蛙心灌流实验报告

1、实验二离体蛙心灌流实验专业：学号：姓名：一、实验目的1. 学习离体器官（蛙心）灌流的方法。2. 观察理化因素对蛙心活动的影响。二、实验原理蛙心的灌流：蛙心无营养性血管，离体之后采用人工灌流的方法，仍可保持其新 陈代谢，心脏仍能有节律的自动收缩、舒张，并维持较长时间，心肌的营养是通 过心脏内膜液体的直接渗透而得。心肌：受体受体激动剂效应B i肾上腺素 去甲肾上腺素心率增快、房室传导 加速、心肌收缩力加 强。M乙酰胆碱心率减慢、房室传导 减慢、心肌收缩力减 弱。1. 任氏液：正常对照含有 NaCI、CaCl2、KCI、NaH2PO4、 Na2HPO4和蒸馏水，其电解质、晶体渗透压、pH值与蛙的组织

2、液相近。2.0.65%NaCI 灌流：细胞*液Ca2+W 心肌细胞动作电b期间Ca3+内流”心肌细胞胞浆C屏+浓度*心肌收缩力X3.2%CaCb 灌流:心率CZ细胞外液浓度显著升高工作细胞动作电位期间6内流卄自律性个心肌收縮力竹肌浆cF浓度卅肌浆cf浓度 持续升高CF与肌钙* 蛋白结合数量竹C与肌钙蛋白 只结合不解离心肌持续收缩膜内外C注浓度梯度增大慢反应细胞4期 自动去极速度4.1%KCl 灌流：痂外液K議皮魏升高K期制C你菰C护的兴奋J嫦 裁離用减小静息电位与龜位 平的电側小 H I 月心肌细瞅離牆细胞外液K*浓度显著升高膜内外衣浓度梯度戒小静息电位绝对值减小至-55 mVNa通道失活心肌

3、细胞兴奋性丧失心脏停搏于舒张找态5.1:10000 E 灌流肾上腺素(E)心肌细胞膜加受体结合仑議凸与肌钙蛋白亲细胞膜对C尹逋透性* 和力*肌浆网摄匚沪速度*1复极期肌浆C成浓度降低速度齐4期自动去极化速度卒心肌舒张专6.1:10000 Ach 灌流自律性卒心率个肌浆网对Ac沪通透性：动作电位期4间C尹内流Ix心肌收縮力竹乙酰胆喊(Adi)心肌细胞膜M受体结合抑制钙通道细胞膜对K*通透性專对透性*窦房结细胞最大复极电位绝对值增大 4期K*外流增加自律性*动作电位期间C”内流44心肌收缩力曲心率*7. 心得安B受体阻断剂，抑制肾上腺素与 B受体结合，使E不能发挥作用。8. 阿托品M受体阻断剂，抑

4、制Ach减慢心率，加速房室传导，增加心房收缩力三、实验器材离体蛙心任氏液、I % KCI溶液、2%CaCW溶液、0.65%NaCI溶液、1:10000肾上腺素、1:10000乙酰胆碱、心得安、阿托品四、实验步骤1. 离子试剂任氏液清洗任氏液清洗任氏剂 0.65%NaCI2%CaCl21%KCI任氏液2. 药物试剂任氏液清洗任氏液清洗任氏液清洗E心得安+EAch -阿托品+Ach 任氏液五、结果与分析 分析：细胞外液中Ca2+浓度降低，2期Ca2+内流减少，胞浆中Ca2+减少，心肌收 缩力降低。图1正常脉搏曲线图2 0.65% NaCI灌流脉搏曲线心率：38次/min 最大收缩力：3.5g 最小

5、收缩力：1.1g图3 2% CaCb灌流脉搏曲线分析：心肌的舒缩活动与心肌肌浆中的钙离子浓度的高低有关。心肌肌浆网不发达，储钙能力差，易受细胞外钙离子浓度高低影响。细胞外液中Na+与。&2+有竞争性抑制，细胞外液Ca2+浓度升高，细胞兴奋时内流Ca2+增加，心肌收缩力增 强。慢反应细胞4期去极速度加快，心率增快。分析：K+与Cf在细胞膜上有竞争性抑制，细胞外液中 K：浓度升高，K+抑制细胞 膜对Cf转运，因此进入细胞内CeT降低，心肌的兴奋一收缩耦联作用减小，心肌收缩力减弱心率：35次/min 最大收缩力：3.5g 最小收缩力：0.9g图5肾上腺素灌流脉搏曲线分析：肾上腺素与心肌细胞膜上的 沏

6、受体结合，心肌细胞和肌浆网膜CeT通透性 增强，肌浆中Cf浓度升高，心肌收缩力增强。而且肾上腺素使肌钙蛋白与钙离 子亲和力下降，肌钙蛋白对钙离子的释放增强，肌浆网膜摄取钙离子的速度加快， 钠-钙离子的交换增加，复极期向细胞外排出钙离子增多，心肌舒张速度增快， 整个舒张过程明显加强。分析：心得安是B1受体阻断剂，能够抑制肾上腺素与 B1受体结合，使E不能 发挥作用，因此心率及心肌收缩力保持不变。图7 乙酰胆碱灌流脉搏曲线图8 阿托品+Ach灌流脉搏曲线分析：乙酰胆碱与心肌细胞膜上的 M受体结合，心肌细胞膜K通道的通透性增强, 促进K+外流，动作电位期间cf内流减少，心肌收缩力降低。同时乙酰胆碱可

