性肝硬化和胆结石原发性胆汁性肝硬化是一种胆汁淤积性疾病，其主要特征一般都是进行性循环渐进的，到目前为止该病的发病原理机制还没得到明确的解释，可能是免疫系统参与和肝脏门静脉炎性细胞浸润导致肝小叶胆管遭到损伤17，又或许与患者本身免疫功能、病毒细菌感染以及遗传环境相关，但基本是因为肝内胆汁的长期聚积而导致引发的。此病的多发人群是中年女性，占的比例多达90%，大多数

13、患者早期的发病临床症状是肝脾肿大，唯一的阳性发现是血清-gt的飙升以及分泌碱性磷酸酶的速度加快，一般会表现出不定时的瘙痒和偶尔出现轻度疲劳的现象，中后期患者会表现出更加疲倦无力、皮肤气色较为暗沉以及会有黄疸和日常活动中会出现口干舌燥现象，血液中线粒体的抗体变成阳性、小单管遭到破坏以及肝脏的淋巴细胞会被浸润等表现会出现在血清学检查中。相关研究发现，患者血清细胞因子及免疫学功能的异常通常也是此病导致的。胆结石是普通外科常见疾病之一, 右腹部疼痛、不喜油腻、左肩疼痛是其主要的临床表现，最常见的疼痛部位是上腹部或右上腹最下面一根肋骨的周围,发病严重时肩和背部也会被辐射到而引起疼痛。胆结石患者胆汁具有潜

14、在的增强人胆管癌细胞增殖活性的作用,该作用会加快胆管癌的发生和恶化18。1.1.6有关物质牛磺鹅去氧胆酸的有关物质有鹅去氧胆酸（cdca）、牛磺7-酮石胆酸（t7k）、牛磺胆酸钠（tca-na）以及其他未知杂质。鹅去氧胆酸是家禽动物胆汁中的主要有效成分之一，也是合成熊去氧胆酸的化合物，该物质在临床上可以消融胆固醇类结石，还有减缓咳嗽、平息气喘、祛痰与抵抗炎症的作用。作为甾体类化合物中的一种，牛磺7-酮石胆酸是牛磺鹅去氧胆酸氧化7-羟基后的化合物，是合成熊去氧胆酸过程中得到的中间产物，具有抵抗肿瘤作用，有关于牛磺7-酮石胆酸的文献资料与实验研究并不多，暂时还无法得知其抗肿瘤祛痰的具体药理机理。牛

15、磺胆酸钠是其与鹅去氧胆酸结合生成牛磺鹅去氧胆酸时所残留的已知杂质，牛磺胆酸钠主要是蛇胆汁中的化合物。长期稳定性试验按照中国药典第四部里面的原料药物与制剂稳定性实验指导准则，需要在靠近药物的实际贮存条件下进行长时间的稳定性实验。它的目的主要是根据实验结果计算制定药物的有效期。试验是取三批市面销售包装的原料药物供试品，在条件为温度30，误差范围为2、相对湿度60%，误差范围为10%的稳定箱中搁置12个月，或者在条件为温度30，误差范围为2、相对湿度65%，误差范围为5%的稳定箱中搁置12个月。因为我国南北方的气候有一定的差异，由实验研究者根据实验室的条件确定选择哪一种试验条件。取样的时间间隔为3个

16、月，分别在0到12个月之中，每隔三个月取供试品，然后按照所生产供试品的稳定性重点考察的项目来检测。该实验应该使用模拟小桶对原料药物进行长期保存，但是封装的条件和所用到的材料应该和模拟大桶是一样的。本公司所生产的牛磺鹅去氧胆酸为原料药，所以该稳定性试验重点考察项目是性状、含量和有关物质含量的变化。1.3高效液相色谱高效液相色谱法是一种色谱方法。这种方法首先是使用高压输液泵将配制好的不同浓度的盐类、有机相流动相或两者的混合液泵入对应的色谱柱中分离，然后再在检测器中对供试品进行测定。高效液相色谱仪有多个组成部分，它们分别是进样器、高压输液泵、检测器、色谱柱、数据处理系统等。一般色谱柱都是由硅胶作为填

