论文 高效液相色谱在药物分析中的应用

1、高效液相色谱法在药物分析中的应用与发展 摘要：色谱分析作为重要的分离分析技术，已成为药物研制开发、生产单位、药品检验部门及医院临床检验等各个领域中药物质量控制必不可少的方法和技术。高效液相色谱法是20世纪60年代末70年代初出现的分析速度快、分离效率高、操作自动化的新型色谱分析方法。它已逐渐成为药物分析领域中重要的分析手段及主要制备方式之一。关键词：高效液相色谱法 药物分析 1. 前言高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography , HPLC），又称“高压液相色谱法”或“高速液相色谱法”，是20世纪60年代末，在经典液相色谱的基础上引入气相色谱的

2、理论与实验方法，并加以改进而发展起来的一种重要分离分析方法。HPLC采用了高压输液泵，高效固定相和高灵敏度在线检测器等技术，具有分离效能高、分析速度快、灵敏度高、色柱可以反复使用、流动相可选择范围宽、流出组容易收集、适用范围广和安全等优点，特别适合挥发性低、热稳定性差、分子量大的高分子化合物以及离子型化合物的分离分析测试，广泛应用于医学、药学、化学、生化、工业、农业、环保、商检和法检等科学领域Error! Reference source not found.。近年来，高效液相色谱法在药物分析中发挥着越来越重要的作用，主要是鉴别相关物质、检查药物中有关物质的含量限度以及测定有效成分或主要成分含

3、量，世界各国已将该法收载于药典。本文就高效液相色谱法在药物分析研究中的应用和发展综述如下。2. 高效液相色谱法在药物分析中的应用2.1 高效液相色谱法在药物鉴别中的应用在HPLC法中，保留时间与组分的结构和性质有关，是定性的参数，可用于药物的鉴别。如中国药典收载的药物头孢羟氨苄的鉴别项下规定：在含量测定项下记录的色谱图中，供试品主峰的保留时间应与对照品主峰的保留时间一致。头孢拉定、头孢噻酚钠等头孢类药物以及地西泮注射液、曲安奈德注射液等多种药物均采用HPLC法进行鉴别。王维剑7 王维剑,张军仁,庞华. 替莫唑胺含量测定方法的研究J. 药物分析杂志,2003 ,23 (5) :344.等以ODS

4、柱，甲醇-0.5%乙酸(1:9)为流动相，DVD检测器，波长329 nm测定了一种新型抗肿瘤药替莫唑胺(temzolo-mide)，为申报新药提供了数据。崔静茹8 崔静茹, 杜智敏. 半夏止咳糖浆的制备与鉴别J. 实用新闹肺血管病杂志. 2008, 16(7): 61-63.等以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，分别以甲醇-冰乙酸-水(30466)和以乙腈-01%磷酸液(991)为流动相，检测波长分别为283 nm、207 nm，对半夏止咳糖浆中的陈皮、麻黄进行鉴别，方法简便准确，专属性强，重复性好，可用于控制此中药制剂的内在质量。王小平9 王小平，林励，白吉庆HPLC指纹图谱法鉴别蜂胶和树胶J陕

5、西农业科学，2009，55(3)：133135等还采用HPLC指纹图谱法对蜂胶和树胶进行鉴别。这些应用无疑为进一步完善、开发药物鉴别的方法提供了一种新的思路。2.2高效液相色谱法在含量测定中的应用用高效液相色谱法测定含量可以消除药物中的杂质，制剂中的附加剂及共存的药物对测定的干扰，因此药物成分含量测定中HPLC法应用广泛。杜洪光10 杜洪光, 赖宇宏, 王丽等. HPLC法测定苯甲酸雌二醇贴片中药物的含量及其体外透皮释放量J. 北京化工大学学报. 2004, 31(2): 110-112.等采用HPLC法测定苯甲酸雌二醇贴片中苯甲酸雌二醇(EB)的含量，李立11 李立, 许军, 王如意等. 正

6、清风痛宁口崩片制备工艺及质量标准研究J. 时珍国医国药. 2008, 19(5): 1195-1196.等用HPLC法测盐酸青藤碱含量，操作简便，回收率高，快速准确。刘娜12 刘娜, 赵朝群, 王萌. 舒冠胶囊的制备及质量标准研究J. 甘肃中医. 2008, 21(4): 47-49.等以HPLC法测定2,3,5,4-四羟基二苯乙烯-2-o-D-葡萄糖苷的含量，可用于舒冠胶囊的质量控制。此外，张小华等应用RP-HPLC法成功测定了阿莫西林-盐酸环丙沙星可溶性粉的含量。李妮等采用RP-HPLC法测定盐酸齐拉西酮的含量。胡云珍等采用RP-HPLC法测定佐米曲普坦的含量，并对其纯度进行考察。2.3

