nc膜简介及生产

1、硝酸纤维素膜 （NC 膜）的简介和生产原理概念硝酸纤维素膜（ nitrocellulose filter membrane ，简称 NC膜），在胶体金试纸中用做 C/T 线的 承载体，同时也是免疫反应的发生处。NC 膜是生物学试验中 zui 重要的耗材之一。NC膜的生产原理匀浆配比购买回来的原料硝酸纤维素粒子是一种非常普遍的有机化学物， 溶解形成混浆， 在该浆体内， 通过加入一定比例的试剂来调整 zui 后形成的膜的性质， 一般主要包含表面活性剂 /高分子聚 合物 /盐离子 / 成型剂等溶解的一个缓冲体系内。不同的厂家加入的溶液配方不一样，导致了 产品的差异。滚筒铺膜配好的匀浆通过滚筒， 形成

2、了一张薄膜， 平摊在十分光滑的平面载体上。 过程与造纸非常相 似。成型当匀浆内的成型剂开始挥发， 膜逐步干燥成型。 同时在这个过程中由于温度比较高， 有些厂 家在这个过程采取了在密闭腔体内成型， 同时补充配方溶液的形式， 来避免一些有效成分的 蒸发。切割 通过以上步骤生产出来的膜是呈一个宽度极大的产品，宽度的大小直接和滚筒的大小相关， 滚筒越大生产越方便，但设备的成本也越高.宽膜要经过切割才能成为我们购买到的25mm或 18mm（或 20mm ）宽的膜，而长度上，成品卷膜和宽膜的长度是相同的.理论上可以让厂家切成你需要的任意宽度， 但这样会造成原料的浪费和人力成本的增加， 后来厂商在和试纸 生

3、产厂家的协调过程中， 综合用料成本和生产便利性基本确定了上面说的宽度， 以次为标准。 从生产过程，我们可以得知， NC 膜本身已经添加了表面活性剂来改善亲水能力，而且已经 存在有一定的缓冲系统（虽然对纸条测试影响不会很大）。NC膜的选择膜的选择涉及到一个膜的分类标准问题，一个供应商可能提供这个膜是8um ，但另一个供应商告诉你膜是 135s 的。这之间的区别与是什么um 指的是膜孔径，而从上面膜的生产过程，我们可以看出，膜的孔径实际上是没有办法界 定的。由于干燥成型等过程的非均一，膜的孔径也是非均一的.膜孔径的说法实际上是沿用了一直以来的一个形象称呼 .而以秒为单位的定义为，每 4cm 膜，水

4、的层析时间是 *s. 该单 位已经越来越被各大厂商所接受，成为了一个通用的比较标准.以下我们将采用 s 单位来进行交流。换算情况大致为： 8um=135s； 6um=180s 不同秒数的膜对反应有什么影响呢首先， 我们分析一下液体在膜上的运动过程。 一张长度为 4cm 的膜， 每隔 1cm 做一个标记， 当液体运动过标记处时记录时间点 . 那么你将会发现液 体在膜上的运动是呈减速前行的。而两张不同秒数的膜（例如135s， 180s）在同一时间标记点处的运动速度不同 .这个试验用清水做不好观察，可以考虑用色素水溶液，非常明显。 那么从这个试验可以看出，在通过同一 T 线喷点位置时，金溶液通过的速

5、度是快速膜慢速膜。那么通过速度越快和包被在 T线的物质反应时间也就越短， 读数快， 那么灵敏度也就越 低。反之，反应时间长，读数慢，也就灵敏度高。同时还有一个问题是，反应时间越长，发 生非特异性结合的可能性就越大， 所以过长时间的反应不一定就能够真正的提升灵敏度。 所 以这里就有一个读数时间 /反应灵敏度 / 非特异性结合的均衡。 灵敏度，比较不同样本浓度情况下， T 线的变化是否和对照组同。一般每批次膜取前端一段 用来测试即可。由于制造过程的不均一性， 不同批号的灵敏度会有一定差异，当大批量使 用时， 这种差异影响是非常大的， 那么就要按照灵敏度表现将不同批号的膜进行分类。 在膜 的 STO

6、CK中要能够轻易的分辨出来。当进入后期生产调用时，就能根据这些分类，按照订 单要求取用不同批号的膜，或者用强灵敏度的原料和差灵敏度的膜来搭配。膜的质控方式 本节适合用膜量较大的公司用户参考。对于一卷膜可以用上几个月的用户来说，厂家 的质控标准已经完全能满足你的要求，而不需要自己再做相关的质控。膜的质控虽属于 原辅料 QC职能，但由于其专业性强，一般都由小样调试人员来执行。 膜入原料库后需要进行如下检验工作：1. 查收 COA在购买时， 供应商会随产品为每个 lot 的膜提供一张纸质的出厂质量证书， 该证书被 称为 COA。如果你已经购买某一批次的膜，而没有索取相应的证书， 如果有需要可提供批号

