血细胞分析原理及白细胞散点图临床意义

1、一、血细胞各通道分析原理及散点图分析 二、散点图案例分析 一、血细胞各通道分析原理及散点图分析一、血细胞各通道分析原理及散点图分析 血细胞分析仪提供了大量的警示信息和可供参考的研究血细胞分析仪提供了大量的警示信息和可供参考的研究 参数，如直方图，参数，如直方图，DIFFDIFF散点图，散点图， NRBCNRBC散点图等。实验散点图等。实验 人员可根据这些信息从大量的标本中挑出需要重点关注人员可根据这些信息从大量的标本中挑出需要重点关注 的的, ,进行涂片复检确认，提高工作效率，减少漏诊率。进行涂片复检确认，提高工作效率，减少漏诊率。 DIFF WBC/BASO NRBC 半导体激光 荧光染色（

2、聚次甲基+噁嗪 ） 主要原理 FSC前向散射光：细胞大小 SSC侧向散射光：复杂程度（细胞的颗粒 和细胞核等内含物的信息） SFL侧向荧光：核酸含量（DNA 、RNA) DIFF通道分析原理 4DL(阴离子表面活性剂） 完全溶解RBCPLT 在WBC膜上打孔 溶血素中加入有机酸，与嗜酸粒细胞内的碱 性蛋白粘附，使Eo颗粒的复杂程度增加，在 SSC显示复杂程度是最大的。 4DS 对核酸染色 纵坐标：侧向荧光（SFL） 反映核酸含量 横坐标：侧向散射光（SSC） 反映细胞内部复杂程度 化学粘附化学粘附 大分子有机酸与嗜酸 粒细胞中的碱性颗粒 发生化学粘附 嗜酸粒细胞大分子有机酸 RNA/DNA荧光

3、染色原理 成熟白细胞：高荧光特性 网织红细胞：弱荧光特性 血小板： 成熟RBC： 原始细胞： 幼稚细胞： 微弱荧光特性 无荧光特性 极高荧光特性 极高荧光特性 荧光染色WBC分类的优势 检测异常细胞 提供幼稚粒细胞信息（IG） 提供原始细胞信息（Other） 10 SFB溶血剂 （酸性，低渗） 溶解RBCPLT 除嗜碱性粒细胞以外的白细胞处理成 裸核形态 Baso保持原状 纵坐标：前向散射光（纵坐标：前向散射光（FSC） 反反 映细胞大小映细胞大小 横坐标：侧向散射光（横坐标：侧向散射光（SSC） 反映细胞内部复杂程度反映细胞内部复杂程度 嗜碱 其它有 核细胞 嗜碱粒细胞溶血素为酸性低渗溶液，

4、 Baso内的蛋白为酸性蛋白，因此在该 溶液中受到保护，而其他有核细胞则被 溶解成裸核 WBC/BASO 通道分析原理 NRBC通道分析原理 NR溶血剂 完全溶解RBC，PLT WBC保持原状 NRBC溶解为裸核 NR染液对核酸染色 纵坐标：前向散射光（FSC） 反映细胞大小 横坐标：侧向荧光（SFL） 反映核酸含量 NRBC% = NRBC# / NRBC_WBC# 出现有核红时 WBC的修正 红系增生活跃时，外周血易见较多的红系增生活跃时，外周血易见较多的NRBC，在，在WBC 计数时不被溶解，常被计入淋巴细胞中。计数时不被溶解，常被计入淋巴细胞中。 WBC增多对增多对RBC 计数的干扰计

5、数的干扰 RBC：阻抗法RBC值含WBC WBC100*109/L时，需校正红系统参数 贫血越严重，对RBC影响越大 血红蛋白通道 光电比色法光电比色法 SLS（十二烷基磺酸钠）：无氰无毒（十二烷基磺酸钠）：无氰无毒 二、散点图案例分析二、散点图案例分析 嗜碱性粒细胞增多症 在BASO散点图上，嗜碱区 域出现大量散点，另外 DIFF散点图上，中性区域 的左下方也为嗜碱区域， 也 出现了大量的散点。 BASO%：仪器13.4% 镜检13.5% AML-M1(例1) 不可信不可信 DIFF散点图显示淋巴与单核之 间 融合，有分类结果，但不可 信。 IMI散点图也提示大量原始细 胞。 镜检发现有77

6、.5%的原始细胞。 细胞表面标志CD13和CD33阳 性， CD36阴性；为急性髓细 胞性白血 病。 AML-M2 DIFF散点图显示白细胞完全融合 且不分类。 IMI散点图显示大量原始细胞和幼 稚粒细胞。 NRBC散点图：红色散点 镜检发现有90%的原始细胞、3% 的早幼粒细胞哦、1%中幼粒细胞。 流式细胞仪检测结果显示细胞表 面 标志CD13和CD33阳性，为髓 细 胞性白血病。 AML-M3 DIFF散点图显示白细胞完全融合且不分 类。 IMI散点图也显示大量原始细胞和幼稚粒 细胞。 NRBC散点图：红色散点 镜检发现3%的原始细胞，91%的早幼粒 细胞、3.5%的中幼粒细胞，0.5%晚

7、幼 粒细胞。 AML-M4 DIFF散点图，白细胞区域出现大量 灰白色散点，完全融合，不分类。 大 致分成两群，一群为原始细胞， 一 群为幼稚粒细胞。 IMI散点图也显示大量原始细胞和幼 稚粒细胞。 AML-M5b DIFF散点图淋巴与单核 融 为一体，不分类，IMI 散点图显示大量原始细胞 和幼 稚粒细胞。 镜检发现59%的原始细胞， 0.5%的早幼粒细胞，单 核细 胞24.5%。 慢粒危象 DIFF散点图OTHER区域出现大 量散点，中性粒细胞上方也有少 量散点，IMI散点图也出现大量 红色散点，仪器报警提示有大量 原 始细胞和幼稚粒细胞。 NRBC散点图：红色散点 镜检发现38.5%的原

