益生菌酒精性肝损伤

1、益生菌对酒精性肝损伤作用 机制研究 益生菌对小鼠实验性肝损伤预防作用的初探益生菌对小鼠实验性肝损伤预防作用的初探 指导教师：教授指导教师：教授 学生姓名：学生姓名： 年级专业：年级专业： 实习地点：实习地点： 目的目的方法方法结果结果 结论结论 探究益探究益 生菌类生菌类 制剂对制剂对 小鼠实小鼠实 验性肝验性肝 损害有损害有 无预防无预防 作用作用 本实验以小鼠本实验以小鼠 为研究对象，为研究对象， 共分三组，并共分三组，并 设对照组。先设对照组。先 期给予一段时期给予一段时 间的益生菌制间的益生菌制 剂灌胃，而后剂灌胃，而后 一次性用四氯一次性用四氯 化碳和豆油溶化碳和豆油溶 液对所有小鼠

2、液对所有小鼠 灌胃染毒；灌胃染毒； 与对照与对照 组比较组比较 ，益生，益生 菌制剂菌制剂 组肝损组肝损 害程度害程度 较轻较轻 益生菌益生菌 制剂对制剂对 小鼠实小鼠实 验性肝验性肝 损害有损害有 预防作预防作 用用 摘摘 要要 1989年，年，fuller定义：定义： 益生菌是通过改善肠道菌群平益生菌是通过改善肠道菌群平 平衡而对宿主健康产生有平衡而对宿主健康产生有 益作用的活菌添加剂益作用的活菌添加剂 havenaar和和huisintveld 于于1992年扩展为年扩展为 ：通过改善内源性通过改善内源性 性微生物性微生物,对动物或人类施加有益对动物或人类施加有益 影响的单一或混合的活微

3、生物影响的单一或混合的活微生物 欧洲权威机构欧洲食品欧洲权威机构欧洲食品 与饲料菌种协会与饲料菌种协会(effca)于于 2002年给出最新定义年给出最新定义 益生菌是活的微生物益生菌是活的微生物,摄入摄入 充足的数量后充足的数量后,对宿主产生对宿主产生 一种或多种特殊且经论证的一种或多种特殊且经论证的 健康益处健康益处 1994年德国会议年德国会议 益生菌是含活菌和益生菌是含活菌和/或死菌包括其或死菌包括其 组分和产物的细菌制品组分和产物的细菌制品,经口或其经口或其 其他黏膜途径投放其他黏膜途径投放,旨在改善黏膜表旨在改善黏膜表 面微生物或酶的平衡面微生物或酶的平衡,或者刺激特或者刺激特 异

4、性或非特异性免疫机制异性或非特异性免疫机制 2.2.扩扩 展展 4.4.至至 今今 3.3.修修 订订 益生菌益生菌 定义演变定义演变 1.首次定义首次定义 前前 言言 nanjinanji等曾给肝病患者肠道引等曾给肝病患者肠道引 入双歧杆菌入双歧杆菌, ,结果发现病人的结果发现病人的 血氨降低血氨降低, ,同时食欲增加同时食欲增加, ,有有 助于肝病的恢复。助于肝病的恢复。 华方德等曾应用回春生治疗肝硬化华方德等曾应用回春生治疗肝硬化 、肝炎、肝炎, ,结果证明可有效地改善肝结果证明可有效地改善肝 脏蛋白质代谢功能脏蛋白质代谢功能, ,降低血中的内降低血中的内 毒素水平。其疗效优于现有的治疗

5、毒素水平。其疗效优于现有的治疗 肝炎、肝硬化药物。肝炎、肝硬化药物。 李春梅的临床动物实验研究结果也证实李春梅的临床动物实验研究结果也证实, ,经经 益生菌制剂治疗后益生菌制剂治疗后, ,肠道内致病菌数量减少肠道内致病菌数量减少, , 双歧杆菌数量增加双歧杆菌数量增加, ,提示内毒素血症的好转提示内毒素血症的好转 与肠道内致病菌的增殖受到抑制有关。与肠道内致病菌的增殖受到抑制有关。 研究进展研究进展 王清图的结果证明经双歧杆菌治疗后王清图的结果证明经双歧杆菌治疗后, ,可降低血可降低血 中内毒素和血氨浓度。这些研究结果均证明益生中内毒素和血氨浓度。这些研究结果均证明益生 菌制剂可减轻致病因素对

