广西中小规模猪场大肠杆菌病流行情况调查

1、广西中小规模猪场大肠杆菌病流行情况调查?186?疾病防治中国畜牧兽医2011年第38卷第6期广西中小规模猪场大肠杆菌病流行情况调查陈凤莲,赵武,黄红梅,覃绍敏,华俊,马玲,吴健敏,杨威(广西壮族自治区兽医研究所,广西南宁530001)摘要:从广西23家中小规模猪场采集病料,分离,鉴定出致病性大肠杆菌56株,并对其进行血清型鉴定和耐药性检测,结果鉴定出43株致病性大肠杆菌,分属于16种血清型,其中以0.,0,O.,0.和O为优势血清型,占定型菌株的69.76;用2O种常用抗菌药进行药物敏感性试验,发现高敏的药物有头孢拉啶,头孢唑啉,头孢曲松,头孢西丁,多黏菌素B,新霉素,壮观霉素和阿米卡星;而不

2、敏感的药物有青霉素,阿莫西林,强力霉素,卡那霉素,万古霉素,林可霉素.说明这些猪场大肠杆菌的耐药性十分严重,应加强生物安全措施等进行综合防控.关键词:猪大肠杆菌病;血清型;药敏试验;广西中小规模场中图分类号:$851.3文献标识码:A文章编号:16717236(2011)060186一.3大肠杆菌(Escherichiacoli)是人和动物肠道内正常菌群成员之一,人和动物出生后数小时即可经口进入消化道后段,大量繁殖而定居,终生伴随,并经粪便不断散播于周围环境.产肠毒素型大肠杆菌(ETEC)是猪的一种肠道病原菌,能够引起仔猪黄痢,白痢和猪的水肿病,是造成新生仔猪腹泻和断奶后仔猪腹泻的最重要的病原

3、,给养猪业造成严重的经济损失,阻碍养猪业的健康发展.目前,防治猪大肠杆菌病的主要措施是使用疫苗和抗菌药,但是,随着养殖业的快速发展,抗菌药物的不合理使用,导致大肠杆菌对不少药物产生耐药性,给防控本病带来了新的挑战.为了解广西主要中小规模猪场的猪大肠杆菌病流行情况,本课题组于20062009年从广西23个中小规模场采集病料,分离大肠杆菌并对分离的菌株进行血清型鉴定及耐药性检测.1材料与方法1.1材料1.1.1病料来源从广西23个临诊发生典型仔猪黄痢,白痢的中小规模猪场中,采集发病仔猪的肛试粪样或死亡猪的心血和肝脏,共69份病料.1.1.2主要试剂麦康凯培养基(EMB),营养琼脂购自北京某技术有限

4、公司;药敏纸片,微量生化反应管,均购自杭州某微生物试剂有限公司.收稿日期:201011-12作者简介:陈凤莲(1972一),女,广西人,副研究员,研究方向:预防兽医学.通信作者:杨威(1957一),男,广西人,研究员,主要从事动物疫病防治研究.Email:gxyangwei163.tom基金项目:广西科技攻关项目(桂科攻06320021).1.1.3大肠杆菌O抗原单价血清5O种大肠杆菌O抗原单价血清由中国兽医药品监察所提供.1.1.4试验动物试验小白鼠,体重(222.5)g,由广西中医学院实验动物中心提供.1.2细菌的分离,培养将采集病料无菌接种于麦康凯培养基上,37培养1824h后,取粉红色

5、可疑菌落进行革兰氏染色,镜检;取培养特性,形态和革兰氏染色反应均符合大肠杆菌特征的菌株用普通营养琼脂纯化,进行生化鉴定.1.3致病性试验将分离的大肠杆菌分别接种普通肉汤,37培养1618hl稀释细菌到1O.CFu/mL后经腹腔注射小鼠,每株菌注射3只,0.2mL/只;另3只作为阴性对照,腹腔注射0.2mL无菌生理盐水,观察小鼠的发病死亡情况.对死亡小鼠进行剖检,无菌采取肝脏组织分离细菌.1.4大肠杆菌O抗原血清型鉴定将鉴定为大肠杆菌的待检菌株在麦康凯培养基上纯化培养后,接种于营养琼脂斜面37培养24h后,用无菌生理盐水制成浓菌液;先用玻片凝集试验初步筛选可能的O血清型,然后通过试管凝集试验确定

