双向电泳技术在蛋白质组学研究中的应用(1)

1、LOGO 双向电泳技术双向电泳技术 在蛋白质组学研究中的应用在蛋白质组学研究中的应用 整理ppt 2 Outline v1 蛋白质组学简介蛋白质组学简介 v2 双向电泳原理和技术流程双向电泳原理和技术流程 v3 双向电泳技术的衍生双向电泳技术的衍生 v4 双向电泳技术的应用双向电泳技术的应用 整理ppt 3 人类基因组计划人类基因组计划 曼哈顿原子弹计划曼哈顿原子弹计划 阿波罗登月计划阿波罗登月计划 20世纪人类自然科学史上的三个伟世纪人类自然科学史上的三个伟 大计划大计划 整理ppt 4 v人类基因组测序，植物、动物、微生物等物种人类基因组测序，植物、动物、微生物等物种 的测序并没有带来一劳

2、永逸的健康，粮食、卫的测序并没有带来一劳永逸的健康，粮食、卫 生等存在问题生等存在问题 v蛋白质是生命现象的体现者蛋白质是生命现象的体现者 Protein DNARNA 整理ppt 5 蛋白质组学的来源蛋白质组学的来源 v1994年澳大利亚的两位学者Wilkins和 Williams首先提出了蛋白质组(proteome) 的概念： v基因组所表达的全部蛋白质全部蛋白质，是细胞或组 织或机体在特定时间和空间上表达的所有 蛋白质 整理ppt 6 蛋白质组学的技术流程蛋白质组学的技术流程 v1 样品制备样品制备（最关键关键）：显微切割， 细胞培养，超声破碎，裂解程序 v2 蛋白分离蛋白分离：双向电泳

3、（2-D），液相 色谱等 v3 蛋白质鉴定蛋白质鉴定：质谱技术 整理ppt 7 双向电泳双向电泳 质谱质谱 LC-MS-MS 整理ppt 8 双向电泳技术双向电泳技术 v1975年意大利生化学家OFarrel等于发明 了双向电泳技术 v该技术一度成为蛋白质组学研究的一把利 器，经典的蛋白质组学研究技术之一。 整理ppt 9 双向电泳基本原理双向电泳基本原理 v根据蛋白质等电点等电点与分子量分子量的不同，在 横向与纵向对蛋白进行分离 v首先，一向电泳时由于蛋白质的等电点 不同，蛋白质运动到胶条不同的位置 v然后，二向电泳时位于胶条上蛋白又由 于分子量的不同被分离，最终在一张 PAGE胶上显示出来

4、蛋白点 v这些蛋白点代表了不同的等电点和分子 量，最后通过质谱技术鉴定蛋白 整理ppt 10 双向电泳技术流程（全）双向电泳技术流程（全） 样品制备样品制备 一向电泳一向电泳 平衡平衡 二向电泳二向电泳 染色染色 扫描扫描 分析分析 挖点，质谱挖点，质谱 整理ppt 11 双向电泳技术流程双向电泳技术流程 v样品制备方法：样品制备方法： v 研磨研磨 v 冻融冻融 v 超声破碎超声破碎 v 离心离心 v原则：蛋白质可溶，不含原则：蛋白质可溶，不含DNA、不含、不含 金属离子、不含脂类等金属离子、不含脂类等 整理ppt 12 整理ppt 13 整理ppt 14 整理ppt 15 挖点，挖点， 质谱测序质谱测序 整理ppt 16 双向电泳的技术的衍生双向电泳的技术的衍生 v差异蛋白质组学差异蛋白质组学 v免疫蛋白质组学（筛选免疫原性蛋白等）免疫蛋白质组学（筛选免疫原性蛋白等） v亚细胞蛋白质组学（线粒体，溶酶体，亚细胞蛋白质组学（线粒体，溶酶体， 外膜蛋白等）外膜蛋白等） v定量蛋白质组学（定量蛋白质组学（DIGE） 整理ppt 17 双向电泳技术的应用双向电泳技术的应用 v疾病蛋白质组学（健康组，疾病组，用疾病蛋白质组学（健康组，疾病组，用 药组）药组） v研究对象：含蛋白，毛发、骨髓，组织、研