慢病毒相关技术介绍

1、August 6, 2021 宝日医生物技术（北京）有限公司宝日医生物技术（北京）有限公司 Clontech 慢病毒相关技术介绍 慢病毒慢病毒相关技术相关技术介绍介绍 2 28/6/20218/6/2021 背景简介背景简介 病毒载体病毒载体基因传递基因传递 慢病毒载体慢病毒载体 容易容易 转染转染 物理方法物理方法 非病毒载体非病毒载体 Clontech 慢病毒相关产品 可以转染非分裂细胞胞 实现持久有效表达 逆转录病毒载体逆转录病毒载体 腺病毒载体腺病毒载体 慢病毒慢病毒相关技术相关技术介绍介绍 3 38/6/20218/6/2021 内容介绍内容介绍 1 提高慢病毒滴度的策略提高慢病毒滴

2、度的策略2 提高转导效率的方法提高转导效率的方法3 Lenti-X慢病毒包装系统慢病毒包装系统 1 慢病毒慢病毒相关技术相关技术介绍介绍 4 48/6/20218/6/2021 Lenti-X慢病毒包装系统慢病毒包装系统 慢病毒慢病毒相关技术相关技术介绍介绍 5 58/6/20218/6/2021 背景简介背景简介 慢病毒慢病毒 的应用的应用 生物生物 安全性安全性 病毒病毒 包装滴度包装滴度 靶细胞靶细胞 转导效率转导效率 l 病毒包装流程示意图病毒包装流程示意图 慢病毒慢病毒相关技术相关技术介绍介绍 6 68/6/20218/6/2021 第四代包装系统第四代包装系统Lenti-X HTX

3、 Lenti-X HTX 将将Gag-Pro和和RT-IN分离，降低产生具有复制分离，降低产生具有复制 能力病毒的几率，大大提高生物安全性。能力病毒的几率，大大提高生物安全性。 创新点创新点I 慢病毒慢病毒相关技术相关技术介绍介绍 7 78/6/20218/6/2021 第四代包装系统第四代包装系统Lenti-X HTX Lenti-X HTX 引入引入Tet-Off诱导表达系统，诱导表达系统，大大提高病毒滴度！大大提高病毒滴度！ 创新点创新点II 慢病毒慢病毒相关技术相关技术介绍介绍 8 88/6/20218/6/2021 Lenti-X包装系统包装系统 通过流式细胞仪测定：通过流式细胞仪测

4、定： Lenti-X包装系统获得的病毒滴度包装系统获得的病毒滴度 高高 于于108 IFU/ml； 只需只需10 l 病毒上清即可转导大部病毒上清即可转导大部 分分HeLa细胞。细胞。 Lenti-XLenti-X 慢病毒慢病毒相关技术相关技术介绍介绍 9 98/6/20218/6/2021 Clontech慢病毒系统的优点慢病毒系统的优点 将将 Gag和和Pol分离分离 同时转染同时转染5个载体才可以包装出具有感染个载体才可以包装出具有感染 性的病毒性的病毒 更高的生物更高的生物 安全性安全性 引入引入Tet-Off技术技术 包含改善载体性能和提高病毒滴度的包含改善载体性能和提高病毒滴度的

5、WPRE、RRE和和cPPT/CTS序列序列 更高的包装更高的包装 病毒滴度病毒滴度 基于基于VSV-G的病毒可应用于几乎所有类的病毒可应用于几乎所有类 型细胞型细胞 ECO 取代取代VSV-G，只限于鼠类细胞，只限于鼠类细胞 两种形式的两种形式的 病毒：泛嗜病毒：泛嗜 性和单嗜性性和单嗜性 慢病毒慢病毒相关技术相关技术介绍介绍 10108/6/20218/6/2021 慢病毒载体的种类慢病毒载体的种类 cDNA载体载体 pLVX-Puro RNAi载体载体pLVX-shRNA1 pLVX-shRNA2 ProteoTuner载体载体 pLVX-PTuner pLVX-Ptuner Green

