两种药用植物内生真菌次生代谢产物及其生物活性的研究

1、两种药用植物内生真菌次生代谢产物及其生物活性的 研究 论文分类号 学校代码： 10708 学 号： BS0908005 博士学位论文 Dissertation fo r Doctor s Degree 两种药用植物内生真菌次生代谢产物 及其生物活性的研究 SECONDARY METABOLITES OF ENDOPHYTIC FUNGI FROM TWO MEDICINAL PLANTS AND THEIR BIOACTIVITIES 张弘弛 指导教师姓名：马养民 学科名称：应用化学 论文提交日期: 论文答辩日期: 学位授予单位: 答辩委员会主席: 评阅人: 申请工学博士 学位论文 论文题目:

2、 两种药用植物内生真菌次生代谢产物 及其生物活性的研究 学科门类：工学 一级学科：化学工程与技术 培养单位：化学与化工学院 博士生：张弘弛 导 师：马养民 教授 2012 年 10 月 SECONDARY METABOLITES OF ENDOPHYTIC FUNGI FROM TWO MEDICINAL PLANTS AND THEIR BIOACTIVITIES A Dissertation Submitted to Shaanxi University of Science and Technology in Partial Fulfillment of the Requirement

3、for the Degree of Doctor of Engineering Science By Zhang Hongchi Dissertation Supervisor: Professor Ma Yangmin October, 2012 两种药用植物内生真菌次生代谢产物及其生物活性的研究 摘要 植物内生真菌是具有高度多样性的微生物资源，代谢产物多种多样， 目 前被认为是抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、杀虫等天然活性物质的重要资 源。为了寻找更多的生物活性物质，本论文采用活性追踪的方法，研究了 4 株来源于药用植物的内生真菌的活性代谢产物。 内容包括： 药用植物 （杜仲 和无花果） 内

4、生真菌的分离的初步鉴定； 抗菌活性菌株的分级组合筛选； 活 性菌株的鉴定和发酵条件考察； 活性成分的追踪分离； 单体化合物的结构解 析；单体化合物生物活性的初步评价。概括如下 （1）以杜仲和无花果为研究对象， 共获得了 119 株内生真菌。 从杜 仲 根、茎、叶中分离得到 62 株内生真菌，初步形态学鉴定，这些内生真菌分 属于 7 目，9 科，15 属，其中曲霉属 Aspergillus sp. ，镰孢霉属 Fusrium sp. ， 链格孢属 Alternaria sp. 是杜仲内生真菌的优势种群。从无花果根、茎、 叶中 分离得到 57 株内生真菌，初步形态学鉴定，分属于 7 目，10 科，

5、21 属。 中镰孢霉属 Fusrium sp. ，青霉属 Penicillium sp. ，曲霉属 Aspergillus sp. 是无 花果内生真菌的优势种属。 不同部位分离内生真菌的数量、 种类和分布不尽 相同，这就表明这两种药用植物的不同部位内生真菌的数量、 分布和种群存 在差异。 （2 ）采用抗菌活性筛选为主、 代谢产物化学成分筛选为辅的二级组 合 筛选模式，得到如下结果：抗菌活性初筛确定活性菌株共有 20 株（杜仲内 生真菌 11 株，无花果内生真菌 9 株），筛选率为 16.8 %；抗菌活性复筛筛 选到 12 株高抗菌活性的内生真菌，筛选率为 10.1 %；结合化学成分复筛最 这

6、4 株具有高抗菌活 后确定了 ER12 、EL09 、FR02 、FL10 性，并且代谢产 物种类丰富的内生真菌作为本论文的研究对象。 （3 ）根据菌株的形态、培养特征、 18S rDNA 以及 ITS 序列分析结 果， 对活性菌株 ER12 、EL09 、FR02 和 FL10 进行菌种鉴定，分别鉴定为刀孢 蜡 蚧菌、黑曲霉、溜曲霉以及三线镰孢。以菌丝体生物量、发酵产物重量、抗 菌活性、薄层色谱分析以及高效液相色谱分析为评价依据，对 4 株活性内 生 真菌进行了发酵产物稳定性试验， 培养基选择试验， 发酵时间试验， 萃取实 验，确定了 4 株活性内生真菌的扩大培养条件以及提取条件。 4 ）经