8、始细胞，幼 稚粒细胞和幼稚的单核细胞。酯 酶染色阴性或弱阳性，可被氟化 钠抑制。这是一例慢粒急单变。 MDS DIFF：淋巴细胞和单核细胞 之间界限不清，提示出现原 始 细胞。中性粒细胞散点向 左下方延伸到嗜碱区域。 IMI：少量红点 NRBC：幼红 镜检：原始：1%，BASO： 5%，NRBC：2.5/100WBC 范*，女，67y。2016.11，诊 断为MDS伴原始细胞增多（10% ） DIFF散点图淋巴与单核区域融 合，提示出现原始细胞 报警提示异常淋巴细胞/原始细 胞，异淋？ 镜检：47%原始淋巴细胞，未见 异淋。血片POX（-）。 2018.4.MDS急淋变 MDS急淋变 急性T淋

9、巴细胞白血病 DIFF散点图淋巴与单核完 全融合，IMI散点图几乎没 有红色散点，仪器提示异 常 淋巴/原始淋巴细胞。 镜检发现有59.5%的异常淋 巴细胞。 本例被诊为ATL。 CLL 淋巴与单核区域分界不 清，仪器提示淋巴细胞 增多/原始淋巴。 镜检：L：86.5%，幼淋 2.0% 异型淋巴细胞 异型淋巴细胞增高与 多种病毒感染及变态 反应有关。 常见有：传染性单核 细胞增多症、病毒性 肺炎、病毒性肝炎、 肾综合征出血热等病 毒性感染。 特点：胞体增大，胞 质增多、嗜碱性增强 ，细胞核母细胞化， 荧 光强度最强。 散点图特点：嗜酸性粒细胞群向中性粒细胞靠拢，间距小。散点图特点：嗜酸性粒细胞

10、群向中性粒细胞靠拢，间距小。 原因：疟原虫裂殖体破裂，疟色素从感染的血细胞中释放出来，继而被白细胞吞噬，吞噬原因：疟原虫裂殖体破裂，疟色素从感染的血细胞中释放出来，继而被白细胞吞噬，吞噬 了疟色素的白细胞侧向散射光强度改变，显示在散点图靠近中性粒细胞一侧，但也被仪器了疟色素的白细胞侧向散射光强度改变，显示在散点图靠近中性粒细胞一侧，但也被仪器 以以EoEo特有的红色标示出来。特有的红色标示出来。 张时民等张时民等. .血细胞分析仪测定疟原虫感染患者特征二例血细胞分析仪测定疟原虫感染患者特征二例. .中华临床医师杂志，中华临床医师杂志，2011,52011,5（2 2）:633-635:633-

11、635 疟原虫感染的散点图（一）疟原虫感染的散点图（一） 从仪器从仪器报警报警EOEO增高增高或或无无EOEO分类分类结果的结果的1 5011 501份份标本中发现有标本中发现有9 9份份疟疟 原虫标原虫标 本，本，6 6份份散点图表现为散点图表现为EOEO与与NEGNEG之间之间间距缩小间距缩小( (图图1) 1) ，3 3份份报警白细胞散报警白细胞散 点图点图 异常异常, ,且散点图显示且散点图显示EOEO与与NEGNEG之间无间距之间无间距( (图图2)2)。 其他其他1 4921 492份散点图基本正常。因为是真性份散点图基本正常。因为是真性EOEO增多，表现在散点图上是增多，表现在散

12、点图上是EO EO 数量增加，为正常分类散点图数量增加，为正常分类散点图( (图图3)3)。 戴燕，万海英等. XE-2100血细胞分析仪嗜酸粒细胞异常散点图报警筛选疟原虫感染的研究.中华检验医学杂志，2008,31 （7）:763-766 疟原虫感染的散点图（二）疟原虫感染的散点图（二） 谢谢 DIFF WBC/BASO NRBC 半导体激光 荧光染色（聚次甲基+噁嗪 ） 主要原理 FSC前向散射光：细胞大小 SSC侧向散射光：复杂程度（细胞的颗粒 和细胞核等内含物的信息） SFL侧向荧光：核酸含量（DNA 、RNA) DIFF通道分析原理 4DL(阴离子表面活性剂） 完全溶解RBCPLT

13、在WBC膜上打孔 溶血素中加入有机酸，与嗜酸粒细胞内的碱 性蛋白粘附，使Eo颗粒的复杂程度增加，在 SSC显示复杂程度是最大的。 4DS 对核酸染色 纵坐标：侧向荧光（SFL） 反映核酸含量 横坐标：侧向散射光（SSC） 反映细胞内部复杂程度 化学粘附化学粘附 大分子有机酸与嗜酸 粒细胞中的碱性颗粒 发生化学粘附 嗜酸粒细胞大分子有机酸 NRBC通道分析原理 NR溶血剂 完全溶解RBC，PLT WBC保持原状 NRBC溶解为裸核 NR染液对核酸染色 纵坐标：前向散射光（FSC） 反映细胞大小 横坐标：侧向荧光（SFL） 反映核酸含量 NRBC% = NRBC# / NRBC_WBC# AML-M4 DIFF散点图，白细胞区域出现大量 灰白色散点，完全融合，不分类。 大 致分成两群，一群为原始细胞， 一 群为幼稚粒细胞。 IMI散