FCM原理及临床应用新PPT学习教案

1、会计学1 FCM原理及临床应用新原理及临床应用新PPT课件课件 第1页/共45页 第2页/共45页 第3页/共45页 Flow Cell Injector Tip Sheath fluid 第4页/共45页 第5页/共45页 第6页/共45页 Injector Tip Sheath fluid 第7页/共45页 第8页/共45页 FALS Sensor Laser 前向散射光前向散射光 第9页/共45页 前向散射光前向散射光 第10页/共45页 FALS Sensor 90LS Sensor Laser 侧向散射光侧向散射光 第11页/共45页 侧向散射光侧向散射光 第12页/共45页 第13

2、页/共45页 常用荧光染料的特性 荧光染料 激发波长 (nm) 发射波长(nm) 用途 颜色 FITC 488 525 免疫荧光 绿色 PE(RD1) 488 575 免疫荧光 橙色 ECD 488 620 免疫荧光 橙红 PeCy5 488 675 免疫荧光 红 PI 488 620 DNA染色 橙红 PECy7 488 755 免疫荧光 深红 PerCP 488 670 APC 633 670 第14页/共45页 第15页/共45页 Laser forward light scatter (size) 90o light scatter (granularity) Green fluore

3、scence Red fluorescence Alive or fixed cells in single cells suspension vibrating flow cell Sheath fluid collection tubes cell sorting Principle of Flow Cytometry Computer for data analysis and result display FSC SSC 第16页/共45页 发检测三色甚至四色荧光信号。发检测三色甚至四色荧光信号。 检测时需注意检测时需注意荧光荧光补偿补偿。 第17页/共45页 荧光染料 激发波长 （n

4、m） 发射波长（nm）颜色 FITC+PE488525、575绿色、橙色 FITC+PeCy5488525、675绿色、红色 FITC+ECD488525、625绿色、橙红色 FITC+PE+PeCy5488525、575、675绿色、橙色、红色 FITC+ECD+PeCy5488525、625、675 绿色、橙红色、红色 第18页/共45页 4 Color Single Laser (488nm) FITC/PE/ECD/PC5 第19页/共45页 第20页/共45页 第21页/共45页 第22页/共45页 第23页/共45页 第24页/共45页 根据根据T T淋巴细胞分泌细胞因子的不同还可

5、将淋巴细胞分泌细胞因子的不同还可将CD4+CD4+、CD8+CD8+分为分为 CD4+: Th1: CD4+ IFN-r+ Th2: CD4+ IL4+ Th0: CD4+ IFN-r+ IL4+ CD8+: Tc1: CD8+ IFN-r+ Tc2: CD8+ IL4+ Tc0: CD8+ IFN-r+ IL4+ 第25页/共45页 辅助性辅助性T T细胞亚群的生物学功能及临床意义细胞亚群的生物学功能及临床意义 Th1Th1细胞：细胞：介导细胞免疫、细胞毒性T细胞的生长和活化、巨 噬细胞的活化、介导迟发型过敏反应。其功能亢进将导致炎 症慢性迁延，器官特异性自身免疫病，急性排异反应和接触 性皮

6、炎等的发病和免疫病理损伤。 Th2Th2细胞细胞 ：介导体液免疫，促进B细胞的生长、活化和分化 ，是IgG1和IgE类抗体的转换因子，其功能亢进将导致特异 性过敏反应，参与高IgE综合症和嗜酸性粒细胞增多症。 第26页/共45页 CD25- /CD3+：静止：静止T 细胞细胞 第27页/共45页 第28页/共45页 第29页/共45页 免疫分型的临床意义 弥补弥补FABFAB分型的不足分型的不足 诊断其他血液系统肿瘤诊断其他血液系统肿瘤 诊断仅表达个别非本系列相关抗原的急性诊断仅表达个别非本系列相关抗原的急性 白血病白血病 （LYLY+ +AMLAML、MYMY+ +ALLALL） 急性双系或

