甲型H1N1流感病毒样品采集运送及检验技术

1、甲型H1N1流感病毒样品采集、 运送及检验技术 2009.7 一、标本的采集种类和要求 1 、推荐采集的呼吸道标本种类 疾病发病后应尽快采集如下标本：鼻拭子、咽拭子、鼻腔 吸取物、鼻腔冲洗液。气管插管的病人也应收集气管吸取物。 标本应置于无菌病毒采样液，并立即用冰块或冰排保存或置 于4 （冰箱），并马上送至实验室。（临床样品采集人 员及实验室检测人员的感染控制指导请见相关文件。） 采 样同时填写疑似人感染甲型H1N1感染病例标本采样单。（附 表1） w1 ）鼻腔抽吸液的采集方法）鼻腔抽吸液的采集方法 抽吸器一端的管子连接在抽吸泵上，另一端的管子从外鼻孔 完全插入鼻腔，启动抽吸泵采集鼻腔液在抽吸

2、器中。 2 2 ）鼻腔擦拭液的采集方法）鼻腔擦拭液的采集方法 将灭菌棉棒完全插入鼻腔中，摩擦鼻甲数次，采集粘膜表皮。 3 3 ）咽喉擦拭液的采集方法）咽喉擦拭液的采集方法 将灭菌棉棒从口腔完全插入咽喉中，以咽后壁、上颚扁桃的 发红部位为中心，摩擦数次，采集粘膜表皮。 采集时，要采集时，要 注意不要触碰到唾液。（采样视频网址注意不要触碰到唾液。（采样视频网址 httphttp:/ 1266336791.html1266336791.html w2、拭子的选择 标本应使用头部为合成纤维的拭子（例如， 聚酯纤维），用铝或塑料做柄。不推荐棉拭 子和木柄。标本采集管应包含3毫升病毒采样 液（含有蛋白质稳

3、定剂，阻止细菌和真菌生 长的抗生素，缓冲液） 3、临床标本储存要求、临床标本储存要求 保存在保存在4（不能超过（不能超过4天）或者天）或者-70或或- 70以下。有条件的实验室均应保存在以下。有条件的实验室均应保存在-70 或或-70以下。不应保存在以下。不应保存在-20。 4、标本的分装处理、标本的分装处理 标本送至实验室后，立即进行处理，避免反标本送至实验室后，立即进行处理，避免反 复冻融。将原始标本分为三份，一份用于核复冻融。将原始标本分为三份，一份用于核 酸检测，一份用于病毒分离，一份保存待复酸检测，一份用于病毒分离，一份保存待复 核。（实际操作：采集鼻拭子核。（实际操作：采集鼻拭子2

4、份，咽拭子份，咽拭子2 份放在同一病毒采样液中，其目的为了增加份放在同一病毒采样液中，其目的为了增加 阳性检出率）阳性检出率） 5、标本的运输、标本的运输 疑似人感染甲型疑似人感染甲型H1N1感染病例列为感染病例列为 A类，类， 用用UN2814包装运输。填写疑似人感染甲型包装运输。填写疑似人感染甲型 H1N1感染病例标本送检单（附表感染病例标本送检单（附表2）。）。 w二、核酸检测二、核酸检测 w基于基于PCR原理的核酸检测方法是一种快速有效的诊断方法，在突发传染原理的核酸检测方法是一种快速有效的诊断方法，在突发传染 病应急工作中发挥了巨大作用。病应急工作中发挥了巨大作用。 w1、基于、基于

5、real-time RT-PCR的方法检测新的甲型的方法检测新的甲型H1N1流感病毒（引物和流感病毒（引物和 探针序列为美国探针序列为美国CDC设计）：设计）： 4月月29日日WHO网站上公布了美国网站上公布了美国CDC设计的针对此次甲型设计的针对此次甲型H1N1流感病毒的流感病毒的 real-time RT-PCR引物和探针，此实验用于检测疑似甲型引物和探针，此实验用于检测疑似甲型H1N1流感病例的呼流感病例的呼 吸道样本吸道样本, 因此，用此因此，用此real-time RT-PCR的方法，建议首先筛选甲型流感病毒的方法，建议首先筛选甲型流感病毒 并排除季节性流感病毒和并排除季节性流感病毒

6、和H5N1禽流感病毒。禽流感病毒。real-time RT-PCR方法参考。方法参考。 w2、基于、基于RT-PCR的方法检测新的甲型的方法检测新的甲型H1N1流感病毒（引物序列为国家流感病毒（引物序列为国家 流感中心设计）：流感中心设计）： w目前国家流感中心设计了目前国家流感中心设计了RT-PCR方法检测新的甲型方法检测新的甲型H1N1流感病毒流感病毒 w三、病毒分离鉴定三、病毒分离鉴定 可采用鸡胚和可采用鸡胚和/或或MDCK细胞进行流感病毒细胞进行流感病毒 分离。具备相应条件的网络实验室在收到标分离。具备相应条件的网络实验室在收到标 本后本后24h内进行病毒接种。内进行病毒接种。 w四、

7、适用于实验室工作人员的甲型四、适用于实验室工作人员的甲型H1N1流感流感 病毒生物安全病毒生物安全 （一）实验室级别及个人防护（一）实验室级别及个人防护 1、对采集自属于感染甲型、对采集自属于感染甲型H1N1流感病毒流感病毒 疑似病例的患者的临床标本进行的诊断性实疑似病例的患者的临床标本进行的诊断性实 验工作，在验工作，在BSL-2实验室内进行。所有样本实验室内进行。所有样本 操作均应在生物安全柜（操作均应在生物安全柜（BSC）内进行。遵）内进行。遵 循生物安全三级个人防护。循生物安全三级个人防护。 2、对采集自属于感染甲型、对采集自属于感染甲型H1N1流感病毒流感病毒 疑似病例的患者的临床标

8、本进行的病毒分离疑似病例的患者的临床标本进行的病毒分离 培养工作，应在培养工作，应在BSL-3实验室内进行，并遵实验室内进行，并遵 循生物安全三级个人防护。循生物安全三级个人防护。 w（二）健康监测 1、所有人员均应自测发热及其他症状。 2、感染甲型H1N1流感病毒的症状包括咳 嗽、喉咙痛、呕吐、腹泻、头痛、流鼻涕和 肌肉疼痛。如有不适，应立即向上级报告。 3、如有人员在无防护情况下暴露于甲型 H1N1流感确诊病例的临床标本或活病毒，应 考虑在暴露后的7天时间里使用奥司他韦或扎 那米韦进行抗病毒药物预防。 w五、附表和附件 附表1 疑似人感染甲型H1N1感染病例标本采 样单 附表2 疑似人感染甲型H1N1感染病例标本送 检单 附表1 疑似人感染甲型H1N1流感病毒病例标本采样单 姓名性别年龄职业 现住 址 发病 日期 标本 (#)种 类 标本 量 （g 或ml) 采集 日期 备注 w 选项：参照传染病报告卡。 #选项：A鼻咽拭子、 B鼻咽吸取物、C鼻腔 冲洗液、D鼻腔吸取物、E气管吸取物、F其 他（如为其他，请在表格中注明） 采集人员： 采集单位（盖章）： 附表2 疑似人感染甲型H1N1流感病毒病例标本送检单 姓名性别年龄职业 现住址发病 日期 标本 (#)种 类 标本 量