7、高效液相色谱法在添加违禁药物检查中的应用近年来，食品、药品、保健品以及动物饲料等各方面频频出现非法添加违禁药物的事件，这类成分往往对患者造成病情不受控制、药物中毒等不良反应，严重者甚至威胁到患者生命。高效液相色谱法对添加违禁药物的日常检验工作提供了有力的技术支持。薛恒跃16 薛恒跃, 王玉兰, 于黎明等. 中药制剂中添加化学药品苯巴比妥的检测方法研究J. 时珍国医国药. 2006, 17(2): 216-217.等建立化学官能团专属性鉴别方法和高效液相色谱法对抗癫痫类中药制剂中添加化学药品苯巴比妥进行初步确认，用高效液相色谱-质谱联用技术以对照品比对做最终确认，结果准确可靠。高青17 高青,

8、张韶, 车宝泉. 6种抗高血压药物液相色谱鉴别方法的研究J. 中国医科大学学报. 2005, 36(4): 330-333.等采用氰基( 25 cm4.6 mm)色谱柱，以0.01 mol/L庚烷磺酸钠溶液(用20%磷酸调节pH值至2.7)-乙腈(73)为流动相，柱温35，流速1 mL/min，检测波长230 nm，265 nm。在此色谱条件下，中药制剂中非法添加的6种化学合成降压药（比索洛尔、吲达帕胺、硝苯地平、尼群地平、非洛地平及利血平）有很好的分离度，检测灵敏度及最小检出量均为2 ng；连续5针进样色谱图中各组分保留时间的相对标准偏差均小于1.0%。车宝泉18 车宝泉, 张喆, 黄晓君等

9、. 液质联用检查中药制剂及保健食品中减肥类药物J. 药物分析杂志. 2009, 29(4): 633-635.等采用Utimates XB-C18色谱柱，梯度洗脱：流动相A为含0.1%醋酸的20 mmolL-1醋酸铵溶液，流动相B为甲醇,流速为1 mLmin-1。选择正负离子全扫描方式检测临床常用的10种减肥药，利用质谱解析软件研究了上述化合物的质谱裂解规律，通过比较样品峰与对照品峰的一级质谱、二级质谱质荷比，确定样品中是否掺杂了化学药物。结果各色谱峰间分离度良好，质谱分辨率符合要求，最小检出量为2 ng至100 ng。3. 高效液相色谱法在药物分析中的发展3.1 联用技术随着色谱技术的发展，

10、结合计算机各种软件的开发，使HPLC与各种检测仪器联用，更加拓宽了HPLC的应用范围。如HPLC与质谱联用(HPLC-MS)技术是以高效液相色谱为分离手段，以质谱为鉴定工具的一种分离分析技术，具有高度的专属性，对多数药物的检测灵敏度超过其他分析方法，使定量测试速度显著加快，可以对混合物中的微量组分进行分析19 谢英新, 王丰. HPLC-MS联用技术在药学中的应用J. 黑龙江医药. 2007, 20(5): 495-496.，在国外已成为测定低浓度生物药品中药物及代谢物的首选方法。液相色谱法与化学发光联用(HPLC-CL)，已成为一种有效的痕量及超痕量分析技术，用于测定复杂的、含量低的混合物中

11、组分的分析20 卫洪清, 刘二保, 张敏. 高效液相色谱-化学发光法在药物分析中的运用J. 山西师范大学学报(自然科学版). 2005, 19(2): 58-60.。蒸发光散射检测器(ELSD)对所有不挥发溶质都有响应，其特点是灵敏度高，检出限为10ng，不受溶剂成分及温度波动的影响，亦可用于梯度洗脱，HPLC与ELSD的联用也已得到广泛的应用21 马艳蓉, 柴国林, 张莅峡. HPLC-ELSD在中药分析中的应用J. 中国中医药信息杂志. 2004, 11(4): 368-371.22 朱业晋, 张昊杰. HPLC-ELSD在药物分析中的应用进展J. 赣南师范学院学报. 2003(6): 3

12、9-41.。3.2 微柱高效液相色谱法高效液相色谱法具有很多优点但也存在一些不足，如流动相消耗量大，所用溶剂大多有毒且价格昂贵等。特别是对于一些较复杂样品的分析，用单相分离分析方法往往很难完成。微柱高效液相色谱由于填充粒度小而密集，就等效于理论塔板数的增多，可使色谱柱的柱效提高。采用内径较小的柱子，可使纵向扩散减少，峰展宽效应大大降低，进而缩短了分析时间又提高了检测灵敏度。采用微柱还可以分析极少量的样品，使流动相用量大为减少，利于节约溶剂和环境保护23 董学畅，张甜微柱高效液相色谱及其研究进展J云南化工，2004，31(5)：23-26。3.3 进样富集处理对于流体中待检物含量较少，基质干扰较