7、双表型白血病的诊断急性双系或双表型白血病的诊断 骨髓增生异常综合征（骨髓增生异常综合征（MDSMDS）免疫表型分析的临床）免疫表型分析的临床 意义意义 免疫分型对鉴别慢性淋巴细胞增生性疾病各亚型亦免疫分型对鉴别慢性淋巴细胞增生性疾病各亚型亦 有肯定的诊断价值有肯定的诊断价值 第30页/共45页 以下为各系列较特别的标志：以下为各系列较特别的标志： AML： MPO、 CD33、 CDl3、 CDl4 CDl5、 CDllb、 CDllc T-ALL： cmCD3、 CD2、 CD5、 CD7、 CD4CD8、 CD38 B-ALL： cCD22、cCD79、 CDl9、 CDl0、 CD24、

8、 HLADR、 CD20、 CD38 造血干祖细胞造血干祖细胞: CD34、 CDll7、 CD38、 HLA-DR、 ACl33 第31页/共45页 在在AMLAML各亚型的免疫分型中有时仍较难分辨，有以各亚型的免疫分型中有时仍较难分辨，有以 下特点可供参考：下特点可供参考： CD41CD41、CD61CD61是巨核细胞的标志，见于是巨核细胞的标志，见于FABFABM7M7，但，但 血小板粘附于某细胞上可造成假阳性。血小板粘附于某细胞上可造成假阳性。 CD71CD71与血型糖蛋白是红系的标志，见于与血型糖蛋白是红系的标志，见于FABFABM6M6型。型。 CDl4CDl4、 CD64CD64

9、是单核细胞的标志，见于是单核细胞的标志，见于M4M4或或M5M5。 FABFABM3M3，t(15t(15；17)17)者典型的免疫表型是者典型的免疫表型是CDl3+CDl3+、 CD33+CD33+、 CD9+CD9+、 CD38+CD38+、 CD34-CD34-、 DR-DR-。 t(8t(8；21)21)M2M2的表型为的表型为 CDl3+CDl3+、 DR+DR+、 CD34+CD34+、 CD33+CD33+、 CDl5+CDl5+、 CDl9+CDl9+或或CD56+CD56+。 M0M0与与M1M1较难区分，应有髓系标志而无淋系标志，胞浆较难区分，应有髓系标志而无淋系标志，胞浆

10、MPOMPO应阴性。应阴性。 CD34CD34及及DRDR在在M0M0较强，并可伴有较强，并可伴有CD7CD7与与CD4CD4。 第32页/共45页 CDll7+ CDll7+多见于多见于AMLAML。 CD7CD7常与常与CD34CD34共表达，共表达， CD4CD4见于见于M4M4、M5M5。 CD2+CD2+见见 于于M4EoM4Eo，往往伴有，往往伴有1616号染色体异常。号染色体异常。 M3M3亦可有亦可有 CD56+CD56+表表 达。正常粒细跑可表达达。正常粒细跑可表达 CDl0CDl0。由此可见，单抗本身有其。由此可见，单抗本身有其 多向性，勿轻易判断为杂合型白血病。多向性，勿

11、轻易判断为杂合型白血病。 T TB BALLALL可分为几个亚型，然而对临床价值不大。可分为几个亚型，然而对临床价值不大。 但若但若B BALLALL伴有伴有CD34CD34表达时，应进一步作遗传学与基因表达时，应进一步作遗传学与基因 检测，以确定是否是检测，以确定是否是Ph+ALLPh+ALL，不论是，不论是M Mbcl/ablbcl/abl或或m-bcrm-bcr ablmRNAablmRNA阳性者，其预后均较差，应接受大剂量化疗或阳性者，其预后均较差，应接受大剂量化疗或 早期接受异基因骨髓移植。早期接受异基因骨髓移植。 第33页/共45页 FCMFCM检测白血病微小残留病变检测白血病微小