7、过扩大培养，采用常规的硅胶柱层析、反相硅胶柱层析，凝 Sephadex LH-20 柱层析、制备薄层层析以及重结晶等分离手段，从 4 株活 性 内生真菌分离到 90 个单体化合物。利用各种现代波谱技术 （ EI-MS 、 1 13 1 1 HR-ESI-MS、H-NMR、C-NMR、DEPT、H- HCOSY、HSQC HMBC等） 并结合化学方法鉴定了这 90 个化合物的结构， 其中新化合物 3 个，分别是 malformin E （19）、 cyclo- N-methyl-Trp-Leu （62 ）和 helovlic acid ester （ 83）。 从 ER12 中分离到 34 个化

8、合物， 其代谢产物的结构类型是 12 个环二 肽 类化 合物（ 3-10 ，13-16 ），1 个新的 环五肽化 合物 （ 19）， 4 个 fumiquinazoline 生物碱类化合物（ 17，18， 22 ，23 ），2 个二苯酮类化合物（ 20 ，21 ）， 1 个 咪唑类化合物（12），2 个甾体化合物（1，2 ），8 个苯的衍生物 （11，24-28 ， 31，32 ）及 4 个核酸苷（ 29 ， 30，33， 34 ）。从 EL09 中分离到 18 个化 合物， 其代谢产物的结构类型是 9 个甾体类化合物（ 38-44, 1, 2 ），3 个脂肪酸 （35-37 ），2 个呋喃类

9、化合物（ 45 ，46 ），2 个多羟基醇化合物（ 47 ， 48 ）及 2 个吲哚类化合物（ 49 ， 50 ）。从 FR02 中分离到 22 个化合物，其代谢 产物 的结构类型是 13 个吲哚二酮哌嗪类化合物（ 53-65 ，其中 62 为新化合物， 65 为新天然产物），2 个萜类化合物 （51，52 ），2 个甾体化合物 （1，39 ）， 2 个多元羧酸（ 67， 68 ）和 1 个多元醇（ 66 ）。从 FL10 中分离到 33 个 化合 物，其代谢产物的结构类型是 7 个 gliotoxin 类化合物（ 74-80 ）， 3 个烟 曲霉 酸的衍生物（81-83 ），3 个环二肽化合

10、物 （13，14，84），5 个脂肪酸（69-71， 36，37 ），4 个甾体化合物（ 1，39，72，73），3 个苯 的衍生物（ 87-89 ）， 4 个碱基或核酸苷（ 29 ，30，85，86）及 4 个多元羧酸或多元醇（ 47 ，48 ， 68， 90 ）。 （5 ）采用 MIC 法，以 11 种指示菌（ 4 个细菌和 7 个植物病原真 菌） 为模型，对 4 株活性内生真菌产生的 90 个单体化合物进行抑菌活性评价， 结果表明有 26 个化合物对指示菌显示了较强的抑制作用。 新化合 物 19 (malformin E )和 83(helovlic acid ester)对多种指示菌表

11、 现了很强的抗菌 作用。综合分析抗菌活性测试的结果，明确了 4 株活性内生真菌生物活性 物 质 的 类 别 ， ER12 Lecanicilliumpsalliotae的 活 性 物 质 主 要 是 fumiquinazoline 类生物碱和环肽类化合物； EL09Aspergillus niger的活性物质主要是甾 醇类 和呋喃类化合物； FR02Aspergillus tamarii 的活性物质主要是吲哚二酮 哌嗪 生物 碱 类 化合 物； FL10 Fusariumtricinctumi的活 性物 质 主 要是 gliotoxin 类 生物碱和烟曲霉酸类化合物 采用MTT法，以3个肿瘤细

12、胞株（MCF-7人乳腺癌细胞、HepG2人肝 癌细胞、 A549 人肺癌细胞）为模型，对分离得到的新化合物和生物碱类代 II 谢产物的抗肿瘤活性进行了初步评价， 结果表明这些化合物对不同肿瘤细胞 系表现出不同程度的增殖抑制活性。 其中新化合物 malformin E （ 19）MCF-7 和 HepG2 系表现出很好的细胞毒活性， IC50分别 是 0.65和 2.42 卩 M ; fumiquinazoline C（18）和 fumiquinazoline J （23 ）对 HepG2和 A549肿瘤 细胞的增殖有抑制作用，verruculogen（ 56 ）对HepG2和 A549肿瘤细胞