6、肝脏的损伤菌制剂可减轻致病因素对肝脏的损伤, ,并有效地并有效地 改善肝脏代谢功能。改善肝脏代谢功能。 材料与方法材料与方法 11 材料 111 动物 昆明种健康小白鼠,体重18-20g,内 蒙古大学动物饲养中心提供。 四氯化碳溶液四氯化碳溶液 食用鲁花花生油食用鲁花花生油 苦味酸苦味酸 发酵乳发酵乳 乳酸菌发酵剂（活菌粉乳酸菌发酵剂（活菌粉 ） 生理盐水生理盐水 alt试剂盒试剂盒 ast试剂盒试剂盒 sod试剂盒试剂盒 4%的多聚甲醛的多聚甲醛 70%乙醇乙醇80%乙醇乙醇 95%乙醇乙醇 无水乙醇无水乙醇 二甲苯二甲苯 石石 蜡蜡 pbs 伊伊 红红 苏木精苏木精 112 112 主要药

7、品与试剂主要药品与试剂 113主要仪器与设备主要仪器与设备 灌胃针，1ml、5ml注射器，电子秤，显 微镜，包埋机，切片机，高速台式离心 机、高速冷冻离心机;电子分析天平; 电 热恒温水浴锅;低温冰箱（-4-20 - 80 ）; 活菌活菌 粉组粉组 发酵发酵 乳组乳组 5只只5只只 5只只5只只 预防组预防组 雄鼠雄鼠 雌鼠雌鼠 对对 照照 组组 5只只 5只只 1.2 方法方法 .1 小鼠分组小鼠分组 在内大动物饲养中心取健康小白鼠，雄性在内大动物饲养中心取健康小白鼠，雄性2020只，只， 雌性雌性2020只。分组如下（表只。分组如下（表1 1）：）： 给药方法如下图（表给药

8、方法如下图（表2）： 预防组预防组 对照组对照组 17天天 08.4.17-08.4.23 按照表按照表1给予活给予活 菌粉和发酵乳灌菌粉和发酵乳灌 胃胃(0.5ml/只只) 正常饲养正常饲养 第第8天天 08.4.24 给予四氯化碳豆给予四氯化碳豆 油溶液灌胃染毒油溶液灌胃染毒 (40mg/kg.bw ) 给予四氯化碳给予四氯化碳 豆油溶液灌胃豆油溶液灌胃 染毒染毒(40mg/kg.bw ) 9-47天天 08.4.25-08.6.2 按照表按照表1给予活给予活 菌粉和发酵乳灌菌粉和发酵乳灌 胃胃(0.5ml/只只) 给予生理盐水给予生理盐水 灌胃灌胃 (0.5ml/只只) 小鼠小鼠 称重称

9、重 眼眶取血眼眶取血 离心离心 解剖解剖 取肝脏取肝脏 取脾脏取脾脏 多聚多聚 -80 多聚多聚 -80 甲醛甲醛 冰箱冰箱 甲醛甲醛 冰箱冰箱 固定固定 保存保存 固定固定 保存保存 脱水透明脱水透明 脱水透明脱水透明 包埋切片包埋切片 保留待用保留待用 包埋切片包埋切片 保留待用保留待用 he染色染色 观察观察 he染色染色 观察观察 1.2.2 1.2.2 小小 鼠鼠 处处 理理 肝脏疾病是影响人类健康的最为常见的肝脏疾病是影响人类健康的最为常见的 疾病之一。各种有害因素导致的肝损伤主要疾病之一。各种有害因素导致的肝损伤主要 有病毒性肝炎，酒精性肝炎和药物性肝炎等有病毒性肝炎，酒精性肝炎

10、和药物性肝炎等 类型，其临床表现为肝坏死，脂肪肝，胆汁类型，其临床表现为肝坏死，脂肪肝，胆汁 淤积、肝纤维化，肝硬化和肝癌等。目前，淤积、肝纤维化，肝硬化和肝癌等。目前， 对肝损伤的治疗仍是一个全球性的严峻课题。对肝损伤的治疗仍是一个全球性的严峻课题。 ccl4肝损伤模型一直是筛选具有保肝降酶肝损伤模型一直是筛选具有保肝降酶 作用药物的常用模型之一。其致病机理如下：作用药物的常用模型之一。其致病机理如下： 讨讨 论论 损伤细胞膜结构和功能损伤细胞膜结构和功能 提高肝脏可溶性酶活性提高肝脏可溶性酶活性 肝脏毒物肝脏毒物 攻击肝细胞膜攻击肝细胞膜 ccl4 ccl3(活泼）活泼） 脂质过氧化脂质过