6、其为O血清型;定型标准为血清的试管凝集价1:640.1.5药敏试验用上述分离到的56株致病菌株进行药敏性试验,按照常规药敏纸片扩散法进行操作,测量抑菌圈直径大小;判断标准为抑菌圈直径10mm为耐药,1O2Omm为中度敏感,2Omm为高度敏感.2结果2.1细菌分离与培养从23个中小规模场采集的病料中,共分离出69株具有以下特征的细菌:在普通琼脂平板上生长呈灰白色,半透明,表面隆起,光中国畜牧兽医2011年第38卷第6期疾病防治?187?滑湿润,边缘整齐的圆形菌落,直径l3mm;麦康凯培养基上生长呈粉红色菌落;挑取以上的典型菌落,经涂片,染色,镜检,均可见形态一致的革兰氏阴性,两端钝圆,中等大小的

7、杆菌.绝大部分发酵葡萄糖,乳糖,麦芽糖,甘露醇等,产酸产气;硝酸盐利用,靛基质,MR,运动力等试验呈阳性;蔗糖,明胶,尿素,VP,HS等试验呈阴性.2.2致病性试验将上述69株大肠杆菌接种小鼠,其中56株细菌致小鼠死亡,阴性对照组小鼠健康,说明这56株菌为致病菌株.剖检病鼠可见肠道有出血点,脾脏水肿等病理变化;无菌采取死亡小鼠肝脏组织进行细菌分离,经鉴定均为大肠杆菌.2.3大肠杆菌0抗原血清型鉴定结果通过玻板凝集试验,对56个分离的致病菌株进行鉴定分型,其中有13株未能鉴定出血清型(13/56),其余43个分离株的血清型分属于16种血清型(43/56,占76.78),其优势血清型为O138(9

8、/43),O.(7/43),0.(6/43),O.(5/43)和O(3/43),这5种血清型的菌株占已鉴定菌株的69.76(30/43),同时这些血清型来源的范围也较广,代表了广西目前主要流行的血清型,结果见表1.表1大肠杆菌分离株的血清型鉴定结果血清型菌株数百分比()血清型菌株数百分比()O138018085o902lO139O14lO1372O.93Oll916.28O9813.95O6611.63O646.98()454.650244.65Oz2.32O82.4药敏试验选用目前临床上常用的2O种抗菌药对56株致病性大肠杆菌进行药敏试验,其中抑菌作用最强的药物主要有头孢拉啶(98.2),头

9、孢唑啉(98.2),头孢曲松(96.4),头孢西丁(92.8),多黏菌素B(89.3),新霉素(89.3),壮观霉素(85.7)和阿米卡星(80.4);而耐药性强的药物主要有青霉素(89.3),阿莫西林(83.99/6),强力霉素(78.6),卡那霉素(73.2),万古霉素(71.4),林可霉素(64.3),试验结果见表2.表2大肠杆菌分离株的药敏试验结果药物名称高敏中敏耐药菌株数(株)百分比()菌株数(株)百分比()菌株数(株)头孢拉啶氨苄青霉素诺氟沙星头孢唑啉强力霉素林可霉素头孢曲松左氧沙星多黏菌素B新霉素卡那霉素阿米卡星头孢西丁壮观霉素复方新诺明青霉素头孢噻吩阿莫西林环丙沙星万古霉素67

10、.8621.4328.5762.505.3612.5O62.5044.6451.7948.225.3632.1453.3741.o712.50033.93O30.361.783O.3646.43l9.6435.7216.0723.2133.9314.2937.5O41.0721.4348.2239.2944.6426.791o.713O.3616.0725.o026.793讨论与小结通过对广西地区主要中小规模猪场大肠杆菌病开展流行病学调查,发现猪大肠杆菌病仍是困扰中小规模猪场的主要细菌病之一.本课题组共调查了广西31家中小规模猪场,发现有23家(占调查数的74.2)经常发生新生仔猪腹泻及断奶后