17、补剂，色谱柱根据分离原理可分为四大类：正相色谱柱、反相色谱柱、离子交换色谱柱、手性分离色谱柱。目前常见的检测器有六种，分别是紫外可见分光光度检测器、荧光检测器、示差折光检测器、电化学检测器、蒸发光散射检测器和质谱检测器，该实验使用的检测器是示差折光检测器和紫外吸收检测器。相比于其他检测方法，高效液相色谱法的优点就是选择性高、高效、分析速度快、灵敏度高和自动化程度高19。2 实验仪器与药品本实验采用的分析仪器是赛默飞 ultimate3000高效液相色谱仪，色谱柱为 thermo syncronis -c18250mm，5m），谱图处理采用变色龙色谱工作站。表1 主要仪器设备详细信息汇总表tab

18、le 1 main instrument summary table for more information仪器名称产地来源型号/规格药品稳定性试验箱重庆市永生实验仪器厂shh-500sd高效液相色谱仪ultimate3000色谱柱thermo syncronisc18250mm，5m）电子天平bsa224s卡尔费休水分滴定仪瑞士万通915 kf ti-touchph计梅特勒-托利多fe28-tris溶剂过滤器1000ml容量瓶witeg labortechnik gmbh10/20/50/100ml移液管1/2/5ml数显恒温水浴锅hh-8实验药品表2 试药与供试品详细信息汇总表table

19、 2 the summary information of reagent and test samples名称级别来源批号乙腈色谱纯sinence1201a0476甲醇色谱纯sinence1201m0612磷酸二氢钾分析纯广州化学试剂厂20160501-1磷酸分析纯广州化学试剂厂20160601-1牛磺 7-酮石胆酸对照品北京药物所标定p070161103牛磺胆酸国家标准品中国食品药品检定研究院111616-201605鹅去氧胆酸国家标准品中国食品药品检定研究院110806-201507牛磺鹅去氧胆酸国家标准品中国食品药品检定研究院110846-201007牛磺鹅去氧胆酸供试品自制p0501

20、61101p050161102p0501611033 方法与结果三批牛磺鹅去氧胆酸供试品采用pe材料袋包装，每袋 10 克，放在温度 252、相对湿度 6010的药品稳定性试验箱中存放，然后每隔三个月进行取样检测，直到12个月完成稳定性试验。性状的观察检测牛磺鹅去氧胆酸产品为白色结晶性粉末，没有臭味，味道较为苦涩。于0、3、6、9、12个月从药品稳定性试验箱的模拟小桶取出三批样品，仔细观察其外观颜色、形态以及气味，并记录下来。水分的测定使用915卡尔费休水分滴定仪，根据碘和二氧化硫在吡啶和甲醇的混合溶液中和一定的水发生反应的原理来测定水分。于0、3、6、9、12个月从药品稳定性试验箱的模拟小桶

21、取出三批供试品，在干燥的实验室，使用万分之一天平，用称量小舟称取约0.1g供试品，将天平归零，将称量小舟中的供试品置于已标定并且平衡好的卡尔费休水分滴定仪，用“减重称重”3.3牛磺鹅去氧胆酸中鹅去氧胆酸的测定3.3.1色谱条件本实验使用赛默飞u3000高效液相色谱仪，thermo syncronisc18 色谱柱（4.6mm 250 mm ，5m），以乙腈-（400ml甲醇+900ml水+0.4ml磷酸）=50:50为流动相，检测器为rid，柱温为30，流速为1ml/min，每次进样量为100l，采集时间为35min。3.3.2试液配制流动相：乙腈-（400ml甲醇+900ml水+0.4ml磷

22、酸）=50:50，该流动相所用有机相均为色谱级，不用过滤，但要超声去气泡。稀释剂：60%乙腈，乙腈为色谱级，不用过滤。系统适应性溶液：精密称取鹅去氧胆酸对照品20mg至20ml容量瓶中,用60%乙腈溶解并定容至20ml制成1mg/ml的溶液，作为系统适用性溶液,倒1ml-1.5ml至进样小瓶中，每次进样量为20l。对照品限度溶液：精密称取60mg鹅去氧胆酸对照品到20ml的容量瓶中，。供试品溶液：精密称取三批牛磺鹅去氧胆酸原料药供试品（p050161101、p050161102、p050161103）60mg分别放在20ml的容量瓶中，用稀释剂溶解后定容到刻度，得到所需供试品溶液，每批供试品平

23、行两份。3.3.3系统适应性系统适应性溶液每次的进样量是20l，采集时间长度是鹅去氧胆酸主峰出峰时间的4倍。3.4牛磺鹅去氧胆酸中有关物质（tca、t7k）的测定3.4.1色谱条件本实验使用赛默飞u3000高效液相色谱仪，thermo syncronisc18 色谱柱（4.6mm 250 mm ，5m），以磷酸二氢钾（磷酸调节ph至）-甲醇（3:7）为流动相，检测器为紫外检测器，检测波长为210nm，柱温为30，流速为1ml/min，有关物质测定进样量为20l，采集时间为60min。3.4.2试液配制流动相：磷酸二氢钾（磷酸调节ph至）-甲醇（3:7），该流动相所用有机相均为色谱级，不用过滤，

