抗乙型肝炎病毒新药研究进展

1、抗乙型肝炎病毒新药抗乙型肝炎病毒新药 研究进展研究进展 重庆医科大学病毒性肝炎研究所重庆医科大学病毒性肝炎研究所 黄爱龙黄爱龙 v由乙型肝炎病毒（由乙型肝炎病毒（Hepatitis B Virus,HBV) 感染引起的肝脏疾病。感染引起的肝脏疾病。 v结构特征结构特征 v基因组特征基因组特征 v生物学特征生物学特征 携带者携带者癌症患者癌症患者新增病例新增病例/年年 死亡率死亡率/年年 全球全球3.5亿亿3000万万100万万200万万 其中，携带者中亚太地区占其中，携带者中亚太地区占3/4，中国有，中国有 1.3亿，占全球亿，占全球1/3，病死率居各类传染病首位。，病死率居各类传染病首位。

2、急性清除（成人：急性清除（成人：90%） HBV 慢性携带（婴幼儿：慢性携带（婴幼儿：90%） 25-40% 无症状乙型肝炎无症状乙型肝炎 肝硬化肝硬化 肝癌肝癌 感染结果感染结果免疫应答状态免疫应答状态 急性清除急性清除完全应答完全应答 无症状携带无症状携带不应答不应答 各种肝病各种肝病应答紊乱应答紊乱 目前认为，目前认为，HBVHBV感染后造成的肝细胞感染后造成的肝细胞 损伤不是病毒复制的结果，而是机体产损伤不是病毒复制的结果，而是机体产 生的特异性免疫应答的的结果。机体在生的特异性免疫应答的的结果。机体在 产生免疫应答清除病毒的同时，损伤了产生免疫应答清除病毒的同时，损伤了 感染的肝细胞

3、。其中，细胞免疫应答，感染的肝细胞。其中，细胞免疫应答， 尤其是尤其是CTLCTL反应起了关键性的作用。反应起了关键性的作用。 不可怕，理由：不可怕，理由： v血液途径传播血液途径传播 v婴幼儿（接种疫苗）婴幼儿（接种疫苗） v成人（成人（90%急性清除）急性清除） vWHO目标目标 可怕，理由：可怕，理由： v3.5亿携带者亿携带者 v3000万癌症患者万癌症患者 v治疗效果不理想治疗效果不理想 v抗炎保肝治疗抗炎保肝治疗 v抗肝纤维化治疗抗肝纤维化治疗 v免疫调节治疗免疫调节治疗 v抗病毒治疗抗病毒治疗 专家建议：以抗病毒为主的综合治疗 治疗药物治疗药物 近十年，针对病毒性肝炎药物的研究，

4、取近十年，针对病毒性肝炎药物的研究，取 得了相当多的进展，国外已上市的用于抗乙、得了相当多的进展，国外已上市的用于抗乙、 丙型肝炎病毒的药物有十余种，进入临床试验丙型肝炎病毒的药物有十余种，进入临床试验 的药物有二十余种。的药物有二十余种。 v 干扰素仍为目前治疗乙、丙型肝炎的主要药物。干扰素仍为目前治疗乙、丙型肝炎的主要药物。 v 核酸类似物的研究进展较快，可能不久的将来核酸类似物的研究进展较快，可能不久的将来 会突破。会突破。 v 抗病毒基因治疗、反义核酸、抗病毒基因治疗、反义核酸、DNA疫苗等也获疫苗等也获 得了可喜的苗头。得了可喜的苗头。 v药物设计的最高原则（高效低毒与特异药物设计的

5、最高原则（高效低毒与特异 性）性） v来自急性感染恢复期病人的启示来自急性感染恢复期病人的启示 v来自病毒生活周期的启示来自病毒生活周期的启示 Infectious HBV virion S M L GOLGI ccc-DNA Genomic & subgenomic RNAs preS/S X precore proteins Core protein P protein (+) strand DNA (-) strand DNA Receptor 3.5 kb RNA pregenome (A)n Subviral particles ER / IC Adapted from Nassal

6、, M. (1996). Curr.Top.Microb.Immunol. 214:297-337. 嗜肝嗜肝DNA病毒生活周病毒生活周 期期 w 入侵入侵 (识别识别, 吸附吸附, 穿膜）穿膜） w 脱壳脱壳 w 转位转位 (形成形成 cccDNA) w 逆转录逆转录 w 病毒蛋白表达病毒蛋白表达 w 装配装配 w 颗粒释放颗粒释放 (或再循环或再循环) 核苷酸结合槽核苷酸结合槽 N N NH2 O S O OH 商品名商品名 贺普丁贺普丁 药物名称药物名称 拉米夫定拉米夫定 化学名化学名 （2R-顺式）顺式）-4- 氨基氨基-1-（2-羟甲基羟甲基-1，3- 氧硫杂环戊氧硫杂环戊-5-基）