11、氧化 细胞膜损伤细胞膜损伤 坏死坏死 p450激活 激活 磷脂分子磷脂分子 ca2+ 激活肝细胞膜上磷酸化酶激活肝细胞膜上磷酸化酶 抑制内质抑制内质 网钙离子网钙离子 泵泵 与微粒体、脂质与微粒体、脂质 、蛋白质发生共、蛋白质发生共 价结合价结合 ccl4致肝损伤机理致肝损伤机理 在对肝脏发病机制的研究中发现：内毒素是在对肝脏发病机制的研究中发现：内毒素是 肝病发生、发展和恶化的最重要原因肝病发生、发展和恶化的最重要原因,可以直接或可以直接或 间接地造成肝脏的损害。有的学者认为内毒素是间接地造成肝脏的损害。有的学者认为内毒素是 各种原因肝损害的共同物质基础。因此各种原因肝损害的共同物质基础。因

12、此,许多研究许多研究 者试图通过某些改变或降低内毒素的方法来减轻者试图通过某些改变或降低内毒素的方法来减轻 肝损害。传统常用的药物治疗效果并不十分令人肝损害。传统常用的药物治疗效果并不十分令人 满意满意,近年有人提出用微生态疗法近年有人提出用微生态疗法,即补充益生菌即补充益生菌 或益生元制剂作为肝病的辅助治疗。益生菌是肠或益生元制剂作为肝病的辅助治疗。益生菌是肠 道原籍菌和常驻菌道原籍菌和常驻菌,而内毒素大多由革兰阴性菌即而内毒素大多由革兰阴性菌即 腐败菌或过路菌产生腐败菌或过路菌产生,补充原籍菌从而抑制腐败菌补充原籍菌从而抑制腐败菌 生长是降低内毒素的关键。生长是降低内毒素的关键。 少数优势

13、种群对整个少数优势种群对整个 肠道菌群落起决定性肠道菌群落起决定性 作用作用,补充优势菌即可补充优势菌即可 抵制劣势菌的生长抵制劣势菌的生长 补充的优势菌参与机体的防御屏补充的优势菌参与机体的防御屏 障障,其代谢产物乙酸、乳酸能阻止其代谢产物乙酸、乳酸能阻止 致病菌在肠内的定植致病菌在肠内的定植(化学屏障化学屏障); 定植于粘膜或皮肤细胞上皮之间定植于粘膜或皮肤细胞上皮之间 的正常菌群形成生物膜样结构的正常菌群形成生物膜样结构,影影 响过路菌或外袭菌的定植、占位响过路菌或外袭菌的定植、占位 生长和繁殖（生物屏障生长和繁殖（生物屏障) 免疫、营养及杀菌免疫、营养及杀菌 利用对人体无毒、无害、无利

14、用对人体无毒、无害、无 致病的耗氧性微生物致病的耗氧性微生物,使肠道使肠道 局部环境的氧分子浓度降低局部环境的氧分子浓度降低, 造成厌氧菌生长的微环境造成厌氧菌生长的微环境,促促 进常驻厌菌的生长进常驻厌菌的生长,最终恢复最终恢复 正常的微生态平正常的微生态平 衡。衡。 生态平衡理论生态平衡理论 生物拮抗理论生物拮抗理论 其其 他他 生物夺氧生物夺氧 作用机制作用机制 实实 验验 图图 片片 实验图片实验图片小鼠生活照小鼠生活照 实验照片实验照片灌胃灌胃 实验图片实验图片眼眶取血（杀鼠）眼眶取血（杀鼠） 实验图片实验图片组织脱水组织脱水 实验图片实验图片组织透明组织透明 实验图片实验图片包埋腊