6、 诱导表达载体诱导表达载体 pLVX-Tet-On Advanced pLVX-Tet-Off Advanced pLVX-Tight-Puro 慢病毒慢病毒相关技术相关技术介绍介绍 11118/6/20218/6/2021 慢病毒载体的种类慢病毒载体的种类 pLVX-EF1-IRES-Puro pLVX-EF1-IRES-ZsGreen1/mCherry pLVX-EF1-AcGFP1-N1 & C1 EF1启动子载体启动子载体 荧光标签载体荧光标签载体 pLVX-DsRed-Monomer-C1 & N1 pLVX-AcGFP1-N1 & C1 双表达载体双表达载体 pLVX-DsRed-

7、Monomer-C1 & N1 pLVX-IRES-ZsGreen1 慢病毒慢病毒相关技术相关技术介绍介绍 12128/6/20218/6/2021 慢病毒相关系统慢病毒相关系统 1、慢病毒包装系统慢病毒包装系统 l 高效，可获得的病毒滴度高达高效，可获得的病毒滴度高达5 X 108 IFU / ml l 具有两种假型病毒：泛嗜性（具有两种假型病毒：泛嗜性（VSV-G）和单嗜性（）和单嗜性（ECO） Lenti-X HTX Packaging System (631247/49) Lenti-X HTX Ecotropic Packaging System (631251) 2、慢病毒慢病毒c

8、DNA表达系统表达系统 l 高效基因传递系统，可用于几乎所有哺乳动物细胞高效基因传递系统，可用于几乎所有哺乳动物细胞 Lenti-X Expression System (632164) Lenti-X Bicistronic Expression System (Neo/Hyg/Puro, 632181/2/3) 3、慢病毒慢病毒RNAi表达系统表达系统 l 可以获得高效率的可以获得高效率的RNAi，可用于几乎所有哺乳动物细胞，可用于几乎所有哺乳动物细胞 Lenti-X shRNA Expression System (632177) 慢病毒慢病毒相关技术相关技术介绍介绍 13138/6/2

9、0218/6/2021 4、慢病毒诱导表达系统、慢病毒诱导表达系统 l 可以在几乎所有哺乳动物细胞中精确地诱导基因表达可以在几乎所有哺乳动物细胞中精确地诱导基因表达 Lenti-X Tet-On Advanced Inducible Expression System (632162) Lenti-X Tet-Off Advanced Inducible Expression System (632163) 5、慢病毒报告系统慢病毒报告系统 l 利用荧光或化学发光检测法研究启动子活性利用荧光或化学发光检测法研究启动子活性 l 可用于多种类型细胞可用于多种类型细胞 Lenti-X DD Cyan

10、/Green/Red Reporter System (631748/51/53) Lenti-X Ready-To-Glow Secreted Luciferase Reporter System (631746) 慢病毒相关系统慢病毒相关系统 慢病毒慢病毒相关技术相关技术介绍介绍 14148/6/20218/6/2021 提高慢病毒滴度的策略提高慢病毒滴度的策略 慢病毒慢病毒相关技术相关技术介绍介绍 15158/6/20218/6/2021 影响慢病毒滴度的因素影响慢病毒滴度的因素 转染效率转染效率 l 转染试剂的类型转染试剂的类型 l 转染的转染的DNA量量 l 转染的转染的DNA质量质

11、量 p 细胞种类细胞种类 p 细胞密度细胞密度 p 细胞状态细胞状态 包装细胞包装细胞 u 测定滴度时细胞测定滴度时细胞 的选择的选择 u 测定方法的选择测定方法的选择 测定滴度测定滴度 慢病毒慢病毒相关技术相关技术介绍介绍 16168/6/20218/6/2021 Clontech提高慢病毒滴度的策略提高慢病毒滴度的策略 策略策略 p 使用的病毒载体中包含改善载体性能和使用的病毒载体中包含改善载体性能和 提高病毒滴度的提高病毒滴度的WPRE、RRE和和 cPPT/CTS序列序列提供多种病毒载体提供多种病毒载体 p 包装组分中含有经过比例优化的包装组分中含有经过比例优化的5种非病种非病 毒载体

