常用的生化反应PPT课件

1、常用的生化反应 常用的生化反应 认识染色方法鉴别细菌的局限性认识染色方法鉴别细菌的局限性 掌握几种常用生化反应的原理、方法和结果判断掌握几种常用生化反应的原理、方法和结果判断 常用的生化反应 产气肠杆菌（产气肠杆菌（Enterobacter arogenes） 大肠埃希菌（大肠埃希菌（Escherichia coli） 普通变形杆菌（普通变形杆菌（Proteus vulgaris） 铜绿假单胞菌（铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa） 常用的生化反应 细菌对各种糖的分解能力及代谢产物不同，可借以鉴细菌对各种糖的分解能力及代谢产物不同，可借以鉴 别细菌。一般非致病菌能发酵多

2、种单糖，如大肠埃希菌能别细菌。一般非致病菌能发酵多种单糖，如大肠埃希菌能 分解葡萄糖和乳糖，产生甲酸等产物，并有甲酸脱氢酶，分解葡萄糖和乳糖，产生甲酸等产物，并有甲酸脱氢酶， 可将其分解为可将其分解为CO2和和H2，故生化反应结果为产酸产气，以，故生化反应结果为产酸产气，以 “ ”表示。伤寒沙门菌分解葡萄糖产酸，但无甲酸脱氢表示。伤寒沙门菌分解葡萄糖产酸，但无甲酸脱氢 酶，故生化结果为产酸不产气，以酶，故生化结果为产酸不产气，以“+”表示。伤寒沙门表示。伤寒沙门 菌不能分解乳糖，以菌不能分解乳糖，以“-”表示。表示。 常用的生化反应 常用的生化反应 将实验菌种接种到将实验菌种接种到2支支O-F

3、管中管中 在其中在其中1支管中加入无菌液体石蜡，厚度支管中加入无菌液体石蜡，厚度0.5cm左右。左右。 35培养培养18-24小时。小时。 结果结果 开口管开口管 加石蜡管加石蜡管 结果结果 黄色黄色 黄色黄色 发酵型（发酵型（F） 黄色黄色 绿色绿色 氧化型（氧化型（O） 绿色绿色 蓝色蓝色 产碱型产碱型 常用的生化反应 产气肠杆菌能使丙酮酸脱羧生成中性的乙酰甲基甲产气肠杆菌能使丙酮酸脱羧生成中性的乙酰甲基甲 醇，乙酰甲基甲醇被氧化（在碱性溶液中）生成二乙酰，醇，乙酰甲基甲醇被氧化（在碱性溶液中）生成二乙酰， 后者可与含胍基的化合物反应生成红色化合物，称后者可与含胍基的化合物反应生成红色化合

4、物，称VPVP试试 验阳性。大肠埃希菌不能生成乙酰甲基甲醇，验阳性。大肠埃希菌不能生成乙酰甲基甲醇，VPVP阴性。阴性。 VPVP甲液：甲液：5%5%萘酚萘酚 VPVP乙液：乙液：40%KOH40%KOH 常用的生化反应 常用的生化反应 产气肠杆菌使丙酮酸脱羧后形成中性产物，培养液产气肠杆菌使丙酮酸脱羧后形成中性产物，培养液 pHpH5.45.4，甲基红指示剂呈桔黄色，为甲基红试验阴性，甲基红指示剂呈桔黄色，为甲基红试验阴性， 大肠埃希菌分解葡萄糖产生丙酮酸，培养液呈酸性大肠埃希菌分解葡萄糖产生丙酮酸，培养液呈酸性pHpH 5.45.4，指示剂甲基红指示剂甲基红呈红色，称甲基红试验阳性。呈红色

5、，称甲基红试验阳性。 常用的生化反应 常用的生化反应 能利用枸橼酸盐作为唯一碳源的细菌如产气肠杆菌，能利用枸橼酸盐作为唯一碳源的细菌如产气肠杆菌， 分解枸橼酸盐生成碳酸盐，同时分解培养基的铵盐生成氨，分解枸橼酸盐生成碳酸盐，同时分解培养基的铵盐生成氨， 由此使培养基变为碱性，使由此使培养基变为碱性，使指示剂溴麝香草酚蓝（指示剂溴麝香草酚蓝（BTBBTB） 由淡绿转为深蓝，此为枸橼酸盐利用试验阳性。由淡绿转为深蓝，此为枸橼酸盐利用试验阳性。 常用的生化反应 常用的生化反应 含有色氨酸酶的细菌（如大肠埃希菌、变形杆菌等）含有色氨酸酶的细菌（如大肠埃希菌、变形杆菌等） 可分解色氨酸生成吲哚（靛基质）

