米糠中阿魏酸的提取及荧光分光光度法检测

1、米糠中阿魏酸的提取及荧光分米糠中阿魏酸的提取及荧光分 光光度法检测光光度法检测 文章引自：食品科学文章引自：食品科学 20072007年年 第第2828卷卷 第第3 3期期 廖廖 律，周明达律，周明达 ，肖，肖 劲劲 中南大学化学化工大学中南大学化学化工大学 Page 2 摘要摘要 确定了新鲜米糠中阿魏酸的最佳提取工艺。确定了新鲜米糠中阿魏酸的最佳提取工艺。 采用高效液相色谱法对提取产品的定性检测采用高效液相色谱法对提取产品的定性检测 ，荧光分光光度法对提取产品的定量检测。，荧光分光光度法对提取产品的定量检测。 此法具有准确、简便、快速、灵敏等优点。此法具有准确、简便、快速、灵敏等优点。 Pa

2、ge 3 引言引言 阿魏酸(Ferulic acid，简称FA)的 化学名称为4-羟基-3甲氧基-2-苯丙 稀酸，其广泛存在于植物细胞壁中 ，多以酯的形式存在，游离态的阿 魏酸含量很低。 Page 4 引言引言 目前，从天然植物体中直接提取阿 魏酸的方法主要为碱解提取法和生 物提取法，对阿魏酸的检测研究多 使用高效液相色谱法及紫外可见分 光光度法，目前采用荧光光度法对 阿魏酸进行检测所做的研究很少。 Page 5 引言引言 由于阿魏酸自身可激发出荧光，采用荧光分 光光度法可直接进行测定，具有简便易行， 准确度高, 重现好的特点。 高效液相色谱法是目前较为先进的分析手段， 具有灵敏度高和重复性好

3、等优点，但高效液相 色谱仪价格昂贵，限制了其广泛应用。紫外可 见分光光度法测定简便，但是易受其它成分干 扰，准确度较差。 1 1 实验部分实验部分 1 1 仪器与试剂仪器与试剂 仪器：仪器： 日本日立日本日立FL-4500 FL-4500 荧光分光光度计；荧光分光光度计； 800B 800B 离心机；离心机； 高效液相色谱仪高效液相色谱仪(LC-2010A)(LC-2010A) Page 7 Page 8 Page 9 Page 10 试剂： 新鲜米糠 ；阿魏酸 ； 氢氧化钠 ； 无水乙醇 ； 乙酸乙酯 ； 碳酸钠； 无水亚硫酸钠； Page 11 取新鲜米糠50g，加入350ml水煮沸10m

4、in，以除去米糠中的 悬浮杂质，并使阿魏酸易于释放出来，然后加入3倍的无水 乙醚(W/V)浸渍2次，每次3h，脱去米糠中的脂。预处理后 的米糠挤压过滤，水洗两次，弃滤液，滤渣置于500ml圆底 烧瓶中，加入一定比例的碱和乙醇以及少量无水亚硫酸钠 ，在85下回流一定时间，再次挤压过滤，滤渣水洗两次 ，合并滤液，用浓盐酸调pH值为2.5左右，抽滤，取一定量 上清液，在4000r/min下离心分离5min，以乙酸乙酯萃取三 次，合并乙酸乙酯萃取液，减压蒸馏至乙酸乙酯全部分出 ，残渣为阿魏酸晶体。 2 2 阿魏酸的提取阿魏酸的提取 3 3 定性定量检测定性定量检测 液相色谱定性检测液相色谱定性检测 荧

5、光光度法定量检测荧光光度法定量检测 Page 13 液相色谱定性检测液相色谱定性检测 按选定的色谱条件测定，得到标准品溶液和样品溶 液色谱图见图1和图2 。由图可见，阿魏酸的保留时 间约为15.6min Page 14 荧光光度法定量检测荧光光度法定量检测 1 激发波长与发射波长的确定 精确称量0.2mg 标准阿 魏酸，以2% Na2CO3 溶 液定容于100ml 容量瓶 中，室温下荧光扫描得 阿魏酸的标准品激发波 长为344nm，发射波长为 462nm。比色皿厚度为 2cm，2% Na2CO3 为空白 溶液，激发光和发射光 狭缝宽度均为5.0nm，扫 描速度为240nm/min。 Page

6、15 荧光光度法定量检测荧光光度法定量检测 2 线性范围的确定与标准曲线的绘制 精密量取适量标准溶液配置成 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 、 1 . 4 、 1 . 6 、 1 . 8 、 2 . 0 、 2.2g/ml 的标准溶液，以对照 品浓度(g/ml)为横坐标，以光 强为纵坐标，进行线性回归，在 0.22.2g/ml 范围内，浓度 与光强呈良好的线性关系，回归 方程为： y=43.47143+224.41071x，相关 系数r=0.99957。标准曲线如图 Page 16 荧光光度法定量检测荧光光度法定量检测 3 样品制备与测定 取5ml阿魏酸样品上清液，乙酸乙酯萃取

7、三次(每次5ml)，合 并乙酸乙酯萃取液，再用2%碳酸钠溶液萃取三次(每次5ml), 合并碳酸钠溶液。以2%碳酸钠溶液定容至50ml容量瓶中。精 密量取2ml上述溶液，再以2%碳酸钠溶液定容至100ml容量瓶 中，照荧光光度法测定光强(平行测定n=5)，其结果见表1。 Page 17 荧光光度法定量检测荧光光度法定量检测 为了验证实验的准确性，在已知浓度的适量样品溶液加入一 定量的阿魏酸标准溶液，按上述方法处理和实验，计算回收 率，其结果见表2 。 由表2可知，荧光分析法测定米糠提取出来的阿魏酸的平 均回收率在98.4%至101.1% 之间。 4 4 结果与讨论结果与讨论 1 1 阿魏酸的测定方法有很多种，由于荧光分光阿魏酸的测定方法有很多种，由于荧光分光 光度法测定的同时限定了最大激发波长和最大发光度法测定的同时限定了最大激发波长和最大发 射波长射波长2 2个测定参数，故而可排除一些其他的化个测定参数，故而可排除一些其他的化 学物质的干扰，具有灵敏度高，重现性好，快速学物质的干扰，具有灵敏度高，重现性好，快速 简便等特点。简便等特点。 Page 19 2 2 采用一定比例的氢氧化钠和无水乙醇为提取溶剂采用一定比例的氢氧