7、基）-1H-嘧嘧 啶啶-2-酮酮 C8H11N3O3S 229.26 品名和结构式品名和结构式 拉米夫定拉米夫定 负链单链DNA M D Y D dCTP HBV -多聚酶（野生型） 高亲合力 Y = 酪氨酸 M = 蛋氨酸 D = 天冬氨酸 v核苷类似物核苷类似物 “-2，3-双脱氧双脱氧-3硫代硫代 胞嘧啶胞嘧啶” v对对HBV&HIV的抗病毒活性的抗病毒活性 v能抑制依赖能抑制依赖RNA的的DNA多聚酶多聚酶 v最佳推荐最佳推荐剂量为剂量为100mg/d v迅速吸收迅速吸收 v肝脏代谢率低肝脏代谢率低 v从尿中以原型排泄从尿中以原型排泄 v中重度肾功能不全患者需作剂量调整中重度肾功能不全

8、患者需作剂量调整 v无显著药物间相互作用无显著药物间相互作用 研究周数 改变的 中位数 01020304050 Schiff Dienstag Lai Dienstag Schiff Lai Schalm 拉米夫定 -100 -80 -60 -40 -20 0 10 安慰剂 核苷酸 抑制减弱 亲合力降低 V D Y D Y = 酪氨酸 M = 蛋氨酸 D = 天冬氨酸 负链单链DNA HBV -多聚酶（突变型） 拉米夫定 YMDD 变异株 (n =24) 野生株 (n=95) 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 013263952657891 104 117 130 14

9、3 156 时间 (周) 变异株出现 HBV DNA (pg/mL) HBV DNA聚合酶聚合酶 的氨基酸序列的氨基酸序列 FLLAQ YMDD 密码子密码子 528 L to M 552 M to V or I 组变异 FLMAQ YVDD 组变异 Y I DD 组变异 FLMAQ Y I DD F=苯氨酸 Q=谷氨酸 D=天冬氨酸 L=亮氨酸 Y=酪氨酸 V=颉氨酸 M=蛋氨酸 I=异亮氨酸 在YMDD基序中的氨基酸的改变 57% 野毒株野毒株 病人：病人：HBeAg阳性的慢性乙肝病人阳性的慢性乙肝病人 n=335 14%YMDD变异株变异株 10%混合型混合型 19% HBV DNA阳性

10、（阳性（PCR） 无变异无变异=76% 拉米夫定治疗一年后变异的发生率 v复制活性比野生株弱复制活性比野生株弱 v使使用拉米夫定的最用拉米夫定的最初初36周内，周内，极极少检测到少检测到 YMDDv vYMDDv检测率检测率: 1年后年后 = 24% (综合的资料综合的资料) 2年后年后 = 42% 3年后年后 = 53% 4年后年后 = 67% 双脱氧鸟嘌呤类核苷酸双脱氧鸟嘌呤类核苷酸DXG的前体药物。的前体药物。 v 大白鼠体内实验证实大白鼠体内实验证实90%90%的的DAPD在腺苷酸脱氨酶的作在腺苷酸脱氨酶的作 用下可迅速转化为用下可迅速转化为DXG，在血清中的半衰期为，在血清中的半衰期

11、为2-8小小 时时 v 用该药治疗土拨鼠肝炎模型连续用该药治疗土拨鼠肝炎模型连续12周，同拉米夫定一周，同拉米夫定一 样可以降低血清中样可以降低血清中WHV DNA的水平。的水平。 v 2.2.15细胞实验显示细胞实验显示DAPD有抑制有抑制HBV的作用。的作用。 v 体外研究发现，该药对拉米夫定和泛昔洛韦产生耐体外研究发现，该药对拉米夫定和泛昔洛韦产生耐 药的药的HBV毒株有效，与抗病毒药物毒株有效，与抗病毒药物enviroxime(恩韦恩韦 肟肟)有协同抗有协同抗HBV的作用。的作用。 v 针对针对AIDS治疗的治疗的I/II期临床试验正在进行。治疗期临床试验正在进行。治疗 HBV感染的感