13、表 现出很强的细胞毒性，IC50分别是1.95和2.56卩M 。 总之，本文经过筛选获得 4 株活性内生真菌，通过 分离鉴定阐明了 4 株内生真菌中 90 个化合物的结构， 其中包括 3 个新化合物。 评价了这些单 体化合物的抗菌活性和抗肿瘤活性， 发现了 26 个单体化合物具有较强抗菌 活性和 4 个单体化合物具有较强抗肿瘤活性。上述研究结果证明植物内生 真 /、 菌作为植物生态一个重要的组成部分，是新结构和新活性物质的主要来源， 是寻找药物先导化合物的重要资源 关键词： 药用植物；内生真菌；活性筛选；次级代谢产物；生物活性 III SECONDARY METABOLITES OF ENDO

14、PHYTIC FUNGI FROM TWO MEDICINAL PLANTS AND THEIR BIOACTIVITIES ABSTRACT Endophytic fungi are a special and important microorganisms with taxonomic diversity, which show high potential as sources of antimicrobial, antiviral, anticancer, antioxidant, and insecticidal compounds. In order to investigate

15、 the potential bioactive compounds derived from endophytic fungi, this dissertation described the discovery of several antimicrobial compounds isolated from four endophytic fungi of plants by bioassay-guided group of medicinal fractionation. Studies include isolating of endophytic fungi, seleeting a

16、imed strains, fermentation studies, bioassay-guided fractionation, structural elucidation, preliminary evaluation of antimicrobial and anti-tumor activities of pure compounds. The results are concluded as follows: Sixty-two strains isolated from roots, stems and leaves of Eucommia ulmoides, were cla

17、ssified, identified, and belonged to fifteen genera, nine families, and seven orders according to their morphological and micro-structure characters. Alternaria sp., Fusrium sp. and Alternaria sp. are dominant endophytic fungi population in Eucommia ulmoides . Fifty-seven strains from Ficus carice w

18、ere classified, identified,and belonged to twenty-one genera, ten families, and seven orders while Fusrium sp., Penicillium sp. and Alternaria sp. are dominant endophytic fungi population. It showed that the quantities, species, and distribution of the endophytic fungus varied in different parts of

19、Eucommia ulmoides and Ficus carice . The endophytic fungi isolated from Eucommia ulmoides and Ficus carice , were first screened by antimicrobial assay to obtain 20 strains which showed strong antimicrobial activities, and possessed 16.8 % of total 119 strains tested. The 20 strains were subjected t

20、o the flow antimicrobial secondary screening and 10 strains were found to have more strong activities, which possessed 10.1 % of total 119 strains tested. On the basis of antimicrobial activities, the results of IV TLCand HPLCanalysis, four ested strains, ER12, EL09, FR02and FL10, were chosen as the

21、 aimed strains to investigate their bioactive metabolites in this study. According to their morphology, cultural characteristics, 18S rDNA and ITS sequences, the strains ER12, EL09, FR02 and FL10 were indentified as Lecanicillium psalliotae, Aspergillus niger , Aspergillus tamari and Fusarium tricin

22、ctum, respectively. Onthe basis of mycelia biomass, weight of fermentation extracts, antimicrobial activities, the results of TLC and HPLC analysis, stability-tests for the bioactive components and fermentation studies perfomred on the aimed strains. The time course experiments for the fermentation

23、of four strains were then carried out, followed by solvent extraction tests for the active components. Then, large-scale fermentation and preparation of the active fractions were perfomred to obtain the active fractions of the four strains. Ninety compounds were isolated from the four active strains

24、 by repeated column chromatography on silica gel, Sephadex LH-20, preparative thin layer chromatography PTLC and recrystallization. The structures of these compounds were elucidated by means of spectroscopic methods including 13 imidazoles 12sterols 1, 2benzene derivatives ESI-MS, HR-ESI-MS, 1D-NMR

25、H NMR, NMR, DEPT and 2D-NMR 1 1 H- H COSY,HSQC,HMBC as well as chemical method. Amongthem there were three new compounds, malformin E 19 , cyclo- N-methyl-Trp-Leu 62 and helovlic acid ester 83 . Thirty-four compounds were isolated from fungus ER12, and the chemical structure types of compoundswere i

26、nvolved in cyclic dipeptides 3-10, 13-16 , malformin E 19 , fumiquinazolines 17, 18, 22, 23 , diphenyl ketones 11, 24-28, 31, 32 and nucleosides 29, 30, 33, 34 . Eighteen compounds were isolated from fungus EL09, and the structure types of compounds were involved in sterols 38-44, 1, 2 , fatty acids