12、残留病变(MRD):(MRD): 过去认为过去认为 FCMFCM测定残存白血病细胞不可靠，测定残存白血病细胞不可靠， 因为现用的因为现用的 McAbMcAb不能鉴别正常血细胞与白血病不能鉴别正常血细胞与白血病 细胞。虽然至今细胞。虽然至今尚未发现白血病细胞特异抗原，尚未发现白血病细胞特异抗原， 但近来有人提出根据白血病细胞的以下特征，但近来有人提出根据白血病细胞的以下特征， FCMFCM检测的敏感度可明显提高检测的敏感度可明显提高 第34页/共45页 白血病细胞的某些抗原表达量明显高于相应白血病细胞的某些抗原表达量明显高于相应 的正常血细胞的正常血细胞 如小儿如小儿ALLALL，其，其CDl0

13、CDl0+ +细胞的荧光强度可高细胞的荧光强度可高 达达3-43-4个对数值，而其个对数值，而其 CD45CD45则为弱阳性或阴则为弱阳性或阴 性。性。 相应正常细胞相应正常细胞 CDl0CDl0+ +的细胞荧光强度约为的细胞荧光强度约为2 2个个 对数值，对数值， CD45CD45为阳性。若能定量则更可靠。为阳性。若能定量则更可靠。 第35页/共45页 第36页/共45页 第37页/共45页 组织标本的正确处理：组织标本的正确处理： 去除脂肪、结缔组织去除脂肪、结缔组织 洗涤除去红细胞洗涤除去红细胞 用眼科剪剪成肉糜状用眼科剪剪成肉糜状 用用250250至至350350目的铜网过滤目的铜网过

14、滤 要求：要求： 细胞碎片、细胞连片少，单细胞要多细胞碎片、细胞连片少，单细胞要多 第38页/共45页 第39页/共45页 细胞周期：细胞周期：DNA 倍体倍体 G0 期：期：DNA 合成静止期合成静止期2N G1 期：期：DNA 合成前期合成前期2N S 期：期： DNA 合成期合成期2N-4N G2 期：期：DNA 合成后期合成后期4N M 期：期： 细胞分裂期细胞分裂期4N 第40页/共45页 DNA非2倍体出现是鉴别良性与恶性肿瘤的特异性指标: 良性肿瘤和正常组织良性增生不出现良性肿瘤和正常组织良性增生不出现DNADNA非非2 2倍体细胞倍体细胞 而恶性肿瘤常可出现异倍体细胞；而恶性肿

15、瘤常可出现异倍体细胞； 实体瘤以多倍体居多；实体瘤以多倍体居多； 实体恶性肿瘤的非实体恶性肿瘤的非2 2倍体出现率倍体出现率70%,70%,淋巴瘤和白血病淋巴瘤和白血病 以亚二倍体居多以亚二倍体居多, ,出现率达出现率达50%50%。 交界性肿瘤形态学介于良恶性之间交界性肿瘤形态学介于良恶性之间, ,难于监别。如果交难于监别。如果交 界性肿瘤出现异倍体即已具有恶性特征界性肿瘤出现异倍体即已具有恶性特征,尽管病理形尽管病理形 态学尚不能证实态学尚不能证实, ,也应视为恶性。也应视为恶性。 第41页/共45页 观察病情演变观察病情演变 判断预后判断预后 非整倍体的肿瘤恶性程度高，复发率高，预后差。非整倍体的肿瘤恶性程度高，复发率高，预后差。 近二倍体和二倍体肿瘤近二倍体和二倍体肿瘤 : : 预后好。预后好。 但少数肿瘤的但少数肿瘤的DNADNA分析对预后无判断价值。分析对预后无判断价值。 S S期细胞比例的评估对肿瘤恶性程度和预后有意义期细胞比例的评估对肿瘤恶性程度和预后有意义, ,高