艾滋病实验室检测规范要求及方法选择与质量控制

1、实验方法 检测策略 结果解释 样本问题 人类免疫缺陷病毒人类免疫缺陷病毒(HumanImmunodeficiency Virus, HIV)(HumanImmunodeficiency Virus, HIV)，属于逆转录病毒，属于逆转录病毒， RNARNA病毒，主要病毒，主要 破坏人体的免疫系统，主要分为破坏人体的免疫系统，主要分为HIV-1HIV-1和和HIV-2HIV-2两种型两种型 别。别。 HIV的主要基因及其产物 （HIV标志物）标志物） HIVHIV病毒标志物产生的动力学病毒标志物产生的动力学 病毒RNA P24抗原 AB 感染时间 标志物强度 安全安全输输血血 流行流行病病学学调

2、调查查、高 高危危人人群群监监测测 自愿自愿咨咨询询检检测测VCTVCT B C D 临床临床诊诊断断 A 抗抗病病毒毒治治疗耐疗耐药药性性检检测测 免免疫疫功功能能测定测定 F 抗抗病病毒毒治治疗后疗后效效果果检检测测 E G 实验室检测主要目实验室检测主要目 的的 HIVHIV HIV抗体检抗体检 测测 HIV-1 P24抗原抗原 检测检测 HIV核酸检测核酸检测 CD4+/CD8+T淋淋 巴细胞检测巴细胞检测 艾滋病适宜检测技艾滋病适宜检测技术术 筛查试验 酶联免疫吸附试验 ELISA 快速检测 RT：金标、硒标等 化学发光免疫分析（CLIA） 时间分辨荧光免疫（TRFIA） 电化学发光

3、免疫分析（ECLIA) 补充试验补充试验 免疫印迹法 WB:（Western Blot） 条带免疫试验RIBA/LIA 核酸定性定量 实验原理：实验原理：利用包被在固相载体表面的HIV抗原或抗体，与待检 血清及酶标记抗原结 合形成抗原抗体复合物，加底物显色，用酶标仪 （450/620nm双波长）测定光密度值。 ELISA 是国际上应用最早是国际上应用最早! 目前目前HIV临床最常用的初筛检测方法临床最常用的初筛检测方法! E 固固相相抗原抗原 标本（含抗标本（含抗 体）体） 酶酶标标抗抗 原原 底物底物 E E 实验原理：实验原理：利用包被在固相载体表面的HIV抗原或抗体，与待检 血清及酶标记

4、抗原结 合形成抗原抗体复合物，加底物显色，用酶标仪 （450/620nm双波长）测定光密度值。 ELISA 是国际上应用最早是国际上应用最早! 目前目前HIV临床最常用的初筛检测方法临床最常用的初筛检测方法! E 固固相相抗原抗原 标本（含抗标本（含抗 体）体） 酶酶标标抗抗 原原 底物底物 E E 4.2 HIV 抗体检测的要点 4.2.1 根据目的选择检测方法及检测策略。 4.2.2 严格遵守实验室标准操作程序（SOP）。 4.2.3 结果判定以试剂盒说明书为标准。 4.2.4 筛查试验有反应，须作补充试验。 补充试验是通过检测样本中是否存在艾滋病病毒 抗体、抗原或者核酸而确定艾滋病病毒感

5、染的检 测方法。补充试验包括抗体确证试验（免疫印迹 试验，条带/线性免疫试验，特定条件*下的替代检 测，免疫层析或免疫渗滤试验）和核酸试验（核 酸定性和核酸定量试验）。替代检测包括三种酶 联免疫试验、三种快速试验或酶联免疫加 快速试验。(替代确认策略，四川不用) * 特定条件：高流行地区（流行率大于5%）、高 危人群（如男男同性恋，吸毒人群）、三种试剂 均经过使用地区中心实验室评价。 4.2.5 筛查试验无反应，不应做补充试验。 4.2.6 对筛查及补充试验对象均应做好咨询工作。 酶联免疫吸附试验（ ELISA）以珠海丽珠试剂为 例 实验的操作步骤（加样、温育、洗板、显色）必 须严格按照试剂说

6、 明书要求； 实验必须设置4阳性孔+3阴性孔+1外部对照孔， 其中HIV-1阳性2孔， HIV-2阳性2孔； 实验审核发放的前提：必须是实验阳性、阴性质 控孔正确显色，外 部对照结果在控。若外部对照失 控，应分析查找实验原因，做好失控 处理记录，立 即重新实验，实验在控后才能审核结果。 酶标仪、洗板机必须定时、规范的做好仪器维护 和保养； 实验必须做好样本原始检测记录、复查记录登记， 患者信息需完善。 阳性样本应立作危急值处理，电话告知患者和临床 医生，做好危急 异常值记录和临床沟通记录； 阳性样本除按要求送样到相关做补充实验， 实验室还应保存患者血 清样本，并做好相应的保存记录。 阳性样本初

