DB13T 1107-2009 乳及乳制品中4种β—内酰胺类药物残留量的测定方法 液相色谱—串联质谱法

1、DB13T 1107-2009 乳及乳制品中4种内酰胺类药物残留量的测定方法 液相色谱串联质谱法ICS 67.100 X 16 ?可 北 省 地DB13 方 标 准DB 13/T 1107-2009 乳及乳制品中4种 ?-内酌肢类药物残留量的测定方法 液相色谱一串联质谱法Determination of four kinds of ?-lactams residues in milk and milk products LC-MS/MS method 2009-0号27 发布 2009-06-11 实施河北省质量技术监督局发布DB13/ T 1107- 2009月 I j 吕 本标准中的附录A

2、、附录B为资料性附录。 本标准由河北省质量技术监督局提出并归口。 本标准起草单位：河北省食品安全重点实验室、河北省食品质量监督检验研究院、河北医科大学基础医学院、河北师范大学生命科学学院、河北省化学工业研究院。 本标准主要起草人：张岩、李挥、张敬轩、吕品、刘辰魁、王丽霞、李丛芬、范斌、康素芬、苏红维、刘敬泽、杨小龙。? .bzfxw4 ?DB13J11 .bzfxwDB 13/T 1107-2009乳及乳制品中4种p一内酰胺类药物残留量的测定方法 液相色谱一串联质谱法范围 本标准规定了乳及乳制品中青霉素G.青霉素V、氨苄西林、阿莫西林4种0一内酞胺类药物残留量的液相色谱一串联质谱测定方法。 本

3、标准适用于生鲜乳、巴士杀菌（灭菌）乳和乳粉中青霉素G、青霉素V.氨苄西林、阿莫西林残留量的测定。 本标准的方法检出限：青霉素G、青霉素V为1. 0 ?g/kg;氨苄西林、阿莫西林为2. 0 ?g/kg.2规范性引用文件 一F列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法原理 试样中的4种p一内酰胺类药物残留，用Oasis HLB或相当的固相萃取柱

4、净化，液相色谱一串联质谱仪测定，外标法定量。4试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为优级纯，水为GB/T 6682规定的一级水。4.，甲醇：色谱纯。4. 2乙睛：色谱纯。4. 3乙酸：优级纯。4.4乙睛十水（1+3)：量取25 mL乙睛与75 mL水混合。4. 5 Oasis HLB固相萃取柱或相当者：500 mg, 6 mL。使用前分别用5 mL甲醇和10 mL水预处理，保持柱体湿润。4. 6青霉素G、青霉素V,氨苄西林、阿莫西林：纯度）99%04. 7青霉素G、青霉素V,氨苄西林、阿莫西林标准储备溶液：准确称取适量的每种标准物质，分别用乙腈配制成浓度为1. 0 mg/mL的标准储备溶液。储

5、备液贮存在一18冰柜中。4. 8青霉素G.青霉素V,氨苄西林、阿莫西林标准E作溶液：根据需要吸取适量青霉素G.青霉素V.氨节西林、阿莫西林标准储备溶液，用空白样品稀释成适当浓度的基质混合标准工作溶液。仪器液相色谱一串联四极杆质谱仪：配有电喷雾离子源(ESI)0分析天平：感量0. 1 mg和0.01 g0漩涡混匀器。固相萃取真空装置。贮液器：50 mL 0微量进样器：25?L, 100?L0刻度样品管：5 mL，精度为0. 1 mLo?9?QU，?010DB13/T 1107? 2009 乳及乳制品中4种自-内酷服类药物残留量的测定方法液相色谱-串联质谱法1 范围本标准规定了乳及乳制品中青霉素

6、G、青霉素 V、氨韦西林、阿莫西林 4 种札内酷肢类药物残留量的液相色谱一串联质谱测定方法。本标准适用于生鲜乳、巴士杀菌(灭菌)乳和乳粉中青霉素 G、青霉素 V、氨韦两林、阿莫西林残留量的测定。本标准的方法检出限:青霉素 G、青霉素 V 为1. 0 g/kg; 氨书西林、阿莫西林为 2.0 趴鸣。2 规范性引用文件F列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682 分析实验室用水规

