实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测课件

1、实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测1 临床检验基础与输血教研室 唾液中唾液中HABHAB血型物质测定血型物质测定 实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测2 掌握掌握ABOABO正反定型的原理、方法及正反定型的原理、方法及RhRh血型鉴定血型鉴定 通常利用红细胞凝集试验，通过正定型和反通常利用红细胞凝集试验，通过正定型和反 定型鉴定定型鉴定ABOABO血型。血型。 正定型正定型是用已知血型特异性抗体（抗是用已知血型特异性抗体（抗-A-A、抗、抗-B-B、抗、抗- - DD等分型血清）来测定红细胞上有无相应的抗原；等分型血清）来测定红细胞上有无相应的抗原； 反定型反定型是用已知

2、血型试剂红细胞测定血清中有无相是用已知血型试剂红细胞测定血清中有无相 应的抗体。应的抗体。 实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测3 实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测4 小试管、滴管、试管架、离心机、鉴定 纸板、载玻片、记号笔、显微镜。 1. ABO血型抗体：抗A、抗B；Rh血型抗体： 抗D、抗C、抗c、抗E、抗e。 235A型、B型及O型试剂红细胞。 3. 生理盐水。 抗凝静脉血 实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测5 (1)(1)标记试管：标记试管：正定型：取洁净小试管2支，分别标 明A、B；反定型：取3支小试管分别标记Ac、Bc 、Oc。 (2)(2)配配

3、5%5%悬浮红细胞：悬浮红细胞：取静脉血2滴于小试管中，加 2ml生理盐水，混匀，2500r/min离心3分钟，弃上清 ；重复3次。取管底1滴压积加19滴生理盐水，即为5% 悬红。 (3)(3)加样：加样：正定型管中分别加入1滴试剂和1滴悬红， 反定型管中分别加入2滴血清和1滴试剂红细胞。 （4 4）离心：）离心：3000rmin离心15秒（1000g）。 (5)(5)结果：结果：轻摇试管,观察有无凝集或溶血现象。 实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测6 (1)(1)洁净玻片洁净玻片( (鉴定纸板鉴定纸板) )一张。标一张。标A A、B B，分别，分别 用滴管滴加用滴管滴加A A、B

4、 B试剂试剂1 1滴，再加受检者滴，再加受检者3 35 5 红细胞悬液红细胞悬液l l滴，混匀。滴，混匀。 (2)(2)另取洁净玻片另取洁净玻片( (或鉴定纸板或鉴定纸板) )一张。标一张。标AcAc、BcBc、OcOc， 各加受检血清各加受检血清2 2滴，再分别滴加滴，再分别滴加AcAc、BcBc、OcOc悬红悬红1 1滴。滴。 (3)(3)室温轻转动玻片室温轻转动玻片( (或鉴定纸板或鉴定纸板) ) ，使血清与细胞充，使血清与细胞充 分混匀连续约分混匀连续约2min2min，肉眼观察凝集，肉眼观察凝集( (溶血溶血) )反应。玻片反应。玻片 试验时可用低倍镜观察结果。试验时可用低倍镜观察结

5、果。 实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测7 表表l ABOl ABO血型正反定型结果血型正反定型结果 实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测8 实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测9 1.试剂 2.悬红 3.蛋白 4.溶血 5.冷抗体 6.老年、儿童 7.污染 简述ABO血型鉴定正反不一致的原因 实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测10 红细胞凝集强度判断标准红细胞凝集强度判断标准 实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测11 掌握掌握RhRh血型鉴定的原理、方法。血型鉴定的原理、方法。 RhRh血型系统，包括四十几个抗原，通常使用血型系统，包括四

6、十几个抗原，通常使用 相应的抗相应的抗C C、抗、抗c c、抗、抗D D、抗、抗E E、抗、抗e e五种五种RhRh分型血清分型血清 来检查红细胞抗原。来检查红细胞抗原。 在临床输血中一般只做在临床输血中一般只做D D抗原的鉴定，被检红抗原的鉴定，被检红 细胞和抗细胞和抗D D血清凝集者为血清凝集者为RhRh阳性，不凝集者为阳性，不凝集者为RhRh阴阴 性。性。 实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测12 小试管、滴管、试管架、记号笔、载小试管、滴管、试管架、记号笔、载 玻片、显微镜、离心机。玻片、显微镜、离心机。 1.Rh1.Rh抗血清：常用的为抗血清：常用的为IgMIgM抗抗D D

7、。 2.2.己知己知RhRh阳性和阴性的阳性和阴性的5 5红细胞悬液各红细胞悬液各1 1份份 3.3.盐水溶液。盐水溶液。 静脉血静脉血。 实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测13 1.1.取单克隆抗取单克隆抗-D-D（IgMIgM）-C-C、-c-c、-E-E、-e-e试试 剂各剂各1 1滴到滴到5 5支试管中。支试管中。 2.2.每管各加每管各加1 1滴滴3 35 5待检红细胞悬液。待检红细胞悬液。 3.3.充分混匀，以充分混匀，以1000 g1000 g离心离心1515秒。秒。 4.4.观察结果：轻摇散开试管底部的细胞扣，观察结果：轻摇散开试管底部的细胞扣， 用肉眼观看凝集。用