7、筛实验室结果报告模式“待确认” ELISA容易出的问题 不仔细看说明书，不能理解说明书含义： 对照设孔错误* 样本量错误 CUT值计算错误 结果是否有效等？ 3、快速检测方法（ RT）：金标、 硒标等 优点：简便快速，一般可在1030分钟 内得出结果。适用于应急检测、门诊急 诊 检测。 检测结果采用目测法，不需要特殊的仪 器 设备。对检测人员技术要求不高，适 用于各 级检测机构。 做好实验记录（快速检测原始记录以能再现 检测过程为主） 1、全国艾滋病检测技术规范2015年修订版对快速检 测质控专门有要求 2、采用商用质控品或自制质控品。 （8NCU/ml？） 3、可以由当地CDC不定期提供质控

8、品 全国艾滋病检测技术规范2015年修订版 对快速检测质控专门有要求 分为分为HIVHIV定性和定性和HIVHIV定量检测两大类定量检测两大类： HIVHIV定性检测定性检测：HIVHIV核核 酸酸（RNARNA和前病毒和前病毒DNADNA） 的检测的检测 HIVHIV定量检测：定量检测：又称又称HIVHIV病毒载量病毒载量 检测检测（ViralViralloadload），），主要用于主要用于 抗病毒治疗患者的疗效评价，也抗病毒治疗患者的疗效评价，也 可可用于补充试验。用于补充试验。 艾滋病实验诊断方法 艾滋病检测策略原则艾滋病检测策略原则 首先应选择 最敏感的实 验 第二次实验应 该采用更

9、特异 的实验 HIV检测顺序 孕产妇产检时HIV初筛和复检流程 孕产妇临产及分娩首次HIV检测 流程 临产及分娩的孕产妇首次检测，应同时应用两 种不同的快速检测试剂 进行筛查，若两种试剂均 无反应直接报告阴性，若两种均有反应或其 中一 种有反应必须立即报告临床采取相应措施。 适用于未进行婴儿早期诊断检测或婴儿早期诊断 检测结果为阴性的儿童。应于12、18月龄进行艾滋 病抗体筛查 及必要的补充试验，以明确艾滋病感 染状态。 HIV感染产妇所生婴幼儿满12个月时应 进行第一 次HIV抗体检测。 同时使用两 种不同原理或不同厂家筛查试剂进行 样本问题 抗体筛查和确认，目前常用的是血清或血浆 不复合要

10、求样本： 严重脂血 严重溶血 样本量严重不足 要有规范的送检单 检测试剂的选择 希望是敏感度和特异度均为100%， (任何检测都不可能绝对，所有方法都存在缺陷和不 足) 检测结果是给临床医生提供诊断参考，而不是把实 验结果作为唯一标准。 临床医生不应该过度依赖检测结果，而应该结合临 床进行综合分析。 检测要点 根据目的选择检测方法及策略 严格遵守实验室标准操作程序（SOP） 结果判定以试剂说明书为标准 筛查试验有反应，须作补充试验 筛查试验无反应，不应作补充试验 对筛查及补充试验对象均应做咨询工作（接诊 医生尤其作好工作） 结果解释 初筛实验中的假阳性：初筛实验中的假阳性： 血液恶性病变 自身

11、免疫性疾病 多发性胆汁型肝硬化 酒精性肝炎 疫苗接种（流感，乙肝） 多发性骨髓瘤 肾移植或慢性肾衰竭 疟疾或丝虫病 其他（试剂或操作原因、某些孕妇） 结果解释 初筛实验中的假阴性初筛实验中的假阴性 窗口期* 抗体迟反应* 免疫移植 换血输血 恶性肿瘤 免疫功能丧失（B细胞功能缺损） 其他（试剂或操作原因） 结果解释 确证试验的假阳性确证试验的假阳性 样本搞错样本搞错 实验过程中意外实验过程中意外 。 结果解释 确证试验的假阴性确证试验的假阴性 感染晚期，无法产生能检测限内的抗体感染晚期，无法产生能检测限内的抗体 样本错误样本错误 。 实际上确证样都是筛查阳性才确认，所实际上确证样都是筛查阳性才

12、确认，所 以筛查的结果非常重要，记录也要能够以筛查的结果非常重要，记录也要能够 准确无误。准确无误。 低病毒检测值可能是核酸污染所致的结果，低病毒检测值可能是核酸污染所致的结果，阴阴 性不能排除感染！性不能排除感染！ 核酸用于核酸用于HIV-1HIV-1感染的诊断感染的诊断* *： 检测值检测值5000 5000 CPs/mLCPs/mL( (或或IUs/mLIUs/mL) )，报告检测值；检测值，报告检测值；检测值 5000 5000 CPs/mLCPs/mL( (或或IUs/mLIUs/mL) )* *，尽快再次严格按核酸检测，尽快再次严格按核酸检测 的要求采样检测，报告检测值，结果的要求采样检测，报告检测值，结果5000 5000 CPs/mLCPs/mL( (或或 IUs/mLIUs/mL) )，报告检测值，结果仍，报告检测值，结果仍5000 5000 CPs/mLCPs/mL，则需充，则需充 分结合流行病学史、临床病史、分结合流行病学史、临床病史、CD4+TCD4+T淋巴细胞计数和淋巴细胞计数和 HIV-1HIV-1抗体随访检测结果等进行综合判断。抗体随访检测结果等进行综合判断。 结果解释 是否把核酸检测作为剖腹产依据？ 上送阳性样本问题 1 1、送样单位、日期有没有逻辑错误、送样单位、日期有没