7、格和试验方法3 原理试样中的 4 种 内酷肢类药物残留，用 Oasis HLB 或相当的固相萃取柱净化，液相色i普串联质谱仪测定，外标法定量。4 试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为优级纯，水为 GB/T 6682 规定的-级水。4. 1 甲醇t 色谱纯。4. 2 乙睛:色谱纯。4. 3 乙酸:优级纯。4.4 乙睛+水(1+3): 量取 25 mL 乙睛与 75 mL 水混合。4. 5 Oasis HLB 固相萃取柱或相当者 500 mg , 6 mL。使用前分别用 5 mL 甲醇和 10 mL 水预处理，保持柱体湿润。4. 6 青霉素 G、青霉素 V、氨书西林、阿莫西林:纯度;三99%。4.

8、 7 青霉素 G、青霉素 V、氨节回林、阿莫西林标准储备榕液:准确称取适量的每种标准物质，分别用乙脂配制成浓度为1. 0 mglmL 的标准储备溶液。储备液贮存在一18;C冰柜中。4. 8 青霉素 G、青霉素 V、氨节回林、阿莫两林标准作溶液:根据需要吸取适量青霉素 G、青霉素V、氨书同林、阿莫两林标准储备榕液，用空白样品稀释成适当浓度的基质泪合标准 r作梅液。5 仪器5. 1 液相色谱.串联四极杆质谱仪:配有电喷雾离子源 (ESI) 。5.2 分析天平:感量 0.1 mg 和 0.01 g 。5. 3 璇涡温匀器。5.4 困相萃取真空装置。5. 5 贮液器 50mL 。5. 6 微量进样器

9、25L， 100 L 。5. 7 刻度样品管 5mL，精度为 0.1 mL 。.bzfxwDB13/ T 1107- 20095. 8真空泵：真空度应达到80 kPa?5. 9 pH计：测量精度度0.02.5.10氮吹仪。6测定步骤6. 1试样溶液的制备 称取5g试样（精确到0.01 g）置于150 m L二角瓶中，加人45 mL去离子水，于漩涡混匀器上快速混合1 min。样液移至下接Oasis HLB柱的贮液器中，以小于或等于3 mL/min的流速通过固相萃取柱后，用5 mL水洗柱，弃去全部流出液。在65 kPa的负压下，减压抽干20 min，最后用3 mL甲醇洗脱，收集洗脱液于刻度样品管中

10、，于40水浴中用氮吹仪吹干，用乙睛定容至1 mL，摇匀后，供液相色谱一串联质谱仪测定。6. 2测定6.2. 1液相色谱条件 色谱柱：SunFireTM C 18 3. 5林m, 150 mm X 2. 1 mm或相当者。 流动相及流速见表10 柱温: 30?C o 进样量：20 ?L0表1液相色谱梯度洗脱条件时间min 流速（协L /min) 水（含0.4乙酸）（） 乙睛（）0.00 200 860.0 40. 015. 00 200 35. 0 65. 015. 01 200 60. 0 40. 025. 01 200 60. 0 40. 06. 2. 2质谱条件 离子源：电喷雾离子源(ES

11、I)o 扫描方式：正离子扫描。 检测方式：多反应监测。 电喷雾电压：5 500 V 雾化气压力：0. 055 MPao 气帘气压力：0. 079 MPao 辅助气流速：6 L/mind 离子源温度：400 ?C 定性离子对、定量离子对和去簇电压（DP),聚焦电压（FP)、碰撞能量（CE）及碰撞室出口电压 (CXP)，见表206.2. 3液相色谱一串联质谱测定6.2.3. 1定性测定 在相同试验条件下，样品中待测物质与基质标准溶液中对应物质的保留时间偏差在士2. 5之内；样品色谱图中各定性离子对相对丰度与浓度接近的基质标准溶液的色谱图中离子相对丰度相比，若偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品

12、中存在该残留。6.2.3.2定量测定 在仪器最佳工作条件下，用青霉素G、青霉素V,氨苄西林、阿莫西林标准储备溶液配成的基质混合标准溶液分别进样，以标准工作溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。用标准? .bzfxw ?DB13/T 11 5.8 5.9 5.10 8 6. 1 C18 3.5 抖m ， 150 mm 2 智 lmm10 ) I (%) (%) 40.0 65.0 40.0 40.0 0.00 15.00 15.01 25.01 200 200 200 200 60.0 35.0 60.0 60.0 (ESI)。0.055 MPao O. MPao 、B/口且有A