12、染的II期临床试验计划在期临床试验计划在2001年第二季度开年第二季度开 始。始。 Entecavir (恩替卡韦）恩替卡韦） q 特异性抑制特异性抑制HBV q 0.1mgETV即可达到即可达到100mgLVD的作用的作用 q 正在中国申请作正在中国申请作II期临床验证（全球多中期临床验证（全球多中 心，中国心，中国7家单位）家单位） N N NH N NH2 O CH2 OH OH q 用土拨鼠肝炎模型比较用土拨鼠肝炎模型比较ETVETV（0.1mg/Kg/d0.1mg/Kg/d）与）与LVDLVD （5mg/Kg/d5mg/Kg/d）的抗病毒效果，持续用药）的抗病毒效果，持续用药1212

13、周，周，ETVETV 在停药在停药2 2周后仍不能检测到血清中的病毒周后仍不能检测到血清中的病毒DNADNA，而，而 LVDLVD出现了病毒出现了病毒DNADNA反跳。反跳。 q 20002000年年5 5月，在第十届欧洲临床微生物和感染疾病月，在第十届欧洲临床微生物和感染疾病 会议上报道会议上报道entecavirentecavir与与adefoviradefovir合用有协同抗合用有协同抗 HBVHBV作用。作用。 q 2000年年9月，在加拿大多伦多第四十届月，在加拿大多伦多第四十届ICAAC会议会议 上，有关该药的安全性和抗病毒活性的研究有了上，有关该药的安全性和抗病毒活性的研究有了

14、报道，发现有良好的耐受性，没有与剂量相关的报道，发现有良好的耐受性，没有与剂量相关的 毒副反应。毒副反应。 Entecavir (恩替卡韦）恩替卡韦） q 小鼠在小鼠在10、50mg/Kg/d剂量下，连续用剂量下，连续用Clevudine30 天，无明显毒性反应；对人骨髓细胞及天，无明显毒性反应；对人骨髓细胞及H1细胞线粒细胞线粒 体无明显毒性。体无明显毒性。 q 在土拨鼠肝炎模型实验中，用在土拨鼠肝炎模型实验中，用Clevudine10mg/Kg/d, 持续持续12周，血清周，血清WHV DNA下降下降1000倍，表面抗原倍，表面抗原 下降下降100倍，肝内倍，肝内WHV DNA复制中间体下

15、降复制中间体下降10倍，倍， 治疗结束后没有病毒标志物反跳。治疗结束后没有病毒标志物反跳。 q 在鸭乙肝动物模型中也观察到相同效果。已经证实在鸭乙肝动物模型中也观察到相同效果。已经证实 与抗病毒药物与抗病毒药物enviroxime(恩韦肟恩韦肟) )、3TC3TC、FTCFTC、DAPDDAPD、 cidofovircidofovir有协同作用。有协同作用。 q 2000年年9月月-11月，相关的月，相关的I/II期临床试验已陆续见诸期临床试验已陆续见诸 报道。报道。 Clevudine q Novirio制药公司正在研制的一系列有抗制药公司正在研制的一系列有抗HBV作用的作用的 -L-2-脱

16、氧核苷酸类药物。脱氧核苷酸类药物。 q 计划于计划于2001年年1-3季度进入临床试验。季度进入临床试验。 q L-dA和和L-dT口服后能被吸收利用口服后能被吸收利用, L-dT的口服生物的口服生物 利用度可达利用度可达70%,而而L-dC要被双磷酰酯甘油修饰后才要被双磷酰酯甘油修饰后才 能被吸收利用能被吸收利用, 口服生物利用度较低。口服生物利用度较低。 q 土拨鼠肝炎模型证实用土拨鼠肝炎模型证实用L-dT口服口服10mg/Kg/d的剂量，的剂量， 可使病毒降低可使病毒降低3-9logs，而，而L-dC用相同剂量仅降低病用相同剂量仅降低病 毒毒1-5logs，L-dT与与L-dC合用有协同

17、作用。合用有协同作用。 L-dT L-dC L-dA q Enzo Biochem和纽约和纽约艾伯特艾伯特爱因斯坦医学院合作爱因斯坦医学院合作 开发的具有免疫调节及抗病毒作用的寡核苷酸药物。开发的具有免疫调节及抗病毒作用的寡核苷酸药物。 q 于于20002000年年6 6月开始慢性乙型肝炎治疗的月开始慢性乙型肝炎治疗的IIII期临床试期临床试 验。验。 q I I期临床试验结果显示期临床试验结果显示1515例患者用例患者用EHT-899口服治口服治 疗疗20周，均可以明显改善疾病症状、降低肝脏转氨周，均可以明显改善疾病症状、降低肝脏转氨 酶、减少病毒含量。酶、减少病毒含量。 q 动物实验显示动