6、，若加入对二甲基氨基可分解色氨酸生成吲哚（靛基质），若加入对二甲基氨基 苯甲醛，与吲哚结合形成玫瑰吲哚，呈红色，称吲哚试验苯甲醛，与吲哚结合形成玫瑰吲哚，呈红色，称吲哚试验 阳性。阳性。 常用的生化反应 常用的生化反应 变形杆菌、乙型副伤寒沙门菌等能分解含硫氨基酸如变形杆菌、乙型副伤寒沙门菌等能分解含硫氨基酸如 胱氨酸、甲硫氨酸等，生成硫化氢。在有醋酸铅或硫酸亚胱氨酸、甲硫氨酸等，生成硫化氢。在有醋酸铅或硫酸亚 铁存在时，则生成黑色硫化铅或硫化亚铁，可借以鉴别细铁存在时，则生成黑色硫化铅或硫化亚铁，可借以鉴别细 菌。菌。 常用的生化反应 常用的生化反应 变形杆菌具有尿素酶，可分解尿素产生氨，培

7、养基变形杆菌具有尿素酶，可分解尿素产生氨，培养基 呈碱性，以酚红为指示剂检测呈红色。呈碱性，以酚红为指示剂检测呈红色。 常用的生化反应 常用的生化反应 吲哚（吲哚（I I）、甲基红（）、甲基红（M M）、）、VPVP（V V）、枸橼酸盐利用）、枸橼酸盐利用 （C C）四种试验，常用于鉴定肠道杆菌，合称之为）四种试验，常用于鉴定肠道杆菌，合称之为 IMViCIMViC试验试验。大肠埃希菌呈大肠埃希菌呈“+-”+-”，产气肠杆菌为，产气肠杆菌为 “-+”-+”。 常用的生化反应 原理：硝酸盐还原反应包括两个过程：一是在合成过程中，原理：硝酸盐还原反应包括两个过程：一是在合成过程中， 硝酸盐还原为亚

8、硝酸盐和氨，再由氨转化为氨基酸和细胞硝酸盐还原为亚硝酸盐和氨，再由氨转化为氨基酸和细胞 内其他含氮化合物；二是在分解代谢过程中，硝酸盐或亚内其他含氮化合物；二是在分解代谢过程中，硝酸盐或亚 硝酸盐代替氧作为呼吸酶系统中的终末受氢体。能使硝酸硝酸盐代替氧作为呼吸酶系统中的终末受氢体。能使硝酸 盐还原的细菌从硝酸盐中获得氧而形成亚硝酸盐和其他还盐还原的细菌从硝酸盐中获得氧而形成亚硝酸盐和其他还 原性产物。原性产物。 常用的生化反应 硝酸盐还原的过程因细菌不同而异硝酸盐还原的过程因细菌不同而异: 有的细菌仅使硝酸盐还原为亚硝酸盐，如大肠埃希菌；有的细菌仅使硝酸盐还原为亚硝酸盐，如大肠埃希菌； 有的细

9、菌则可使其还原为亚硝酸盐和离子态的铵；有的细菌则可使其还原为亚硝酸盐和离子态的铵； 有的细菌能使硝酸盐或亚硝酸盐还原为氮，如假单胞有的细菌能使硝酸盐或亚硝酸盐还原为氮，如假单胞 菌等。菌等。 硝酸盐还原试验系测定还原过程中所产生的亚硝硝酸盐还原试验系测定还原过程中所产生的亚硝 酸。酸。 常用的生化反应 试剂：甲液试剂：甲液 对氨基苯磺酸对氨基苯磺酸 乙液乙液 -奈胺奈胺 结果：出现红色为阳性。结果：出现红色为阳性。 若加入试剂后无颜色反应，可能是：硝酸盐没有被还原，若加入试剂后无颜色反应，可能是：硝酸盐没有被还原， 试验阴性；硝酸盐被还原为氨和氮等其他产物而导致假试验阴性；硝酸盐被还原为氨和氮

10、等其他产物而导致假 阴性结果，这时应在试管内加入少许锌粉，如出现红色则阴性结果，这时应在试管内加入少许锌粉，如出现红色则 表明试验确实为阴性。若仍不产生红色，表示试验为假阴表明试验确实为阴性。若仍不产生红色，表示试验为假阴 性。性。 若要检查是否有氮气产生，可在培养基管内加一小倒管，若要检查是否有氮气产生，可在培养基管内加一小倒管， 如有气泡产生，表示有氮气生成。如有气泡产生，表示有氮气生成。 常用的生化反应 原理：具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢生成水和原理：具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢生成水和 新生态氧，继而形成分子氧出现气泡。新生态氧，继而形成分子氧出现气泡。 试剂：试剂：3