13、/43、 出口2 .bzfxw DB13/ T 1107-2009工作曲线对样品进行定量，样品溶液中青霉素G、青霉素V,氨苄西林、阿莫西林的响应值均应在仪器测定的线性范围内。 在上述色谱条件下，青霉素G、青霉素V,氨苄西林、阿莫西林的总离子流图参见附录A.青霉素G、青霉素V,氨苄西林、阿莫西林的保留时间见附录B.表2四种0一内酞胺类药物的定性离子对、定量离子对、去簇电压、聚焦电压、 碰撞能量和碰撞室出口电压名称 定性离子对 (m/z)定量离子对 (m/z)碰撞能量 V去簇电压 V聚焦电压 V碰撞室出口电 压/V青霉素G 335/160335/17635/1602 02345 200 11青霉素

14、V 351/160351/192351/16020154 0 200 11氨苄西林 350八92350/160350/16023202 0 200 11阿莫西林 366/114366/208366/2083 01921 200 11表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度 > 5 0 > 2 0 - 5 0 > 10-20 1 0允许的最大偏差 士20 士25 士30 士506. 3平行试验 按上述步骤，对同一试样进行平行试验测定。6.4空白试验 除不称取试样外均按上述分析步骤进行。结果计算从标准工作曲线上得到试样中相应的R-内酞胺类药物浓度后，结果按公式（1)计

15、算： cxVx1000A二，?，?，?，二，. (1 ) m x 1000X试样中被测组分残留量，单位为微克每千克（林g/kg )一从标准工作曲线得到的试样溶液中被测组分的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL).V试样溶液定容体积，单位为毫升（mL).m最终试样溶液所代表的试样质量，单位为克（g).注：计算结果需将空白值扣除。8精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%aDB131T 1107-2009 工作曲线对样品进行定量，样品溶液中青霉素 G、青霉素 V、氨书西林、阿莫西林的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件r，青霉素 G、青霉素 V、氨

16、书面林、阿莫西林的总离子流图参见附录 A。青霉素G、青霉素 V、氨韦西林、阿莫西林的保留时间见附录 B 。表 2 四种自内M?虫类药物的定性离子对、定量离子对、去簇电压、聚焦电压、碰撞能量和碰撞室出口电压名称定性离于对 定量离子对 碰撞能量 去旗电压 聚焦电压(rn!z) Cm/z) V V V 压/v335/160 20 青霉素 G 35/160 45 200 11 335/176 23 351/160 20 青霉素 V 351/160 40 200 11 351/192 15 350/192 23 氨*西林 350/160 20 200 11 350/160 20 366/114 30 阿

17、莫西林 366/208 21 200 11 366/208 19 - 一一一一表 3 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度允许的最大偏差>50 士 20>2050 :t 25 叫-m> 运 10士 506. 3 平行试验按上述步骤，对同-试样进行平行试验测定。6.4 空白试验除不称取试样外均按上述分析步骤进行。7 结果计算从标准工作曲线上得到试样中相应的萨内酷胶类药物浓度后，结果按公式(1)计算:cx Vx 1000 x= . (1) mxl000 X一-试样中被测组分残留量，单位为微克每千克 (glkg) 。r一一从标准工作曲线得到的试样溶液中被测组分的浓度，单位为纳克每毫升 (nglmU 。V一一试样洛液定容体积，单位为毫升 (mL) 。m一一最终试样溶液所代表的试样质量，单位为克 Cg) 。注:计算结果需将空白值扣除。8 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。3 .bzfxwDB 13/ T 1107-2009 附录A （资料性附录）四种p一内酞胺类药物标准物质的总离子流图四种p一内酞胺类药物标准物质的总离子流图，见图A. 10 3.9e5 I容Qe5 ? ? 0 ? ? ? ? ? ? ?11. 060，015 t/Inin1阿莫西林，2.49 min2-氨苄西林，9. 8