27、 35-37 , furan derivatives 45, 46 , polyhydric alcohols 47, 48 and indole derivatives 49, 50 . Twenty-two compounds were isolated from fungus FR02, and the structure types of compounds were involved in indolyl diketopiperazine analogs 53-65 , terpenes 51, 52 , sterols 1, 39 , polycarboxylic acids 67

28、, 68 and polyhydric alcohols 66 . Thirty-three compounds were isolated and the structure types of V compounds were involved helvolic acid derivatives from fungus Fl10, in gliotoxins 74-80 , 14, 84 , fatty acids 69-71, 36, 37 , 87-89 , nucleosides 29, 81-83 , cyclic dipeptides 13, sterols 1, 39, 72,

29、73 , benzene derivatives 30, 85, 86 , polyhydric alcohols and polycarboxylic acids 47, 48, 68, 90 . Ninety compounds were evaluated for their antimicrobial activities agains eleven tested strains. The results indicated that twenty-six compounds showed strong antimicrobial activities and the structur

30、e types of bioactive compounds were involved in indolyl diketopiperazines, gliotoxins, quinazoline alkaloids, cyclic dipeptides and sterols. Remarkably, malformin E and helovlic acid ester show strong antimicrobial activities against different tested strains. The results of antibacterial activity te

31、st indicated bioactive substances of four active fungi. Active substances of ER12 were mainly fumiquinazoline alkaloids and cyclic peptide compounds. Active substances of EL09 were sterols and furans. Active substances of FR02were indolyl diketopiperazines. Active substances of FL10 were gliotoxins

32、and helvolic acid derivatives. Three new compounds and isolated alkaloids were evaluated for their cytotoxicities against three cancer cell lines, MCF-7, HepG2and A549, by the MTTmethod. The results indicated that four of them showedsignificantcytotoxicities against different cancer cell lines and o

33、thers were weak. Among them, new compond, malformin E, showed significant inhibitory activities against MCF-7 and HepG2 cell lines with IC50 0.65, 2.42 卩 M respectively. Fumiquinazoline and fumiquinazoline J exhibited moderate activities against HepG2 and A549. Verruculogen showed significant inhibi

34、tory activities against HepG2 and A549 with IC50 1.95, 2.56 卩M. Summarily, this work obtained four active fungi from two medicinal plants and ninety compounds, including three new compounds and a new natural product, were isolated from the fungi. The bioactivities results indicated that twenty-six c

35、ompounds showed significant antimicrobial activities and four compoundsshowedsignificant cytotoxicities against different cancer cell lines. This thesis indieated that endophytic fungi, as an important part of plant system, which contain novel and bioactive compounds in its secondary metabolisms, is

36、 an important source for searching lead compounds for drugs. KEY WORDS:medicinal plant, endophytic fungi, active screening, secondary metabolites, bioactivity VI 缩略词语 HPLC high performance liquid chromotography ITS Internal Transcribed Spacer PDB Potato Dextrose Broth SDB Sabouraud s Dextrose Broth

37、CDB Czapek-Dox Broth PYG Peptone Yeast extract Glucose medium MeOH methanol CHCl3 chloroform Pet. petroleum DMSO demethylsulfoxide EtOAc ethyl acetate TLC thin-layer chromatography Recrys. Recrystallize NMR nuclear magnetic resonance DEPT distortionless enhancement by polarization transfer HMBC 1H-d

38、etected heteronuclear multiple bond connectivity HMQC 1H-detected heteronuclear multiple quantum coherence COSY shift correlation spectrosocopy 1D NMR one dimensional NMR 2D NMR two dimensional NMR ESI-MS electrospray ionization mass spectra HRESI-MS high resolution electrospray ionization mass spec

39、troscopy mp. melting point Rf value of relative mobility MIC minimal inhibitory concentration IC50 half inhibitory concentration MTT 3- 4,5-dimethyl-2-thiazoyl -2,5-diphenyl-tetrazolium bromide DMEM Dulbecco s modified Eagle medium RPMI Roswell Park Memorial Institute VII Structure of secondary meta