18、物实验显示EHT-899可以抑制小鼠肝癌的生长，可以抑制小鼠肝癌的生长， 提示该药有潜在的治疗提示该药有潜在的治疗HBV相关性肝癌和其它癌症相关性肝癌和其它癌症 的作用。的作用。 EHT-899 q 由美国由美国Emory大学研究、大学研究、Triangle 制药公司制药公司 获得生产许可证的获得生产许可证的 Emtricitabine(FTC),是与是与 拉米夫定结构相近的硫代嘧啶核苷类药物。拉米夫定结构相近的硫代嘧啶核苷类药物。 q 已于已于1998年着手进行抗年着手进行抗HIV的的II/III期临床试期临床试 验，抗验，抗HBV也进入也进入I/II期临床试验阶段。期临床试验阶段。 Emt

19、ricitabine(FTC) q 临床前研究表明，该药没有与剂量相关性的毒副作用，临床前研究表明，该药没有与剂量相关性的毒副作用， 在在100mg/d的剂量下，其抗病毒活性可以达到最大活的剂量下，其抗病毒活性可以达到最大活 性的性的90%；增加剂量到；增加剂量到200mg/d，抗病毒活性仅增加，抗病毒活性仅增加 5%。 q 应用转基因小鼠模型及土拨鼠肝炎模型的动物实验证应用转基因小鼠模型及土拨鼠肝炎模型的动物实验证 实，实，FTC可以显著抑制血液中嗜肝病毒可以显著抑制血液中嗜肝病毒DNA水平，停水平，停 药药1周后，同拉米夫定一样，仍有周后，同拉米夫定一样，仍有DNA水平回升。水平回升。 q

20、 初步的临床试验报道，乙肝患者用初步的临床试验报道，乙肝患者用25mg/d、200mg/d 剂量，持续剂量，持续56天，血清中天，血清中HBV含量分别可以下降含量分别可以下降 2.0log10和和4.3log10。但尚无与其它核酸类似物疗效比。但尚无与其它核酸类似物疗效比 较的研究报道。较的研究报道。 Emtricitabine(FTC) 1.IFN-11 Amgen Inc 2. IFN-22 Hoffman-La Roche Inc 3. IFN-33 Interferon Sciences Inc 4.(聚乙二醇长效干扰素) Enzon Inc 5. IFN-1b1b Genentech

21、 Inc 国外已上市的用于抗乙、丙型肝炎病毒的药物国外已上市的用于抗乙、丙型肝炎病毒的药物 干扰素干扰素 同种细胞受体同种细胞受体 干扰素激活基因（干扰素激活基因（ISG） ISG-mRNA 抗病毒蛋白抗病毒蛋白 2-5AS磷酸二脂酶磷酸二脂酶 蛋白激酶蛋白激酶 2-5A 核酸酶激活核酸酶激活 病毒病毒mRNA降解降解 tRNA 的的pCpCA末端末端 降解降解 病毒蛋白转译抑制病毒蛋白转译抑制病毒蛋白合成起始受阻病毒蛋白合成起始受阻 抑制病毒复制抑制病毒复制 IFN 在转录和转译水平抑制病毒复制在转录和转译水平抑制病毒复制 蛋白合成的起始因子蛋白合成的起始因子 磷酸化磷酸化 重组重合干扰素（

22、CIFN）系由美国安进公 司开发，商品名为：干复津。本品于1997年10 月由美国食品药品管理局（FDA）批准治疗慢 性丙型肝炎，于同年12月由我国卫生部批准进 口。 IFNa可分成2025种亚型，其生物活性各 异。通过对多种天然a亚型干扰素的蛋白质结 构序列进扫描，每位点上出现的频率最高的氨 基酸进行重组得到CIFN氨基酸序列的基本框架。 CIFN q 加有加有40KDPEG（两个（两个Lys位点）位点） q 体内半衰期增加体内半衰期增加10倍，活性也相应延长倍，活性也相应延长 q 用量：一周一次用量：一周一次 q 减少剂量依赖性副作用减少剂量依赖性副作用 q 国外已用于国外已用于HCV治疗

23、治疗 q 正在中国启动治疗正在中国启动治疗HBV III期临床验证期临床验证 q 德国德国Boehringer IngelheimBoehringer Ingelheim公司生产的公司生产的 -IFN是潜在的对是潜在的对HBV、HCV感染有效感染有效 的药物。的药物。 q 该药的抗该药的抗HCV的的I/II期临床试验已在欧洲期临床试验已在欧洲 完成，正在进行完成，正在进行III期临床试验，主要是验期临床试验，主要是验 证证-IFN在在6个不同剂量下，能否有降低个不同剂量下，能否有降低 病毒量及减轻肝脏炎症反应，以及已经用病毒量及减轻肝脏炎症反应，以及已经用 IFN-治疗并产生耐药的丙肝患者，用