15、块包埋腊块 参考文献：参考文献： 1 张平张平.内毒素与肝脏损害内毒素与肝脏损害j.国外医学临床生物化学于与检验分册国外医学临床生物化学于与检验分册,1990,11(1)13-16. 2 王跃王跃.双歧杆菌及其在体内的作用双歧杆菌及其在体内的作用j.国外医学临床生物化学与检验学分国外医学临床生物化学与检验学分 册册,1988,9(3):12-15. 3 康白康白.微生态学微生态学m.大连出版社大连出版社,1988. 4 刘丹卓，赵新广肝损伤的现代医学研究进展与展望刘丹卓，赵新广肝损伤的现代医学研究进展与展望2007，29（3）50-51 5 袁铁铮姚斌袁铁铮姚斌 分子水平上益生菌研究进展分子水

16、平上益生菌研究进展 2004,24(10) 30-33 6 孙延波孙延波,等等.双歧杆菌对门静脉血内毒素影响的初步研究双歧杆菌对门静脉血内毒素影响的初步研究j.中国微生态学杂中国微生态学杂 志志,1991,3(1):17-19. 7 蒋寒青蒋寒青,等等.双歧杆菌与乳杆菌对大鼠肠菌群失调的调整作用的初步研究双歧杆菌与乳杆菌对大鼠肠菌群失调的调整作用的初步研究j.中国微中国微 生态学杂志生态学杂志,1995,7(2):32-34. 8 nanji aa, khettry, u, sadrzadeh smh.proc soc exp biolmed.1994,205(3):243-247. 9华方德

17、华方德,等等.应用微生态制剂对肝硬化各型肝炎治疗效果的观察应用微生态制剂对肝硬化各型肝炎治疗效果的观察j.中国微生态学杂中国微生态学杂 志志,1990,2(1):28-30. 10 春梅春梅,等等.双歧杆菌制剂对肝硬化患者内毒素血征的治疗作用双歧杆菌制剂对肝硬化患者内毒素血征的治疗作用j.临床消化杂临床消化杂 志志,1994,6(1):4. 11王清图王清图,等等.双歧杆菌制剂对肝硬化病人血氨和内毒素的影响双歧杆菌制剂对肝硬化病人血氨和内毒素的影响j.中国微生态学杂中国微生态学杂 志志,1996,8(4):29-30. 12 王跃王跃.双歧杆菌及其在体内的作用双歧杆菌及其在体内的作用j.国外医

18、学临床生物化学与检验学分国外医学临床生物化学与检验学分 册册,1988,9(3):12-15. 13 卜淑蕊卜淑蕊,朱菊朱菊 益生菌制剂治疗内毒素肝损害研究进展益生菌制剂治疗内毒素肝损害研究进展 2001,18(5) 301-302 14 李明华，张大伟，楚杰，郝永任，王少杰李明华，张大伟，楚杰，郝永任，王少杰 益生菌的作用及其在食品中的应用益生菌的作用及其在食品中的应用 2006,8(8) 72-74 15 阂钟熳阂钟熳 牛天贵牛天贵 岳喜庆岳喜庆 益生菌的研究和发展趋势益生菌的研究和发展趋势2007,27(1) 5557 16 王军华，权春善范圣第益生素制剂菌种的选择研究及其进展王军华，权

19、春善范圣第益生素制剂菌种的选择研究及其进展j微生物学微生物学 杂志，杂志，2005，25(5)：9598 17 刘一尘，张谦何明清益生菌剂存在的问题及研究方向刘一尘，张谦何明清益生菌剂存在的问题及研究方向j饲料广角饲料广角2002，21：23 26 18 高山峨，张志强高山峨，张志强 研究和发展益生菌和益生元的前瞻研究和发展益生菌和益生元的前瞻 2006，8 85-88 19 邓娟红邓娟红 益生菌制剂作为药物的探讨益生菌制剂作为药物的探讨 2004，16（6）362-363 20 小儿内科小儿内科 2007，39(8)专辑摘编专辑摘编 肠道菌群与益生菌肠道菌群与益生菌 21 刁复强刁复强 牛胜