40、bolites 1-90， *new compounds) XI XII 目 录 摘 要 ABSTRACT .IV 缩略词 语 VII Structureofsecondary metabolites VIII 1 文 献 综 述 1 1.1 内 生 真 菌 的 定 义 1 1.2 内 生 真 菌 的 研 究 方 法 和 内 容 2 1.2.1 内 生 真 菌 的 分 离 培 养 和 鉴 定 1.2.2 内生真菌活性菌株的筛 2 选 4 1.2.3 内 生 真 菌 的 发 酵 培 养 条 件 6 1.2.4 内 生 真 菌 代 谢 产 物 的 提 取 、 分 离 和 鉴 定 6 1.3 内 生

41、 真 菌 活 性 代 谢 产 物 的 研 究 进 展 7 1.3.1 抗 菌 活 性 的 内 生 真 菌 代 谢 产 物 7 1.3.2 抗 肿 瘤 活 性 的 内 生 真 菌 代 谢 产 物 27 1.3.3 抗 HIV 活 性 的 内 生 真 菌 代 谢 产 物 41 1.3.4 杀 虫 活 性 的 内 生 真 菌 代 谢 产 物 43 1.3.5 抗 氧 化 活 性 的 内 生 真 菌 代 谢 产 物 46 1.3.6 酶 抑 制 剂 活 性 的 内 生 真 菌 代 谢 产 物 .46 1.3.7 其 他 生 物 活 性 的 内 生 真 菌 代 谢 产 物 .47 1.4 研 究 的 目

42、 的 和 意 义 49 2 两 种 药 用 植 物 内 生 真 菌 的 分 离 和 活 性 菌 株 的 筛 51 2.1 内生真菌 的分离及鉴 I 析 定 51 2.1.1 料 实验方 51 2.1.2 法 52 2.1.3 结果 与分 53 选 . 2.2 内生 60 真菌 的 筛 2.2.1 材 料 . 60 2.2.2 方 法 与 步 骤 . 61 2.2.3 结 果 与 分 析 64 2.3 小 结 70 活性内生真菌的鉴定及发酵条件的初步考 察 73 3.1 料 73 3.1.1 株 73 3.1.2 鉴定培 养基 发酵 培养 基 73 3.1.3 剂 74 主要 3.1.4 主要仪

43、 器 74 3.2 法 75 3.2.1 菌 株 的 形 态 学 鉴 定 75 3.2.2 菌 株 的 分 子 鉴 定 75 3.2.3 活 性 菌 株 发 酵 条 件 的 考 察 76 3.3 结果与 论 77 3.3.1 活 性 菌 株 的 宏 观 和 微 观 形 态 及 培 养 特 征77 3.3.2 活 性 菌 株 的 系 统 发 育 树 的 构 建 和 菌 种 的 鉴 定 结 果79 3.3.3 活 性 菌 株 的 发 酵 物 质 稳 定 性 试 验 结 果 82 3.3.4 活 性 菌 株 的 发 酵 培 养 基 选 择 试 验 结 果 83 3.3.5 活 性 菌 株 发 酵 时

44、 间 的 考 察 试 验 结 果 . 86 3.3.6 不 同 溶 剂 萃 取 试 验 结 果 90 结 3.4 91 4 四 株 活 性 内 生 真 菌 次 生 代 谢 产 物 的 提 取 和 分 离93 4.1 杜仲内生真菌 Lecanicillium psalliotae 次生代谢产物的提取 和分离 93 4.1.1 ER12 的 来 源 与 保 藏 93 II 4.1.2 ER12 的 发 酵 培 养 93 4.1.3 ER12 次 生 代 谢 产 物 的 提 取 与 分 离 93 4.1.4 次 生 代 谢 产 物 的 结 构 鉴 定 97 4.2 杜仲内生真菌 Aspergillu

45、s niger 次生代谢产物的提取和分 离 128 4.2.1 EL09 的 来 源 与 保 藏 . 128 4.2.2 EL09 发 酵 培 养 128 4.2.3 EL09 次 生 代 谢产物 的 提 取 与分 离 128 定 4.2.4 次生代谢产物的结构鉴 131 4.3 无花果内生真菌 Aspergillus tamarii 次生代谢产物的提取和 分离 143 4.3.1 FR02 的 来 源 与 保 藏 143 4.3.2 FR02 的 发 酵 培 养 143 4.3.3 FR02 的 次 生 代 谢 产 物 的 提 取 与 分 离 143 4.3.4 次 生 代 谢 产 物 的