11、 3过氧化氢溶液。过氧化氢溶液。 方法：取待测菌涂在玻片上，然后加方法：取待测菌涂在玻片上，然后加3 3过氧化氢数滴立过氧化氢数滴立 即观察结果。即观察结果。 结果：有大量气泡产生者为阳性。不产生气泡者为阴性。结果：有大量气泡产生者为阳性。不产生气泡者为阴性。 常用的生化反应 原理：氧化酶（细胞色素氧化酶）是细胞色素呼吸酶系统的原理：氧化酶（细胞色素氧化酶）是细胞色素呼吸酶系统的 最终呼吸酶。具有氧化酶的细菌，首先使细胞色素最终呼吸酶。具有氧化酶的细菌，首先使细胞色素C C氧化，氧化， 再由氧化型细胞色素再由氧化型细胞色素C C使对苯二胺氧化，生成有色的醌类化使对苯二胺氧化，生成有色的醌类化

12、合物。合物。 试剂：试剂：1 1盐酸四甲基对苯二胺或盐酸四甲基对苯二胺或1 1盐酸二甲基对苯二胺。盐酸二甲基对苯二胺。 方法：取洁净滤纸一小块，沾取菌少许，然后加试剂。方法：取洁净滤纸一小块，沾取菌少许，然后加试剂。 结果：细菌在与试剂接触结果：细菌在与试剂接触1010秒内呈深紫色，为阳性。秒内呈深紫色，为阳性。 常用的生化反应 葡萄糖葡萄糖 乳糖乳糖1 10 铁：枸橼酸铁铵铁：枸橼酸铁铵 指示剂：酚红指示剂：酚红 我们人为的把高层代表葡萄糖，斜面代表乳糖。我们人为的把高层代表葡萄糖，斜面代表乳糖。 常用的生化反应 常用的生化反应 以葡萄糖，乳糖为例以葡萄糖，乳糖为例 葡萄糖是最早利用的单糖，

13、发酵葡萄糖的中间产葡萄糖是最早利用的单糖，发酵葡萄糖的中间产 物丙酮酸为酸性，酚红指示剂为黄色。物丙酮酸为酸性，酚红指示剂为黄色。 常用的生化反应 1 1、斜面生长的菌量多，面积大，跟氧分子接触的面积也、斜面生长的菌量多，面积大，跟氧分子接触的面积也 大大 氧化氧化 丙酮酸丙酮酸 COCO2 2H H2 2O O中性，中性，PHPH不变不变 2 2、斜面蛋白质被细菌利用，氨基酸被利用产生、斜面蛋白质被细菌利用，氨基酸被利用产生NHNH3 3，碱性，碱性， 酚红指示剂为红色。酚红指示剂为红色。 常用的生化反应 高层中丙酮酸浓度高，跟氧分子接触少，在高层中丙酮酸浓度高，跟氧分子接触少，在2424小

14、时内小时内 不会被氧化，因此仍为黄色。不会被氧化，因此仍为黄色。 常用的生化反应 高层黄色斜面红色高层黄色斜面红色 常用的生化反应 如葡萄糖，乳糖，则高层与斜面均为黄色（如葡萄糖，乳糖，则高层与斜面均为黄色（2424小时小时 内）。内）。 如果延长培养时间，高层中的丙酮酸也会进一步氧化，同如果延长培养时间，高层中的丙酮酸也会进一步氧化，同 时细菌利用蛋白质后产碱性物质越来越多，则高层也会变时细菌利用蛋白质后产碱性物质越来越多，则高层也会变 为红色。为红色。 常用的生化反应 有些细菌能分解含硫氨基酸如胱氨酸、甲硫氨酸等，有些细菌能分解含硫氨基酸如胱氨酸、甲硫氨酸等， 生成硫化氢生成硫化氢 H H

15、2 2S SFeFe 黑色的硫化亚铁黑色的硫化亚铁 常用的生化反应 问：有无葡萄糖，乳糖的情况？为什么？问：有无葡萄糖，乳糖的情况？为什么？ 常用的生化反应 半固体半固体 M M代表动力代表动力 I I代表吲哚（靛基质）代表吲哚（靛基质） U U代表尿素代表尿素 结果观察时先观察有无动力，试验管有无变红（三分之二结果观察时先观察有无动力，试验管有无变红（三分之二 管变红为尿素阳性），然后加入管变红为尿素阳性），然后加入对二甲基氨基苯甲醛，观对二甲基氨基苯甲醛，观 察吲哚试验结果。察吲哚试验结果。 常用的生化反应 思考题：思考题： KIA的试验原理的试验原理 常用的生化反应 1 1、用革兰染色法观察四种试验细菌的形态学特征、用革兰染色法观察四种试验细菌