24、但要超声去气泡。稀释剂：60%乙腈，乙腈为色谱级，不用过滤。系统适应性溶液：精密称取牛磺鹅去氧胆酸对照品、牛磺胆酸对照品、牛磺7-酮石胆酸对照品20mg至同一个20ml容量瓶中,用60%乙腈超声溶解后定容至刻度线制成1mg/ml的溶液，作为系统适用性溶液备用。供试品溶液：精密称取三批牛磺鹅去氧胆酸原料药供试品（p050161101、p050161102、p050161103）60mg分别放在三个20ml容量瓶中，用60%乙腈超声溶解后定容至刻度，就可以得到3mg/ml的供试品储备液。对照品溶液：用移液管精密称取3mg/ml的供试品储备液至100ml的容量瓶中，用60%乙腈溶解并定容至刻度线。3

25、.5牛磺鹅去氧胆酸的含量测定3.5.1色谱条件 使用的高效液相色谱仪型号是赛默飞u3000，thermo syncronisc18 色谱柱（4.6mm 250 mm ，5m），以磷酸二氢钾（磷酸调节ph至）-甲醇（3:7）为流动相，检测器为紫外检测器，检测波长为210nm，柱温为30，流速为1ml/min，进样量为10l，采集时间为30min。3.5.2试液配制流动相：磷酸二氢钾（磷酸调节ph至）-甲醇（3:7），该流动相所用有机相均为色谱级，不用过滤，但要超声去气泡。稀释剂：60%乙腈，乙腈为色谱级，不用过滤。对照品溶液：精密称取牛磺鹅去氧胆酸对照品20mg至20ml容量瓶，用60%乙腈定容

26、到刻度线就可以得到1mg/ml的对照品溶液。供试品溶液：精密称取三批牛磺鹅去氧胆酸原料药供试品（p050161101、p050161102、p050161103）60mg分别放在三个20ml容量瓶中，用60%乙腈溶解后定容至刻度，就可以得到3mg/ml的供试品溶液。3.5牛磺鹅去氧胆酸长期稳定性试验结果图1 12月系统适用性图谱figure 1 system suitability map of 12th month牛磺7-酮石胆酸、牛磺胆酸、牛磺鹅去氧胆酸的保留时间分别是min、min、min，分离度大于1.5，系统适用性符合规定。表3 牛磺鹅去氧胆酸长期稳定性试验结果table 3 lon

27、g term stability test results of the taurochenodeoxycholic acid批号：p050161101项目 时间质量标准0月3月6月9月12月性状白色结晶性粉末；无臭，味苦白色结晶性粉末；无臭，味苦白色结晶性粉末；无臭，味苦白色结晶性粉末；无臭，味苦白色结晶性粉末；无臭，味苦白色结晶性粉末；无臭，味苦水分6.57.5%7.06%7.02%6.96%6.82%6.66%含量98.0%97.3%96.71%98.59%97.6%97.38%有关物质(hplc)cdca1.0%未检出0.13%0.16%0.18%0.17%t7k1.0%0.05%0.

28、28%0.31%0.35%0.35%tca-na1.0%0.33%0.32%0.32%0.33%0.34%最大未知单杂0.5%0.39%0.23%0.22%0.23%0.24%未知总杂1.0%0.96%0.32%0.49%0.56%0.65%表4 牛磺鹅去氧胆酸长期稳定性试验结果table 4 long term stability test results of the taurochenodeoxycholic acid批号：p050161102项目 时间质量标准0月3月6月9月12月性状白色结晶性粉末；无臭，味苦白色结晶性粉末；无臭，味苦白色结晶性粉末；无臭，味苦白色结晶性粉末；无臭，味

29、苦白色结晶性粉末；无臭，味苦白色结晶性粉末；无臭，味苦水分6.57.5%7.06%7.04%7.04%6.91%6.83%含量98.0%97.3%96.48%98.70%97.6%97.78%有关物质(hplc)cdca1.0%未检出0.07%0.10%0.12%0.12%t7k1.0%0.05%0.31%0.39%0.39%0.38%tca-na1.0%0.31%0.31%0.35%0.35%0.32%最大未知单杂0.5%0.37%0.24%0.24%0.24%0.23%未知总杂1.0%0.93%0.32%0.40%0.53%0.56%表5 牛磺鹅去氧胆酸长期稳定性试验结果table 5 l