8、肉眼观看凝集。 5.5.判定结果判定结果 实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测14 1 1如临床上只检查是否为如临床上只检查是否为RhRh阳性，只需用抗阳性，只需用抗D D血清血清 进行鉴别，如结果为阴性，应进一步检查进行鉴别，如结果为阴性，应进一步检查 2 2因抗因抗e e血清难以得到，故临床上常用四种血清难以得到，故临床上常用四种RhRh抗血抗血 清来定型。清来定型。 3 3RhRh血型鉴定应严格控制温度与时间，因血型鉴定应严格控制温度与时间，因RhRh抗原抗原 、抗体凝集反应块比较脆弱，观察反应结果时，、抗体凝集反应块比较脆弱，观察反应结果时， 应轻轻摇动试管，不可用力振摇。应

9、轻轻摇动试管，不可用力振摇。 4 4如鉴定结果只与抗如鉴定结果只与抗D D血清起反应，而与抗血清起反应，而与抗C C、-c-c 、-E-E、-e-e都不凝集，则受检者为都不凝集，则受检者为RhRh缺失型，以缺失型，以- - D-D-表示。表示。 实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测15 了解唾液了解唾液HABHAB血型物质测定的原理、方法。血型物质测定的原理、方法。 HAB HAB血型物质也存在于某些人的分泌液中。唾液中血型物质也存在于某些人的分泌液中。唾液中 HABHAB血型物质为半抗原，能特异性地与相应抗体结合血型物质为半抗原，能特异性地与相应抗体结合 ，从而抑制抗体与相应红细胞

10、发生凝集。所以利用，从而抑制抗体与相应红细胞发生凝集。所以利用 凝集抑制试验，可测定唾液中凝集抑制试验，可测定唾液中HABHAB血型物质，它有助血型物质，它有助 于于ABOABO亚型的分类及其特殊情况下血型的鉴定亚型的分类及其特殊情况下血型的鉴定 实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测16 小试管、滴管、试管架、记号笔、离心机 1. A、B和O型红细胞盐水悬液。 2. 最适稀释度抗血清的制备（标化血清） 受检者唾液 实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测17 1.1.被检者漱口后留取自然流出的唾液被检者漱口后留取自然流出的唾液2ml2ml，将留取，将留取 的唾液的唾液1000g

11、1000g离心，取上清液置于大试管中，煮离心，取上清液置于大试管中，煮 沸沸10min10min，再离心，再离心10min10min，留取上清液备用。，留取上清液备用。 2.2.排列试管排列试管3 3支，分别标明支，分别标明-A-A、-B-B、-H-H，3 3管各加唾管各加唾 液液1 1滴，每管加相应滴，每管加相应1 1滴。滴。 3.3.混匀，置室温，中和混匀，置室温，中和10min10min。 4.4.每管加相应悬红每管加相应悬红1 1滴滴. . 5. 5. 混匀，离心混匀，离心1515秒，观察结果秒，观察结果. . 实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测18 3 3排排1818支，

12、分别抗支，分别抗A A、抗抗B B及抗及抗 H H。每排再标。每排再标2 2、4 4、8 8、1616 每管加盐水每管加盐水5050l l。每排第。每排第1 1管管对对 应应加抗加抗A A抗抗B B及抗及抗H H血清血清5050l l，倍量稀释成，倍量稀释成2 2、 4 4、8 8、1616稀释液。稀释液。 每每排各管排各管对应对应加加悬红悬红5050l l ，振摇混匀，振摇混匀，1000g1000g，离心，离心1515秒。秒。 以以+ +为标化血清的最适稀释度。为标化血清的最适稀释度。 实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测19 反应物反应物抗管抗管抗管抗管抗管抗管 受检唾液受检唾液

13、d dd dd d 标化抗标化抗d d 标化抗标化抗d d 标化抗标化抗d d 混匀，室温中和混匀，室温中和10min10min % %红细胞红细胞d d % %红细胞红细胞d d % %红细胞红细胞d d 混匀室温放置混匀室温放置10min10min，离心后观察，离心后观察 实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测20 实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测21 6.6.取试管两支分别作阳性及阴性对照取试管两支分别作阳性及阴性对照 管，各加分泌型和非分泌型唾液管，各加分泌型和非分泌型唾液l l滴滴 再加抗再加抗H H最适稀释度血清最适稀释度血清l l 滴，以滴，以3 30 0 型红细胞作指示，同时进行试验，阳性型红细胞作指示，同时进行试验，阳性 对照应不凝集，阴性对照应凝集。对照应不凝集，阴性对照应凝集。 实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测22 1如果加热前不离心并如果加热前不离心并除去沉淀除去沉淀，任何可能存在的，任何可能存在的 细胞可释放细胞可释放H H物质，使非分泌导致假阳性。物质，使非分泌导致假阳性。 2 2欲得到清晰的欲得到清晰的不含粘液的液体不含粘液的液体，最好的办法是将，最好的办法是将 唾液冰冻保存数天融化后离心，除去细胞碎屑，冰唾液冰冻保存数天融化后离心，除去细胞碎屑，冰 冻唾液的活