中药制剂分析第五章生物碱

1、第五章第五章 中药制剂中各类化学成分分析中药制剂中各类化学成分分析 第一节第一节 含生物碱（含生物碱（alkaloid）类成分的分析）类成分的分析 生物碱的分布生物碱的分布 含生物碱量多的科有罂粟科、防已科、茄科、含生物碱量多的科有罂粟科、防已科、茄科、 小檗科、毛茛科、芸香科、夹竹桃科、马钱科小檗科、毛茛科、芸香科、夹竹桃科、马钱科 及茜草科等，及茜草科等，中药有三尖杉、麻黄、黄连、黄中药有三尖杉、麻黄、黄连、黄 柏、乌头、延胡索、粉防已、颠茄、洋金花、柏、乌头、延胡索、粉防已、颠茄、洋金花、 贝母、百部等。贝母、百部等。 二、生物碱的理化性质二、生物碱的理化性质 溶解度溶解度 多数极性较小

2、，属于亲脂性碱，游离状态下多数极性较小，属于亲脂性碱，游离状态下 几乎不溶于水。成盐后则水溶性增加，易溶几乎不溶于水。成盐后则水溶性增加，易溶 于水及醇中于水及醇中，不溶或难溶于苯、氯仿、乙醚，不溶或难溶于苯、氯仿、乙醚 等。等。生物碱和其盐这一相反的溶解性质可以生物碱和其盐这一相反的溶解性质可以 用于它的提取、分离和精制。用于它的提取、分离和精制。 酸碱性酸碱性 生物碱结构中含氮，多呈碱性。能与无生物碱结构中含氮，多呈碱性。能与无 机酸、有机酸成盐机酸、有机酸成盐 n： + h+x- n：h+x- 碱性强弱为：季胺碱性强弱为：季胺 叔胺叔胺 仲胺仲胺 伯胺伯胺 酰胺酰胺 沉淀反应沉淀反应 三

3、、含生物碱类成分中药制剂的定性鉴别三、含生物碱类成分中药制剂的定性鉴别 常用的提取溶剂系统常用的提取溶剂系统 非极性溶剂系统：一般先用非极性溶剂系统：一般先用10%的氢氧的氢氧 化铵、碳酸氢钠或氢氧化钠碱化，使生物化铵、碳酸氢钠或氢氧化钠碱化，使生物 盐游离，后用氯仿或乙醚提取，缺点是不盐游离，后用氯仿或乙醚提取，缺点是不 能提出水溶性生物碱。能提出水溶性生物碱。 极性溶剂系统：极性较大的生物碱可用极性溶剂系统：极性较大的生物碱可用 中性甲醇、乙醇、酸水（常用中性甲醇、乙醇、酸水（常用0.1%- 1%的盐酸、硫酸等）以及缓冲液提取，的盐酸、硫酸等）以及缓冲液提取， 但提出的杂质较多，需净化。但

4、提出的杂质较多，需净化。 混合溶剂系统：用不同极性的溶剂按不同比混合溶剂系统：用不同极性的溶剂按不同比 例混合，可较好地进行提取。例混合，可较好地进行提取。 （一）一般理化鉴别（一）一般理化鉴别 （二）色谱鉴别（二）色谱鉴别 1、薄层色谱法、薄层色谱法 吸附剂的选择吸附剂的选择：硅胶本身有弱酸性，与生物碱：硅胶本身有弱酸性，与生物碱 成盐，使吸附力增强，若用中性展开系统，其成盐，使吸附力增强，若用中性展开系统，其 rf值小，易拖尾。值小，易拖尾。一般用碱性展开系统或在一般用碱性展开系统或在 中性中加少量碱性溶剂，如二乙胺、氢氧化铵中性中加少量碱性溶剂，如二乙胺、氢氧化铵 或用氨水饱和（展开缸中