24、治疗并产生耐药的丙肝患者，用 -IFN治疗是否有效。同时抗治疗是否有效。同时抗HBV的临床的临床 验证工作也在进行。验证工作也在进行。 -IFN q 由由Epimmune 公司研制的多肽疫苗公司研制的多肽疫苗 q 能增强慢性乙型肝炎患者能增强慢性乙型肝炎患者HBV特异性细胞毒特异性细胞毒 性性T细胞免疫功能。细胞免疫功能。I期临床试验显示该疫苗期临床试验显示该疫苗 有较好的剂量耐受性，正常健康志愿者注射有较好的剂量耐受性，正常健康志愿者注射 后细胞毒性后细胞毒性T细胞的应答能力可以提高细胞的应答能力可以提高50-100 倍。倍。 q 目前正进行目前正进行II期临床试验，是有潜力的治疗乙期临床试

25、验，是有潜力的治疗乙 型肝炎的药物。型肝炎的药物。 Theradigm-HBV q 目前正在美国进行治疗乙型肝炎和移植排斥目前正在美国进行治疗乙型肝炎和移植排斥 反应的反应的II期临床试验。期临床试验。 q 1998年年6月治疗慢性乙型肝炎的月治疗慢性乙型肝炎的II期临床试验期临床试验 在欧洲进行，目的是评价该药的安全性、药在欧洲进行，目的是评价该药的安全性、药 代动力学及用拉米夫定治疗后血清中代动力学及用拉米夫定治疗后血清中HBV DNA水平不能经杂交法检测到时，再加用水平不能经杂交法检测到时，再加用 tuvirumab 6种剂量连续超过种剂量连续超过2周的抗病毒效周的抗病毒效 果。有关治疗

26、肝移植的果。有关治疗肝移植的I/II期临床试验已完期临床试验已完 成，计划成，计划II/III期临床试验在美国进行。期临床试验在美国进行。 TuvirumabTuvirumab抗人抗人HBVHBV单克隆抗体单克隆抗体 q XTL生物制药有限公司开发的抗生物制药有限公司开发的抗HBV新药，新药， 它是抗它是抗HBV表面抗原不同的两个区域的具表面抗原不同的两个区域的具 有高亲和力的单克隆抗体。有高亲和力的单克隆抗体。 q 与拉米夫定结合治疗的与拉米夫定结合治疗的II期临床试验于期临床试验于 2001年开始。已有的资料显示年开始。已有的资料显示XTL-001能能 快速、持久地降低快速、持久地降低HB

27、V DNA和和HBsAg的水的水 平并对病毒有中和作用。两段区域抗体的平并对病毒有中和作用。两段区域抗体的 使用估计可以减少病毒的逃逸突变，最终使用估计可以减少病毒的逃逸突变，最终 将会与其它抗病毒药物联合应用。将会与其它抗病毒药物联合应用。 XTL-001 q Sizofiran（西佐糖）（西佐糖） 是从一种食用菌（裂是从一种食用菌（裂 褶菌）培养上清中提取出的具有免疫增强褶菌）培养上清中提取出的具有免疫增强 作用的调节剂。作用的调节剂。 q 在日本正在进行治疗乙型肝炎的在日本正在进行治疗乙型肝炎的III期临床期临床 试验，该药对胃癌、肺癌以及慢性疲劳综试验，该药对胃癌、肺癌以及慢性疲劳综

28、合征也有治疗作用，相关的临床试验也正合征也有治疗作用，相关的临床试验也正 在进行。在进行。 Sizofiran q GLYCODesign公司生产的公司生产的GD-0039是一种糖是一种糖 类化学保护剂，它是类化学保护剂，它是甘露糖苷酶甘露糖苷酶II的抑制剂，的抑制剂， 有抗菌、抗病毒的作用。有抗菌、抗病毒的作用。 q 可用来治疗多种肿瘤及细菌感染。对病毒感可用来治疗多种肿瘤及细菌感染。对病毒感 染的疾病也有潜在的治疗价值。染的疾病也有潜在的治疗价值。 q 该药治疗肾癌的该药治疗肾癌的II期临床试验正在进行。期临床试验正在进行。 q 有关抗有关抗HCV的研究正在临床前研究阶段。治的研究正在临床前研究阶段。治 疗丙型肝炎的疗丙型肝炎的I