30、ong term stability test results of the taurochenodeoxycholic acid批号：p050161103项目 时间质量标准0月3月6月9月12月性状白色结晶性粉末；无臭，味苦白色结晶性粉末；无臭，味苦白色结晶性粉末；无臭，味苦白色结晶性粉末；无臭，味苦白色结晶性粉末；无臭，味苦白色结晶性粉末；无臭，味苦水分6.57.5%7.12%6.92%6.94%6.67%6.84%含量98.0%96.9%96.93%98.87%97.2%97.04%有关物质(hplc)cdca1.0%未检出0.05%0.09%0.13%0.13%t7k1.0%0.06%

31、0.30%0.27%0.41%0.41%tca-na1.0%0.34%0.33%0.22%0.34%0.32%最大未知单杂0.5%0.39%0.25%0.15%0.24%0.23%未知总杂1.0%0.30%0.38%0.32%0.59%0.57%图2 三批供试品含量变化图figure 2 content variation of three groups of test samples 4 讨论在系统适应性实验中，各个有关物质的分离度大于1.5，表明所用的色谱柱效能良好，说明所采用的高效液相色谱方法和色谱条件适宜进行牛磺鹅去氧胆酸的长期稳定性试验。因为牛磺鹅去氧胆酸、鹅去氧胆酸、牛磺胆酸、牛磺

32、7-酮石胆酸等物质在反相色谱柱中的保留时间比较集中，所以需要在流动相中加入磷酸来改变流动相的ph,以此来延后牛磺鹅去氧胆酸、鹅去氧胆酸、牛磺胆酸、牛磺7-酮石胆酸在反相色谱柱中的保留时间，并且使得各有关物质的色谱峰在图谱表现中分离良好。长期稳定性试验进行到12个月时，正值冬天，在配制流动相、稀释剂和其他试液时，应将试剂放置到数显恒温水浴锅中加热至正常室温25后再进行配制与定容，配制流动相时也要注意溶剂的过滤，否则实验结果会出现误差，数据将失去信服力。长期稳定性结果表明，我公司所生产的牛磺鹅去氧胆酸原料药使用市面销售的包装，在温度252、相对湿度60%10%的稳定箱中存放12个月后，形状、含量以

33、及有关物质含量指标与刚生产时并没有显著波动，说明该产品稳定性较好。供试品的水分、有关物质的含量均在质量标准要求范围内，鹅去氧胆酸、牛磺7-酮石胆酸、牛磺胆酸等已知有关物质在储存过程中含量会增加，说明牛磺鹅去氧胆酸在存放过程中会继续发生化学反应或分解，生成杂质，但过程缓慢。供试品的含量在六个月时出现了增加，此现象应该是人为操作误差引起的。另外，三批供试品牛磺鹅去氧胆酸的含量97%左右，低于质量标准所要求的98%，说明我公司所生产的牛磺鹅去氧胆酸还不能符合上市要求，仍需继续努力改进工艺，争取早日达到质量标准，牛磺鹅去氧胆酸产品早日上市。5 结论与展望按照中国药典原料药物与制剂稳定性试验指导原则，采

34、取高效液相色谱法检测牛磺鹅去氧胆酸在不同时间的性状、含量以及有关物质含量，结果发现牛磺鹅去氧胆酸的含量以及有关物质的含量都没有显著变化，表明我公司所用工艺生产的牛磺鹅去氧胆酸产品稳定性较好，达到了国家药典的标准。基于现有的实验数据，我公司会更加完善生产牛磺鹅去氧胆酸原料药的技术与工艺条件，争取使产品达到更高一层的水平。据目前研究水准与进度，不久将来，市面上的牛磺鹅去氧胆酸产品会更加多元化，其更多潜在功效也将会被开发，能更大范围的保障人类健康水平。参考文献1j.精细化工，2007,24（11）：1087-1090.2 herold b c，kirkpatrick r，marcellino d，et al. bilesalts：naturea detergents for the prevent of sexuallytransmitted diseasesj.antimicrob agents chemother，1999，43 （4）：745-752.3 胡霞敏, 石朝周.牛磺结石及其游离胆汁酸在小鼠镇咳祛痰抗炎模型上的作用比较j .中国临床药学杂志,2001 , 1