5、放一小杯氨水）或制或用氨水饱和（展开缸中放一小杯氨水）或制 备碱板（在硅胶板中加稀碱溶液）备碱板（在硅胶板中加稀碱溶液）。碱性氧化。碱性氧化 铝因本身带有碱性，故用中性展开剂即可使生铝因本身带有碱性，故用中性展开剂即可使生 物碱得到很好的分离。物碱得到很好的分离。 脂溶性生物碱脂溶性生物碱-用吸附薄层法，用活度较用吸附薄层法，用活度较 大的吸附剂如硅胶、氧化铝。大的吸附剂如硅胶、氧化铝。 水溶性生物碱水溶性生物碱-用硅藻土、纤维素作为支用硅藻土、纤维素作为支 持剂，硅胶板也可以持剂，硅胶板也可以 展开剂的选择展开剂的选择 脂溶性生物碱采取极性小的溶剂脂溶性生物碱采取极性小的溶剂 水溶性用极性大

6、的溶剂水溶性用极性大的溶剂 但一般用混合溶剂较多，单一溶剂少但一般用混合溶剂较多，单一溶剂少 显色剂的选择显色剂的选择 某些生物碱本身有颜色，可直接于可见光某些生物碱本身有颜色，可直接于可见光 下观察。下观察。 有紫外吸收的可用紫外检测。有紫外吸收的可用紫外检测。 但大部分生物碱无色且无荧光，则需喷显但大部分生物碱无色且无荧光，则需喷显 色剂，色剂，最常用的显色剂有改良碘化铋钾、最常用的显色剂有改良碘化铋钾、 碘蒸气、氨蒸气碘蒸气、氨蒸气 2、纸色谱法、纸色谱法 3、高效液相色谱法、高效液相色谱法 4、气相色谱法、气相色谱法 四、含生物碱类成分中药制剂的含量测定四、含生物碱类成分中药制剂的含量

7、测定 （一）总生物碱的含量测定（一）总生物碱的含量测定 1、化学分析法、化学分析法 2、 分光光度法分光光度法 （1）直接测定法）直接测定法 （2）离子对萃取比色法）离子对萃取比色法 酸性染料比色法酸性染料比色法 在一定在一定ph介质中，生物碱介质中，生物碱b可与氢离子可与氢离子h+结结 合生成生物碱盐的阳离子合生成生物碱盐的阳离子bh+，而酸性染料，而酸性染料 在此条件下解离为阴离子在此条件下解离为阴离子in-, ,则阴阳离子能则阴阳离子能 定量定量结合生成有色化合物（离子对）。结合生成有色化合物（离子对）。 再用合适的有机溶剂将该离子对提取，测定再用合适的有机溶剂将该离子对提取，测定 其吸

8、收度值，进而对生物碱定量。其吸收度值，进而对生物碱定量。 注意事项注意事项：1、选择适当的选择适当的ph 则生物碱成盐，则生物碱成盐， 成为阳离子成为阳离子bh+而酸性染料成为阴离子而酸性染料成为阴离子in-，阴阳，阴阳 离子可结合。如离子可结合。如ph太低，则水相酸性强，虽然生太低，则水相酸性强，虽然生 物碱成盐，但酸性染料亦以酸的形式存在；物碱成盐，但酸性染料亦以酸的形式存在；ph太太 高则水相碱性强，生物碱以游离状态存在，酸性染高则水相碱性强，生物碱以游离状态存在，酸性染 料以离子形式存在。都不能使阴阳离子定量地结合。料以离子形式存在。都不能使阴阳离子定量地结合。 2、酸性染料酸性染料的

9、选择的选择 常用的有溴酚蓝、溴甲酚常用的有溴酚蓝、溴甲酚 绿、溴麝香草酚蓝等绿、溴麝香草酚蓝等 3、合适的合适的有机溶剂有机溶剂 要求对生物碱与酸性染料要求对生物碱与酸性染料 的结合物有很好的溶解度。氯仿、二氯甲烷的结合物有很好的溶解度。氯仿、二氯甲烷 p117p117 苦味酸盐法苦味酸盐法 雷氏盐比色法雷氏盐比色法 （三）色谱法（三）色谱法 1、高效液相色谱法、高效液相色谱法 离子对色谱、正相色谱、反相色谱。离子对色谱、正相色谱、反相色谱。 （1 1）、流动相方面的改进）、流动相方面的改进 a a：加入：加入硅醇基抑制剂硅醇基抑制剂，可在流动相中抑制或掩，可在流动相中抑制或掩 蔽固定相表面的