12、毒载体引入引入Tet-Off诱导表达系统诱导表达系统 p 配以配以Tet 系统专用的胎牛血清（系统专用的胎牛血清（FBS） p 使用高品质的使用高品质的293T包装细胞系包装细胞系 Lenti-X 293T Cell Line p 使用创新型的转染试剂使用创新型的转染试剂Xfect 慢病毒慢病毒相关技术相关技术介绍介绍 17178/6/20218/6/2021 高品质包装细胞系高品质包装细胞系Lenti-X 293T Time of transfectionHarvest Time 慢病毒慢病毒相关技术相关技术介绍介绍 18188/6/20218/6/2021 Lenti-X 293T VS

13、293FT Clontech的的 293T包装细胞获得的病毒滴度是包装细胞获得的病毒滴度是293FT的的2.6倍倍 ！ 慢病毒慢病毒相关技术相关技术介绍介绍 19198/6/20218/6/2021 创新型转染试剂创新型转染试剂Xfect (631317/8) 哺乳动物细胞用创新型转染试剂哺乳动物细胞用创新型转染试剂Xfect l应用的细胞类型广泛、转染效率高！应用的细胞类型广泛、转染效率高！ l由可生物降解的、低细胞毒性的纳米颗粒制备而成。由可生物降解的、低细胞毒性的纳米颗粒制备而成。 l操作流程简便、兼容血清。操作流程简便、兼容血清。 慢病毒慢病毒相关技术相关技术介绍介绍 20208/6/

14、20218/6/2021 创新型转染试剂创新型转染试剂Xfect (631317/8) 高效高效的的Xfect 低毒性低毒性的的Xfect 实验验证：实验验证：Xfect转染转染293T包装细胞的效率高达包装细胞的效率高达97%！ 慢病毒慢病毒相关技术相关技术介绍介绍 21218/6/20218/6/2021 提高转导效率的方法提高转导效率的方法 慢病毒慢病毒相关技术相关技术介绍介绍 22228/6/20218/6/2021 慢病毒浓缩试剂盒慢病毒浓缩试剂盒 Lenti-X Concentrator (Cat No.631231&631232) 操作简便，无需超速离心操作简便，无需超速离心 可

15、以纯化大体积病毒样品可以纯化大体积病毒样品 病毒滴度提高病毒滴度提高100倍，回收率高达倍，回收率高达90% 慢病毒慢病毒相关技术相关技术介绍介绍 23238/6/20218/6/2021 快速滴度测定快速滴度测定 Lenti-X qRT-PCR Titration Kit (Cat No.631235) 基于基于HIV-1的的qRT-PCR法的滴度测定试剂盒法的滴度测定试剂盒 1 1天内即可完成收获病毒、测定滴度和感染靶细胞天内即可完成收获病毒、测定滴度和感染靶细胞 可以获得精确的病毒滴度，为获得稳定的感染效果奠定基可以获得精确的病毒滴度，为获得稳定的感染效果奠定基 础础 慢病毒慢病毒相关技

16、术相关技术介绍介绍 24248/6/20218/6/2021 快速滴度测定快速滴度测定 LentiTM-X GoStixTM (Cat No.631243,631244&631241) 阳性结果：病毒滴度阳性结果：病毒滴度5 x 105 IFU/ml 30秒内即可定性地判断病毒滴度秒内即可定性地判断病毒滴度 可以确定收获病毒的最佳时机可以确定收获病毒的最佳时机 操作简便操作简便 慢病毒慢病毒相关技术相关技术介绍介绍 25258/6/20218/6/2021 快速高效转导相关产品快速高效转导相关产品 Lenti-X Accelerator(Cat No.631256,631257&631254)