20、田牛胜田 发酵奶和益生菌的保健作用发酵奶和益生菌的保健作用 1999，26（1）39-41 22 齐艳萍，李和平齐艳萍，李和平 急性肝损伤动物模型制备的概述急性肝损伤动物模型制备的概述 2008，38（2）38-39 23 金伟华金伟华,王晓蕙王晓蕙,陈华陈华,谭永红谭永红 人体益生菌药物临床应用新进展人体益生菌药物临床应用新进展 2007，16（4）263-268 24 常玉英常玉英 欧阳钦欧阳钦 微生态失衡与炎症性肠病微生态失衡与炎症性肠病 2008，28（1） 34-36 25 王道坤王道坤 微生态制剂的特点及应用微生态制剂的特点及应用 2006 51-52 26 苏世彦苏世彦 益生菌是

21、否是人体所必需益生菌是否是人体所必需 145-147 27 陆扬姚文朱伟云陆扬姚文朱伟云 益生菌益生菌新型免疫调节剂新型免疫调节剂 2005，32（4）144-148 28 张灼阳，刘畅，郭晓奎张灼阳，刘畅，郭晓奎 益生菌的安全性益生菌的安全性 2008，48（2）257-261 29 胡学智胡学智 益生菌的免疫调节作用益生菌的免疫调节作用 2006 1-3 30 李妍李妍 益生菌的筛选及功能特性研究益生菌的筛选及功能特性研究 2006 31 余建新余建新 韩春茂韩春茂 益生菌的作用机制及临床应用前景益生菌的作用机制及临床应用前景 2002，14（6） 371-372 32 杨明杨明 韩真韩真

22、 益生茵对炎症性肠病的治疗作用和机制益生茵对炎症性肠病的治疗作用和机制2007，15(14) 1634163 33 张英春张英春 益生菌功能特性及共性的研究益生菌功能特性及共性的研究 34 陈有容陈有容 郑小平郑小平 益生菌的健康功效及其应用益生菌的健康功效及其应用 2001，10（3）269-276 35 孙冬岩孙冬岩 潘宝海潘宝海 益生菌和合生素的研究现状及进展益生菌和合生素的研究现状及进展 2007 64-66 36 宗莉宗莉,杨立明杨立明,张传卫张传卫,康玉茹康玉茹 益生菌及其细胞组分的免疫调节作用益生菌及其细胞组分的免疫调节作用 2006，26（2）92-95 37 于恒超于恒超,杨

23、晓亮杨晓亮,刘芳娥刘芳娥,刘利兵刘利兵 半枝莲提取物对半枝莲提取物对ccl_4致小鼠肝损伤的保护作用致小鼠肝损伤的保护作用2005; 26(10) 892-893 38 陈冠敏陈冠敏,黄宗锈黄宗锈,郑丽红郑丽红,黄佳宁黄佳宁,林蔚林蔚 不同浓度四氯化碳急性染毒致小鼠肝损伤的实验研究不同浓度四氯化碳急性染毒致小鼠肝损伤的实验研究2006； 12（3） 18-20 39 39 马永贵马永贵, ,罗桂花罗桂花, ,陈志陈志, ,杨海莲杨海莲 常用小鼠四氯化碳急性肝损伤模型稳定性初探常用小鼠四氯化碳急性肝损伤模型稳定性初探 20062006；01 01 88-9188-91 40 40 王震侠王震侠,

24、 ,张瑞明张瑞明 单乙基甘氨酰二甲苯胺用于检测肝脏储备功能单乙基甘氨酰二甲苯胺用于检测肝脏储备功能20042004；2 2（1616） 153-154153-154 41 41 卢林耿，王中民，张永祥，朱金胜，尤银珍卢林耿，王中民，张永祥，朱金胜，尤银珍 对四氯化碳所致大鼠肝脏损伤机制的研究对四氯化碳所致大鼠肝脏损伤机制的研究 19961996；6 6（2 2） 24-224-2 42 42 王震侠王震侠, ,张瑞明张瑞明, ,欧阳晓晖欧阳晓晖, ,蔡继峰蔡继峰 大鼠肝脏缺血不同时间再灌注时肝细胞凋亡的动态变大鼠肝脏缺血不同时间再灌注时肝细胞凋亡的动态变 化及凋亡相关基因化及凋亡相关基因bcl