10、游离硅醇基的活性，使生物碱易蔽固定相表面的游离硅醇基的活性，使生物碱易 出峰，峰形好。出峰，峰形好。最常用的有最常用的有二乙胺、三乙胺二乙胺、三乙胺； b b：加入：加入离子对试剂离子对试剂，使其与生物碱生成离子对，使其与生物碱生成离子对 而掩蔽其碱性基团，从而不会与固定相表面的硅而掩蔽其碱性基团，从而不会与固定相表面的硅 醇基作用；醇基作用；常用辛烷磺酸钠或十二烷基磺酸钠表常用辛烷磺酸钠或十二烷基磺酸钠表 面活性剂。面活性剂。 反相反相hplc的改进：的改进： c c：也可以加入：也可以加入季铵盐试季铵盐试剂剂， rr3 3sioh + a rsioh + a r3 3sioh.asioh.

11、a 硅醇基硅醇基 季铵盐季铵盐 复合物复合物 连续添加季铵盐时，平衡向右，因而被分连续添加季铵盐时，平衡向右，因而被分 离的生物碱和硅醇基之间的作用被阻碍，离的生物碱和硅醇基之间的作用被阻碍， 从而使生物碱得到很好的分离。从而使生物碱得到很好的分离。 常用有溴化四甲基胺常用有溴化四甲基胺 d：在流动相中加入一定浓度电解质在流动相中加入一定浓度电解质缓冲盐缓冲盐， 可改变流动相离子强度，稳定可改变流动相离子强度，稳定ph值及促进离值及促进离 子对作用，从而改善峰形及分离效果。子对作用，从而改善峰形及分离效果。 通常用通常用磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液，但操作时由于存，但操作时由于存 在盐，做过后应充

12、分洗柱，以免腐蚀柱子。在盐，做过后应充分洗柱，以免腐蚀柱子。 （2）、固定相方面的改进）、固定相方面的改进 a：选择：选择c链较短的键合相硅胶为固定相链较短的键合相硅胶为固定相，如，如 c8比比c18好，原因是由于硅烷的好，原因是由于硅烷的c链较短则覆链较短则覆 盖硅胶的表面较好，只有较少的游离硅醇基。盖硅胶的表面较好，只有较少的游离硅醇基。 b：封尾技术可使填料的键合更彻底，常用三封尾技术可使填料的键合更彻底，常用三 甲基氯硅烷（甲基氯硅烷（tmcs）处理，可减少残余羟基，）处理，可减少残余羟基， 增加单体覆盖度。增加单体覆盖度。 （3）、增加流动相的脂溶性）、增加流动相的脂溶性 （4）、升

13、高柱温）、升高柱温 2、薄层色谱法、薄层色谱法 3、气相色谱法、气相色谱法 适用于有挥发性的、遇热不分解的生物碱适用于有挥发性的、遇热不分解的生物碱 类，如类，如麻黄碱、槟榔碱、苦参碱和颠茄类麻黄碱、槟榔碱、苦参碱和颠茄类 生物碱。生物碱。 思考题思考题：乌头（注乌头（注1）的容量法测定的操作程序是：）的容量法测定的操作程序是： 取样品精密称定，加无水乙醇溶液并放置取样品精密称定，加无水乙醇溶液并放置24小时，小时， 过滤，减压回收乙醇，至残留液至小量时加过滤，减压回收乙醇，至残留液至小量时加2%盐盐 酸溶液（注酸溶液（注2），移入分液漏斗中，用乙醚萃取），移入分液漏斗中，用乙醚萃取3次次 （注（注3），在样品液中滴加氨试液调），在样品液中滴加氨试液调ph9 10（注（注 4），再用乙醚），再用乙醚-氯仿（氯仿（3:1）混合液提取次（注）混合液提取次（注 5），合并萃取液，蒸干，加无水乙醇溶解精密），合并萃取液，蒸干，加无水乙醇溶解精密 加入硫酸液（加入硫酸液（0.01mol/l）与甲基红指示剂滴，）与甲基红指示剂滴， 用氢氧化钠液（用氢氧化钠液（0.02mol/l）滴定，