7、 向厂家要求补发。其实在很多行业都有厂商为自己的产品附上 COA的习惯。COA 一般只提供给大客户， 对小客户是没有意义的。 其内容主要是厂家在产品出厂时 做过一些测试的罗列。作用可以理解为质量凭证和测试数据参考。2. 检查物理性能 膜的物理性能主要是 2 个参数， 膜厚度和宽度。长度不需要检测。使用中可以关注长 度上是否有断面重接现象， 断面多费料则多， 少数发生。厚度，由螺旋测微尺，选择几个 测量点检测后算平均。 膜生产的必测参数。 主要表现为厚度不均匀影响生物原料在膜上的扩 散性能，点出来的 C/T 线宽窄不一，另外也影响爬速。宽度，普通直尺测量。物理性能一般 都不会有什么大问题。毕竟检

8、测标准客观，易把握。没有条件执行的厂家可省略。3. 跑水性能 样本采用含有有色食用色素的水溶液，目的是容易观测，需制作一个简易支架。操作： 注入足够溶液到下部槽内， 将不同批次膜每隔 1cm 做一次标记 （总长大于 4cm ） 并放到倾斜支架，整个支架下端放入溶液槽， 膜开始吸液，计时。 记录每个标记处的通过时 刻，并与对照组比较。跑板时， 理论上溶液呈水平线形式上吸，观测是否有波浪倾斜或包围 润湿等反常现象。4. 点样测试C/T 线出线时间， 其他试验条件相同情况下， 记录和比较 C/T 线出现时间是否与对照有 差异。灵敏度， 比较不同样本浓度情况下， T线的变化是否和对照组同。 一般每批次

9、膜取前端 一段用来测试即可。由于制造过程的不均一性，不同批号 的灵敏度会有一定差异，当大批量使用时，这种差异影响是非常大的，那么就要按照灵敏度表现将不同批号的膜进行分类。 在膜的 STOCK中要能够轻易的分辨出来。当进入后期生产调用时，就能根据这些分类，按 照订单要求取用不同批号的膜，或者用强灵敏度的原料和差灵敏度的膜来搭配。关于膜的批内差。批内差是肯定存在的，只是差距大小的问题，依据一般的测试条件 是很困难获得详细的数值， 因为你不可能对每一卷膜的每一段都做详细的测试。 减小膜批内 差的最有效方法是不购入边缘膜带。 前面说过膜的生产方式， 生产出的半成品是宽幅很大的 一个膜面，要通过截面裁切

10、才能获得 25mm 或者 20mm 的宽度。那么就有中间部分，和边 缘部分之分 .越靠近中间部分，膜的均匀性越好，边缘部分则相对要差，就造成了批内差。 一般可以通过 COA 获得具体位置信息，例如 MILLIPORE就在切割后用字母 A，B，C来表 示切出的窄膜在宽幅膜中的位置。如果是试用某个型号的膜小样，还需要在以上检测后加入膜加速老化试验，包括膜单 独的老化试验和点好膜后产品的老化试验， 具体试验方法请参看我以前写的研发思路一文。 膜的深入探讨和应用技巧1. 蛋白与膜的结合原理 蛋白与膜的结合原理， 已知的结合力包括疏水作用力 H 键静电作用力等，确切的结合原理 并不明确，主要靠假说来支撑

11、。主要有两种假说：1）首先两者靠静电作用力结合，然后靠 H 键和疏水作用来维持长时间结合。 2）首先两者靠疏水作用结合，然后靠静电作用来维持长时间结合。两条假说， 都表明其结合过程分为两步， 首先结合和后面长时间结合。 由于结合原理的不明 确性，导致在这方面的工作非常依赖实践经验。2. 膜对结合的影响1）膜孔径 有些技术人员倾向使用膜孔径来区分不同的膜， 但是请注意这只仅于同一厂家的产品， 如果 是不同厂家的产品， 这种比较是无意义的。膜孔径与层析速度的关系， 已在上文描述。 随着 膜孔径减小，膜的实际可用表面积递增，膜结合蛋白的量也递增。 估量表面积的参数为表 面积比率（实际可用表面积与所用

12、膜平面积的比率）。另外， 膜孔径越小，层析速度也越小，那么金标复合物通过T 线的时间也就越长， 反应也就越充分。综合以上两点， 结论为膜孔径越小灵敏度越高。 但是同时也减慢了跑板速度， 增加了非特异 性结合的机会，也就是假阳性越高 .所以要按照试验结果挑选适合实际项目的膜，找到合适 的平衡点。2）不同厂家的膜差异 这个差异主要来源于两点： 生产膜时，使用的聚合物和表面活性剂的来源，类型，数量不同。同理，在膜处理中这两 类物质一般会对性能产生较大影响。 处理过程不同。3. 生物原料，缓冲溶液的试剂和配方1）生物原料， 作为 CT线的生物原料使用情况各异，所以这里只做略述。 首先，单克隆抗体与膜的

13、结合优于多克隆抗体， 主要时由于多克隆抗体有很多不同的表面位 点，而各位点与膜的 zui 佳结合条件都有细微的差别，毫无疑问就增加了优化难度。其次， 分子量越大，蛋白越难结合到固相材料上。2）缓冲液 大家最关心的可能就是希望获得一个性能优良的配方， 包括缓冲液， 封闭液等等处理溶液配 方。其实我也无法提供给你一个万用配方清单。 因为不同的反应体系需要不同的配方来支持， 而 不同机构的反应体系又有差异。想获”鱼”先学”渔”.。为了不误导大家，我在下面涉及到配方的问题上，仅提供思路，具体配方请自己摸索。缓冲液的构成一般是： PBS（或其他缓冲体系） +作用物质（针对某一特定问题） +PH调整 .