25、_2bcl_2的表达的表达 20042004；4 4（1616）250-252250-252 43 43 魏来魏来, ,赵春景赵春景 番茄红素对急性肝损伤模型大鼠的保护作用番茄红素对急性肝损伤模型大鼠的保护作用 2007 182007 18（4 4）258-260258-260 44 44 黄佳宁黄佳宁 黄宗锈黄宗锈 陈冠敏陈冠敏 林林 健健 肝舒胶囊对四氯化碳致小鼠肝损伤的保护作用研究肝舒胶囊对四氯化碳致小鼠肝损伤的保护作用研究 2006 2006 2424（5 5）121-123121-123 45 45 黄志强黄志强. .肝脏外科学肝脏外科学m.m.北京北京: :人民军医出版社人民军医出

26、版社,1996.85.,1996.85. 46 46 董家鸿董家鸿. .肝外科治疗的现状肝外科治疗的现状j.j.中华创伤杂志中华创伤杂志,2000,16(2):71,2000,16(2):71 47 47 张兴聘张兴聘, ,朱建东朱建东 肝损伤肝损伤2828例诊断与治疗例诊断与治疗 2006 182006 18（2 2） 39-4039-40 48 48 舒志俊舒志俊, ,等等. .肝炎肝炎号对四氯化碳所致大白鼠肝脏损号对四氯化碳所致大白鼠肝脏损 伤修复作用的形态学研究伤修复作用的形态学研究. .中西医结合杂志中西医结合杂志,1988;8(7):416,1988;8(7):416 48 48

27、石爱荣石爱荣, ,等等. .四氯化碳引起肝硬化过程中肝组织的细胞学和组织学变化四氯化碳引起肝硬化过程中肝组织的细胞学和组织学变化. .解剖学解剖学 报报,1963;9:1,1963;9:1 49 49 边纶沈新生王燕蓉郭凤英张焱边纶沈新生王燕蓉郭凤英张焱 枸杞多糖对四氯化碳所致小鼠肝损伤修复枸杞多糖对四氯化碳所致小鼠肝损伤修复 作用的形态学研究作用的形态学研究 1996 181996 18（4 4） 196-198196-198 50 50 金政王启伟金美善李相伍金政王启伟金美善李相伍 蓝靛果对四氯化碳所致小鼠肝损伤修复作用的形态蓝靛果对四氯化碳所致小鼠肝损伤修复作用的形态 学研究学研究 20

28、02 9(1) 462002 9(1) 46 51 51 王震侠王震侠 张瑞明张瑞明 严律南严律南 王文涛王文涛 贾乾斌贾乾斌 里多卡因代谢试验在肝损害大鼠肝储备功能评里多卡因代谢试验在肝损害大鼠肝储备功能评 估中的应用估中的应用 2006 142006 14（6 6） 445-448445-448 52 52 赵德玉赵德玉 浅析中草药所致肝损害浅析中草药所致肝损害 2007 342007 34（1 1）87-8887-88 53 53 刘平刘平, ,唐志鹏唐志鹏, ,徐列明徐列明. .中草药及生物碱引起的肝损害药物与中毒性肝病中草药及生物碱引起的肝损害药物与中毒性肝病m.m.上海上海: :上

29、海科上海科 学技术出版社学技术出版社, 2002: 500-503, 2002: 500-503 54 54 周华坚周华坚, ,李韶光李韶光. .药物性肝损害药物性肝损害103103例临床分析例临床分析j.j.中国临床药学杂志中国临床药学杂志, 2001, 10(5): , 2001, 10(5): 291291 55 55 廖莉琴廖莉琴. .试析中药所致药物性肝损害试析中药所致药物性肝损害j.j.中西医结合肝病杂志中西医结合肝病杂志,2001, 11(1): 60,2001, 11(1): 60 56 周世明周世明,贾杰贾杰.中草药致药物性肝病中草药致药物性肝病96例临床分析例临床分析j.中

30、国热带医学中国热带医学, 2004, 4(5): 765 57 lewis jh. drug- induced liver disease j.med clin north am,2000, 84: 1275 58 徐列明徐列明.对中草药引起肝损害的认识及防治对中草药引起肝损害的认识及防治j.现代医药卫生现代医药卫生,2005, 23(4): 378 59 周世明周世明,贾杰贾杰.中草药致药物性肝病中草药致药物性肝病96例临床分析例临床分析j.中国热带医学中国热带医学, 2004, 4(5): 765 60 张赣生张赣生,郑松柏郑松柏,项丹妮项丹妮,等等.老年人药物性肝损害老年人药物性肝损害88例临床分析例临床分析j.老年医学与保健老年医学与保健,