7、直 接抑制CaT通道，导致Cf内流减少，心肌收缩力降低。心率：34次/min 最大收缩力：2.5g 最小收缩力：l.lg 分析：阿托品是M受体阻断剂，能够抑制Ach减慢心率，加速房室传导，增加心 房收缩力，因此心率及心肌收缩力保持不变。六、讨论1. 为何常用离体蛙心，而不常用离体哺乳类动物心脏做心脏灌流实验？蛙类的某些基本生命活动和生理功能与哺乳类动物有相似之处，它的离体组 织、器官的生活条件比较简单，易于控制和掌握，来源丰富且价格低廉。离体蛙 心不需要恒温和特殊的供氧设备，因此常被选作心脏灌流实验。而哺乳类心脏生 活条件要求高，离体心脏灌流需要恒温环境，恒压或恒流灌流、供氧。实验影响 因素多

8、、设备多，心脏离体后存活时间较短。因此一般学生实验较少用哺乳类动 物心脏做离体心脏灌流实验。2. 离体蛙心为什么会节律性跳动？把离体和脱离神经支配、体液因素影响的动物心脏保持在适宜的环境中，在 一定时间内仍能产生节律性兴奋和收缩活动， 这是由于心脏的静脉窦能自动按一 定的兴奋节律产生兴奋，并传导到心房和心室，引起整个心脏又节律的兴奋和收 缩。静脉窦能产生节律性兴奋是由于其自律细胞在复极完毕后，立即开始自动的缓慢的去极化，使膜电位逐渐减小，当达到阈电位水平时，便爆发动作电位。3. 蛙心插管插入心室时，是在心脏舒张期插入还是在心脏收缩期插入？为什么？蛙心插管插入心室时，应在心缩期插入。这是因为主动

9、脉开口处有半月瓣， 当心室收缩时，半月瓣正好打开，此时主动脉与心室腔相通，插管容易顺势插入 心室。而在心室舒张期，半月瓣处于关闭状态，对插管产生阻力，不利于插入， 强行插入易损伤心肌组织。4. 实验过程中，为什么必须保持蛙心插管内液面高度的恒定？液面过高过低会产生什么影响？在实验中，蛙心插管内液面的高度发生变化，心脏收缩曲线会发生相应的变 化。心肌缩短幅度和速度即受前负荷的影响，也受后负荷的制约。插管内液面高 度所产生的压力，在心室舒张末期是作用于心肌的前负荷，这个前负荷决定了心 肌在收缩之前的初长度。因此根据心肌Starling 心肌定律，液面高度的变化将 导致心肌收缩强度的改变。心室开始收

10、缩时，插管内液体产生的压力又成为心肌 收缩时承受的后负荷，后负荷改变会使心肌收缩的幅度和速度发生变化。液面过高，心缩曲线幅度降低。过高的液面使心室前负荷超过最适前负荷， 心肌收缩强度不在增加或下降。而过高的后负荷却使心肌缩短幅度和速度大大下 降。液面过低，心室收缩曲线幅度也会降低，前负荷过小，导致心肌收缩强减小 的效应比后负荷减小的效应要强。因此试验中选取一最适液面高度，并保持这一 液面高度，以便取得较好的实验结果。5. 任氏液为何能维持离体蛙心较长时间的跳动？怎样才能使离体蛙心存活时间长？因为任氏液是常规的生理代用液。它的组成与体液相近，具有能维持生物体 的正常生命活动的功能。它与体液等渗具

11、有相同的PH值，并含有能量、营养物, 而且含有生物体心肌波动所需要的离子，如：K+、Na+ Ca2+等，并且等浓度，故能维持蛙心较长时间的跳动。可以通过用与蛙体液相近的生理代用液来使蛙心 长时间存活。6. 蛙心灌流时，蛙心心肌以何种方式获得营养？蛙心心肌可以通过扩散的方式从任氏液中获得葡萄糖，以维持心肌的能量供 应，同时又可以通过产能长生 ATP进而参与主动运输过程，从而从任氏液中获 得更多的离子或营养物质7. 蛙心灌流实验中，为什么不能改变蛙心与换能器连线的张力？改变蛙心与换能器连线的张力会影响蛙心收缩幅度，太紧心脏会停止，太松 换能器反应不明显。”可见，一个人的心胸和眼光，决清代 红顶商人”胡雪岩说： 做生意顶要紧的是眼光，看得到一省，就能做一省的生意；看得到天下，就能做天下的生意；看得到外国，就能做外国的生意。定了他志向的短浅或高远；一个人的希望和梦想，决定了他的人生暗淡或辉煌。人生能有几回搏，有生不搏待何时！所有的机遇和成功，都在充满阳光，充满希望的大道之上！我们走过了黑夜，就迎来了黎明；走过了荆棘，就迎来了花丛；走过了坎坷，就走出了泥泞；走过了失败，就走向了成功！一个人只要心存希望，坚强坚韧，坚持不懈，勇往直前地去追寻，去探索，去拼搏，他总有一天会成功。正