14、我 在参考过以前的各种资料后， 个人意见为配方原则为宜简不宜繁， 根据自己的需要添加作用 物质，原来的很多需要添加的作用物质，由于膜制造技术的改进已经不再需要。推荐的缓冲体系为 PBS ， 该缓冲体系对多种抗原抗体都有良好的适应性。 作用物质的情况大致罗列如下：少量 NACL，减少信号强度，消假阳。有机醇（甲醇，异丙醇等） ，润湿膜，减少膜带有的静电， 利于结合包被。 个人不推荐， 因制膜工艺改进。表面活性剂（ TW20， TX100），增加亲水力，可避免线条中空现象，也可增色。 糖，保护剂，减缓老化速度，也可以增加亲水力同上。调 PH 到某个位置，可以消假阳。4. 点样环境环境湿度对点膜过程

15、非常重要。最佳湿度一般在45-65%。湿度过低，膜上容易聚集静电荷，点膜容易出现散点， 导致测试会出现疏水斑。 湿度过高， 膜上毛细作用加强，点膜容易引起 CT线变宽甚至扩散。为了保证点样时膜湿度的均一性，一般在点样前把膜放到该湿度条件 下平衡一段时间。5. 点样仪器与膜面情况的关系 目前有两种点样方式，划膜式和非接触点膜式.非接触点膜式优于划膜式，进口划膜式优于国产划膜式。因划膜式为软管将抗体划到膜表面， 而膜本身的物理性质为软脆， 划管会在其表面留下印痕 . 进口的划膜机由于使用的材料和控制系统较好， 所以留下的划痕较轻， 而国产仪器较差， 留 下的划痕也就比较严重。 划痕容易对层析的金标

16、复合物形成阻力， 导致假阳性。 同时容易 出现跑板时在 T 线位置出现若有若无一条细线 （鬼线），而跑板结束后鬼线消失的奇怪现象。6. 膜的宽度与点样位置膜的宽度一般有 18mm （ or 20mm ）和 25mm 两种， 分别使用在做测试条和做测试板上。 然而， 不同的 T 线点样位置将带来不同的灵敏度。 点样位置上移， 金标复合物通过 T线位置 时速度变慢，反应时间增加，灵敏度升高。反之灵敏度降低。 这个方法可以用来改变灵敏度 和消除假阳性。7. 溶液在膜上的扩散溶液在膜上的点样量一般情况下为 1ml/cm 。溶液在膜上的扩散是趋向两端的，喷点上去的 是均匀的抗体溶液， 但当干燥时线条边缘

17、的干燥速度高于中间， 中间的抗体会不断向两边扩 散，所以干燥后抗体是向线条的两端聚集的。 一般情况下不影响你的试验。 如果你发现线条 出现两端红，中间淡的现象，就要考虑这个问题了。可以加如上面说的作用物质来解决。8. 点膜前后的封闭作用 从供应商处购买回的膜基本上都是已经优化处理好的，直接点膜就可使用.然而我们还是经常会遇到关于封闭的讨论。其实封闭不象大家认为的那样，一封闭什么问题都解决了 . 老问 题走了新问题又来了，而且更麻烦，我要说的是慎用封闭。我极其反对点膜前封闭的做法。 原因为厂家在生产膜时候， 各种配方是混合加入原浆的。 而点膜前封闭时要将膜浸泡在封闭 液内， 必然扰乱了膜内正常的

18、物质分布。 由此引发了许多问题，也降低了工作效率。也有厂 家遇到不封闭就无法包被上膜的问题，其实可以通过其他办法来解决，封闭必然是下测。 我经常使用的封闭手法有两种： 流动封闭，将作用物质处理在样品垫上。膜上定点封闭，将 作用物质配成溶液喷点在膜的特定位置上。 该方法需要使用 BIODOT的 AIRJET喷头， 可以将 不合格的半成品大板重新复活。 只要是将封闭做在了膜上， 就必然会对产品的稳定性造成影 响，具体的影响程度要通过稳定性测试来评判。9. 膜的储存刚生产出的膜一般含有 5-10%的水分。 关于膜的老化机理， 有个理论支持， 不过争议比较大。 理论认为： 膜的老化是因为膜上的水分蒸发， 使膜变得疏水， 带电荷并变脆。储存膜一般要 求是避光，密封，过干或过湿都不利。在这种保存条件下，一般可以放置两年。但是如果膜 上做了封闭处理， 就要根据具体试验情况来判断了。 有些膜由于生产工艺的问题， 使用后灵 敏度会在一段