HPLC法测定盐酸多巴胺注射液的有关物质

1、HPLC法测定盐酸多巴胺注射液的有关物质【摘要】 目的 筛选合适的高效液相色谱条件，测定盐酸多巴胺注射液的有 关物质。方法 采用不加校正因子的主成分自身对照法，采用 RP HPLC；色谱 柱为 Diamonsil C18 (4.6 mm150 mm， 5 m)；流动相为 0.005 mol/mL 十 二烷基硫酸钠 冰醋酸 0.1 mol/mL 乙二胺四醋酸二钠 (700102) 乙腈 (6 4) ；柱温： 40；流速： 1.20 mL/min ；检测波长 280 nm。结果 在 112 g/mL范围内线性良好，测定标准曲线为 Y=36493X-629.88(r=0.9996 ， n=11)；最

2、低检测限为 0.9997 ng 。结论 该法专属性强，准确，灵敏，可用于 盐酸多巴胺注射液有关物质的检查。【关键词】 RP HPLC法；盐酸多巴胺注射液；有关物质盐酸多巴胺( dopamine hydrochloride )注射液的有关物质检查，中国药 典 1中并没有收载。英国药典中收载的灭菌多巴胺浓溶液和注射用盐酸多巴 胺采用薄层色谱法，需用盐酸甲基多巴胺对照品( 4 O methyldopamine hydrochloride 和 3 O methyldopamine hydrochloride )测定系统适用性 2。本文采用 HPLC法进行有关物质检查，方法准确，重现性好，灵敏度 高，可

3、作为本品的有关物质检查方法，更有效的对其进行质量监控。1 仪器与试药TU1901型紫外可见分光光度计，美国 Waters 1525 高效液相色谱仪，日本 Shimadzu LC 10Avp高效液相色谱仪。甲醇、冰醋酸、十二烷基硫酸钠和乙 二胺四醋酸二钠均为分析纯试剂。盐酸多巴胺注射液由广州白云山明兴制药有 限公司提供，批号为 050107， 050501，060703。2 色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相： 0.005 mol/mL 十二烷基硫 酸钠 冰醋酸 0.1 mol/mL 乙二胺四醋酸二钠 (700 102) 乙腈(6 4) ； 流速： 1.2 mL/min ；检测波长

4、280 nm；理论板数按盐酸多巴胺峰计算为 3 600。在以上色谱条件下，盐酸多巴胺保留时间约为 5 min ，见图 1。A. 酸性破坏试验 B. 碱性破坏试验 C. 加热破坏试验 D. 氧化破坏试 验 E. 光照破坏试验 F. 溶解介质氧化破坏试验 G. 溶解介质碱性破坏试验图 1 盐酸多巴胺降解产物色谱图（略）Fig.1 HPLC chromatograms of decomposition products of dopamine hydrochloride3 方法与结果3.1 方法的专属性考察取盐酸多巴胺对照品适量，用流动相制成每 1 mL中含300 g的溶液，取 5 mL 置试管中，

5、加热 30 min 进行加热破坏试验；取 5 mL 置试管中，加质量分 数为 10%的盐酸溶液 2滴，加热 30 min 后用质量分数为 10%的 NaOH溶液调为中 性作为酸性破坏试验；取 5 mL置试管中，加质量分数为 10%的NaOH溶液 2 滴，加热 30 min 后加质量分数为 10%盐酸溶液调为中性作为碱性破坏试验；取 5 mL置试管中，加质量分数为 30%的过氧化氢 2 滴，加热 30 min 作为氧化破坏 试验；取 5 mL置试管中，在紫外灯 366 nm下光照1 h 作为光照破坏试验；同 时做溶解介质的破坏性试验。各取上述溶液 20 L 注入液相色谱仪，记录色谱 图，结果酸性

6、和碱性对盐酸多巴胺有明显的破坏，溶解介质约在 1.1 min 和 1.4 min 有杂质峰，拟定的色谱条件对分解产物与主峰有良好的分离，表明方 法的专属性强，见图 1。3.2 方法的耐用性考察选用 Diamonsil C18 (4.6 mm150 mm， 5 m)、江苏汉邦 C18(4.6 mm250 mm，5 m)、 Alltech C18 (4.6 mm150 mm，5 m)色谱柱等 3 种 不同品牌不同填料的 C18色谱柱，取破坏性溶液进样，结果 3 种色谱柱对分解 产物与主峰均能达到有效分离。3.3 线性范围精密称取盐酸多巴胺对照品适量，用流动相溶解并稀释成每1 mL含 112g的 1

7、1个溶液，依法测定，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线图，求得回归方程：Y=36 493X-629.88 （r=0.999 6 ，n=11）。盐酸盐多巴胺在 1 12 g/mL 范围内呈良好线性关系。3.4 检测限按上述色谱条件，以信噪比为 31对检出限进行测定，测得盐酸多巴胺在 此条件下的检出限为 0.999 7 ng 。3.5 供试品的测定精密量取本品适量，加流动相稀释成每 1 mL中含300 g的溶液作为供试 品溶液；精密量取 1 mL，置 50 mL 量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，作为对照 溶液。量取对照溶液 20 L，注入液相色谱仪，记录色谱图，盐酸多巴胺峰的 保留时间约在

8、 5 min ，调节检测灵敏度，使主成分峰的峰高为记录仪满量程的 20 25。再精密量取供试品溶液与对照溶液各 20 L，分别注入液相色谱 仪，记录色谱图至盐酸多巴胺保留时间的 3 倍。供试品溶色谱图见图 2，检验 结果见表 1。A. 空白溶剂 B.1%对照溶液 C. 样品图 2 盐酸多巴胺注射液有关物质检查色谱图（略）Fig.2 HPLC chromatograms of dopamine hydrochloride injection表 1 样品测定结果（略）Tab.1 Determination results of sample4 讨论4.1 取破坏性实验项下盐酸多巴胺原溶液（未经破坏），照分光光度法 在 200360 nm范围内扫描，供试品溶液在 280 nm处有最大吸收，且无其他干 扰，所以将检测波长定为 280 nm。4.2 按拟定的方法和色谱条件，盐酸多巴胺经酸、碱、氧化、光照、 加热等条件破坏产生的杂质有良好的分离，方法可行。主峰保留时间在 5 min 时，保留时间约在 3、4、8 min 处有杂质峰。4.3 方法耐用性的考察中选用的 3 种色谱柱对分解产物与主峰均能达到 有效分离，表明该法对色谱柱的选择无特殊要求。4.4 经测定 3 批样品，单个杂质峰面积均不大于对照溶液中盐酸多巴胺