46、结 构 鉴 定 146 4.4 无花果内生真菌 Fusarium tricinctum 次生代谢产物的提取和 分离 165 4.4.1 FL10 的 来 源 与 保 藏 165 4.4.2 FL10 的 发 酵 培 养 165 4.4.3 FL10 的 次 生 代 谢 产 物 的 提 取 与 分 离 165 4.4.4 次 生 代 谢 产 物 的 结 构 鉴 定 168 4.5 小 结 190 析 193 5 单 体 化 合 物 生 物 活 性 的 初 步评 价 192 5.1. 材 料 和 法 192 5.1.1 抑 菌 活 性 的 试 192 步测 5.1.2 抗 肿 瘤 活 性 的 初

47、试 192 5.2 结果与 5.2.1 抗菌活性的结果与分 析 193 5.2.2 抗 肿 瘤 活 性 的 初 步 测 定 结 果 194 5.3 小 结 195 III 6 结 论 和 展 望 199 6.1 结论 和 创 新 点 6.2 望 199 致 谢 201 参 考 文 献 202 附图：部分活性代谢产物核磁共振图 224 攻读博士期间发表的论 文 258 原创性声明及关于学位论文使用授权的声 明 .259 IV 两种药用植物内生真菌次生代谢产物及其生物活性的 研究 1 文献综述 1.1 内生真菌的定义 内生真菌 endophyte 是那些栖息在植物尤其是根、茎、叶内部的微 生物，但

48、是宿主 植物没有显示出明显的病症。目前，内生真菌被广泛接受的概念是 1991 年 Petrini 的定 义，植物内生真菌是指全部或部分生活史寄居在健康植物的细胞内或者各类 组织中的真 菌 （图 1-1 ），但其不会对宿主产生任何感染病症，内生真菌的内生性可以 通过组织学方 法或从严格表面消毒的植物组织中分离， 也可以通过从植物组织内扩增出微 生物 DNA 1 来证明 。发现内生真菌的存在已经超过百年，其英文 endophyte 源自于希 腊语，“ endo” 的 意 思 是 “ 内 部 ”，“ phyte ” 的 含 义 是 “ 植 物 ” 。 直 到 20 世纪 80 年代， Strobel

49、 等从 Taxus 2 brevifolia 中分离出一株内生真菌能产生紫杉醇 ，人们才开始认识内生真 菌在化学生态 学方面的作用， 关注其代谢产生的新颖的有生物活性的次生代谢产物。 调查 发现几乎所 有的维管束植物以及一些低等的蕨类植物、 藻类苔藓植物的各个组织中， 都 存在内生真 菌，近二十多年里， 研究发现内生真菌的多样性是相当大的， 已研究过的每 种植物都含 3 有多种内生真菌 。 图 1-1 内生真菌的无性生活周期 Figure 1-1 Endophytes asexaul life cycle Moricca 和 Ragazzi 研究表明，内生真菌和寄主植物之间的相互作用 的类型，

50、受其共 4 生体基因和外在环境调节的控制 。内生真菌可能生活在一个代谢恶劣的环 境中，寄主 植物不断受到恶劣外界环境和各种病虫害的侵袭， 迫使内生真菌不断产生新 的防御物质， 1 陕西科技大学博士学位论文 5-6 协同寄主植物进行系统防御， 所以药用植物内生真菌是功能代谢物的新的来 源。 同时植物内生真菌也会受到寄主植物的刺激， 产生与寄主植物相同或者 相似的次生 7 代谢物。 Baily 研究发现 ，寄居在宿主植物的内生真菌，相对于外界微生 物，其基因表 达的模式发生了变化。 先前对被子植物和裸子植物内生真菌进行了研究， 都 发现了不同 于外界真菌代谢的新的次生代谢产物。 尽管内生菌在植物体内的生物量几乎可忽略不计 , 但现有的研究认为内 生菌可通过 自生的代谢产物或存在本身借助于信号转导能显著地影响宿主植物。 植物内 生真菌会产 8 生一些代谢产物，协同寄主植物防御病原微生物 。研究发现，共生的植物 比非共生的 植物对病原微生物的侵入， 能更快速地启动防御系统。 研究人员发现， 植物 内生真菌能 9 10 够在干旱条件下保护他们的寄主植物 。感染了内生真菌的植物，其耐盐性 增强 。内 11 因此，可 更强烈 生真菌也可以增加了其寄主植物的耐热性，以及对抗食草动物 以认为，与 12 植物内生真菌共生的植物比非共生植物，触发应激反应更迅速、 1.2 内生真菌的研究方法和