11、仔猪腹泻?188?疾病防治中国畜牧兽医2011年第38卷第6期等症状,严重者造成整窝猪死亡,给养殖户造成巨大的经济损失.通过实地考察,发现常发病的猪场均未严格实施生物安全措施,产房内的环境均较差,亦无严格的消毒措施及相关的制度.因此,中小规模猪场要控制大肠杆菌病的发生,流行,必须首先做好生物安全防护工作,制定相关的消毒,隔离等制度并严格执行.本试验从广西23家中小规模猪场分离到56株致病性大肠杆菌,鉴定出血清型的有43株,其血清型达16种,其中O,OO,O.和Oz为主要流行的血清型,其流行情况较复杂,各血清型不存在明显的地区性分布,即使同处一个县(或市)的猪场主要流行的血清型也不相同,有的猪场

12、中存在2种以上血清型,且在不同流行期流行的血清型也不完全相同.因此,各猪场必须定期对本场的大肠杆菌进行分离鉴定,选用血清型针对性较强的菌苗,才能更有效地控制该病的发生.药敏试验结果显示,这些中小规模猪场内大肠杆菌菌株的耐药性已十分严重,20种抗菌药物中抑菌作用较强的药物主要有头孢拉啶,头孢唑啉,头孢曲松,头孢西丁,多黏菌素B,新霉素,壮观霉素和阿米卡星;而已产生较强耐药性的药物主要有青霉素,阿莫西林,强力霉素,卡那霉素,万古霉素,林可霉素.但是,从试验结果可看出,即使是较新的头孢类抗生素仍有部分菌株对其产生耐药性,而且有的菌株能对多种抗菌药产生耐药性.通过调查,还发现来自不同猪场的菌株对不同抗

13、菌药的耐药性也不一样;即使在同一个猪场,在不同时期分离的菌株对不同抗菌药的敏感性也不尽相同,这可能与各猪场在某一时期曾使用或常用某些抗菌药有关.猪大肠杆菌病主要发生于仔猪阶段,且多与气候寒冷潮湿,饲养环境不卫生,饲养管理不当有关,要做好本病的防控工作就应从卫生管理,饲养管理,加强疫苗,合理选择药物并严格按疗程用药等方面采取综合的防制措施.同时,为避免产生耐药性,每个猪场应定期进行耐药性测定,监测耐药性的发展和变化,防止耐药性菌株的产生,以指导临床正确用药.参考文献1BarbaraE,等.猪病学M.第9版.北京:中国农业大学出版社,2008.2张俊丰,陈琳,魏冬霞,等.92株猪腹泻大肠杆菌的耐药

14、性分析J.中国畜牧兽医,2010,37(11):153155.3杨霞,卢中华,陈丽颖,等.仔猪致病性大肠杆菌的分离鉴定EJ.畜牧与兽医,2005,37(9):3435.4陆承平.兽医微生物学M.第3版.北京:中国农业出版社,2001.5房海.大肠埃希氏菌M.石家庄:河北科学技术出版社,1997.6莱曼.猪病学M.北京:中国农业出版社,1990.7曹泽,郭玉璞,董国雄,等.兽医微生物学及免疫学技术M.北京:北京农业大学出版社,1992,3495.8蔡宝祥.家畜传染病学M.第4版.北京:中国农业出版社,2001.9谭炳乾,陈哲,林申,等.猪源大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析EJ.畜禽业,2006,7

15、:2223.EpidemiologicalInvestigationofSwinePathogenicE.coliinGuangxiSmallandMediumscaleFarmsCHENFenglian,ZHA0Wu,HUANGHongmei,QINShaomin,HUAJun,MALing,WUJianmin,YANGWei(GuangxiVeterinaryResearchInstitute,Nanning530001,China)Abstract:56strainsofswinepathogenicE.coliwereisolatedfrom23smallandmedium-scale

16、pigfarmsinGuangxi,anditsserotypeidentificationanddetectionofdrugresistanceshowedthatthe56strainsbelongedto16serotypes,?outofwhichOserotypeviz,O138,O18,O85,O9,O21werepredominant,occupying69.76.Thedetectionofdrugresistanceof20frequentlyusedantibioticsindicatedthatmostE.colitrainswerehighlysensitivetoCephradine,Cefazolin,Ceftriaxone,Cefoxitin,PolymyxinB,Neomycin,Spectinomycin,andAmikacin,butinsensitivetoPenicillin,Amoxicillin,Doxycycline,Kanamycin,Vancomycin