13、大的待测物，直接使用高效液相色谱法检测灵敏度不高，需对待测物进行富集处理，固相萃取(SPE)是近年发展起来一种样品预处理技术，由液固萃取和柱液相色谱技术相结合发展而来，主要用于样品的分离、纯化和浓缩，与传统的液液萃取法相比较可以提高分析物的回收率，更有效的将分析物与干扰组分分离，减少样品预处理过程，操作简单、省时、省力。SPE与HPLC技术结合已有很多成功的应用24 张吟, 陈一农, 陈崇宏. 固相萃取-高效液相色谱法分析血浆中的13种药物J. 中国药学杂志. 2010, 45(21): 1648-1651.。4. 结束语高效液相色谱法是现代药物分析中最高效、快捷的方法之一，具有专属性强、灵敏

14、度高等特点，既可用于药物分离，也可用于定性定量分型，适用范围广因此在药物成分的分离与测定方面能够充分发挥其它分析方法无与伦比的优势。而且随着计算机软件的开发、专家系统的应用、检测手段的进步、各种联用技术的出现以及其他一些相关问题的解决，HPLC将称为今后质量规范化，国际化的重要途径之一。参考文献1 刘斌. 高效液相色谱法在药物分析领域中的应用J. 中国中医药咨讯, 2009.1(4):107.2 孙毓庆. 现代色谱法及其在医药中的应用M. 北京:人民卫生出版社.2000.3 吕璨慧，温哲. 高效液相色谱在中药研究中的应用进展J. 科技与生活, 2010(13):91.4 The United

15、States pharmacopeial convention, Inc, The United States pharmacopeia XXIIIS. Appendix,1998. 17741777.5 British pharmacopoeia commission,British phavmacopiaS. Appendix, 2002. 140144.6 国家药典委员会. 中华人民共和国药典(二部)S. 北京:化学工业出版社, 2000：附录3234.7 王维剑,张军仁,庞华. 替莫唑胺含量测定方法的研究J. 药物分析杂志,2003 ,23 (5) :344.8 崔静茹, 杜智敏. 半

16、夏止咳糖浆的制备与鉴别J. 实用新闹肺血管病杂志. 2008, 16(7): 61-63.9 王小平，林励，白吉庆HPLC指纹图谱法鉴别蜂胶和树胶J陕西农业科学，2009，55(3)：13313510 杜洪光, 赖宇宏, 王丽等. HPLC法测定苯甲酸雌二醇贴片中药物的含量及其体外透皮释放量J. 北京化工大学学报. 2004, 31(2): 110-112.11 李立, 许军, 王如意等. 正清风痛宁口崩片制备工艺及质量标准研究J. 时珍国医国药. 2008, 19(5): 1195-1196.12 刘娜, 赵朝群, 王萌. 舒冠胶囊的制备及质量标准研究J. 甘肃中医. 2008, 21(4)

17、: 47-49.13 张小华, 张龙, 李生其等. RP-HPLC法测定阿莫西林盐酸环丙沙星可溶性粉的含量J. 中国兽药杂志. 2004, 38(2): 26-28.14 李妮, 沈顺, 仲艳等. RP-HPLC法测定盐酸齐拉西酮的含量J. 复旦学报（医学版）. 2004, 31(6): 656-657.15 胡云珍, 姚彤炜, 王向军. 佐米曲普坦的含量测定与有关物质检查的方法学研究J. 浙江大学学报（医学版）. 2004, 33(1): 37-40.16 薛恒跃, 王玉兰, 于黎明等. 中药制剂中添加化学药品苯巴比妥的检测方法研究J. 时珍国医国药. 2006, 17(2): 216-217.17 高青, 张韶, 车宝泉. 6种抗高血压药物液相色谱鉴别方法的研究J. 中国医科大学学报. 2005, 36(4): 330-333.18 车宝泉, 张喆, 黄晓君等. 液质联用检查中药制剂及保健食品中减肥类药物J. 药物分析杂志. 2009, 29(4): 633-635.19 谢英新, 王丰. HPLC-MS联用技术在药学中的应用J. 黑龙江医药. 2007, 20(5): 495-496.20 卫洪清, 刘二保, 张敏. 高效液相色谱-化学发光法在药物分析中的运用J. 山西师范大学学