D-D二聚体测定标准操作程序

1、文件编号制定日期文件版次正文页数附件份数第一版5D-二聚体测定作业指导书修订记录修订日期版次页次修订内容第一版全部发行章批准审核编制制定部门检验科文件持有部门：检验科临检室D-二聚体测定（分析仪器法）1 实验原理：免疫比浊法当混合标本中含有D-二聚体时，聚苯乙烯颗粒包被到单克隆抗体（DD5），与交联纤维蛋白降解产物（D-二聚体）的交联区域结合。交联区域呈立体结构，有两个单克隆抗体表位。总之，一个单克隆抗体就能触发凝集反应，随后检测浊度的增加。仪器在575nm处通过对浊度改变的监测，将吸光度转换成浓度值，由此获得样本中D-二聚体的量。2 标本采集2.1 早晨空腹采血(空腹12小时左右),静脉采血

2、。2.2 3.8(w/v)枸椽酸钠0.2ml+静脉血1.8ml,混匀。3 标本存放1小时内(3000r/min15min)分离血浆,室温放置不超过2小时,28保存不超过4小时，长时间保存需在冰冻条件下，（-70不超过6个月）,只能冻融1次，在37迅速解冻，以减低凝血因子的消耗，解冻后立即测试。4 标本运输：低温条件下运输。5 标本拒收的标准:抗凝剂不符合,采血量不准确,凝固,溶血,脂血标本不能作测定。6. 实验材料:6.1 德国Dade Behring Marburg 公司D-Dimer PLUS乳胶试剂, 用4mlD-二聚体PLUS复溶液溶解一瓶D二聚体PLUS试剂，室温（1525）放置约5

3、分钟，并不时混匀。将试剂放于仪器相应的试剂位置上。未开封试剂28贮存到说明书上有效期，复溶试剂28保存不超过2天，室温保存不超过5天。6.2 D-Dimer PLUS加速剂：用5ml蒸馏水溶解，室温（1525）放置约15分钟，并不时混匀。将试剂放于仪器相应的试剂位置上。使用前，轻轻振荡试剂。未开封试剂28贮存到说明书上有效期，复溶试剂28保存不超过5天。6.3 D-Dimer PLUS复溶液：液体。用于溶解D-二聚体PLUS 乳胶试剂。未开封试剂28贮存到说明书上有效期，开瓶后试剂28保存不超过12周。6.4 Dade D-二聚体质控血浆I/II.用蒸镏水1ml溶解后放置30分钟,才能使用或分

4、装。复溶后,室温保存2小时,284小时。7. 仪器设备:7.1 仪器名称: Sysmex CA-1500全自动血液凝固分析仪7.2 仪器厂家:日本Sysmex公司7.3 仪器型号:Sysmex CA-15007.4 仪器技术参数:7.4.1 速度: 最快检测速度180测试/小时,组合检测约140测试/小时7.4.2 试剂位:36个,具冷藏功能。7.4.3 样本位:50个,可自动连续添加。7.5 仪器校准程序:7.5.1 校准频率:当方法改变,试剂厂家或试剂批号改变,仪器维修影响测定结果等情况时,必须进行校准。7.5.2 校准操作:设置标准曲线分析(由仪器提供商指定工程师执行)8. 操作步骤:8

5、.1 检查前准备:8.1.1 清空废液瓶,清空反应杯抛弃槽。8.1.2 添加足够反应杯(不能超过警告线)。8.1.3 添加清洁液试剂,清洗用蒸馏水等。8.2 开机先开打印机再开主机,开机后仪器自检,约15分钟,屏幕上方“Not Ready”变为“Ready”,表示仪器预热完成,进入系统准备工作状态,可进行测定。8.3 输入工作清单:从主菜单选Work List出现第一架样本工作清单输入画面,选ID No Entry输入第一个样本号按相应实验项目名称键D-D,并同时输入此标本的其他测试项目,若选“凝血四项（PT、APTT、Fbg、TT）”，可按Profile #1组合选项选择，选中项目相应位置标

6、记为“”，选完项目后按ENTER确认，要删除某项目时只需按该项目（按键如PT变为PT-）即可，用键，同样输入其他标本编号项目。（快速输入可用Repeat键，输入重复标本数，复制同样项目的输入。8.4 放置样本按8.3所设好的工作清单顺序将离心分离好的样本放置于样本架上,并按顺序把样本架排列于Sampler进样器右边位置(最多同时放5架共50个样本)8.5 按Start键开始测定.盖好遮光盖,确认仪器为准备状态(显示屏正上方显示“Ready”)按Start键,进样开始,测定进行,仪器显示为“Analying”(被选择项目背景变为“”，此时可重复8.3,8.4,继续输入其他架样本工作清单,按Rig

7、ester,继续确认测试任务,添加样本架继续测试,测定完成,测定项目背景变为“”，打印机打印出测定结果，所有测定清单完成，系统恢复“Ready”状态。8.6 每日维护:（完成每日的测定后,关机前维护。）8.6.1 冲冼针Rinse Probe8.6.2 清空废液瓶,和已使用过的反应杯。8.6.3 将试剂架连用试剂放入冰箱。8.7 关机:先关主机,再关打印机。9检验结果的判断与分析:9.1 仪器测定D-Dimer的线性范围在40-2000ug/L,测定完成后仪器显示D-D含量等参数。若不能对参数进行正确计算,将出现下列信息:.出现错误,不能得到分析数据.不能计算参数.数值超出线性范围.9.2 仪

8、器设定D-D参考范围在40-2000ug/L,如果得不到一个正常数值,在数据的左侧将出现下列标记: 出现错误信息 数据高于可报告的高限10. 质量控制:每批样本同时测定两个浓度水平(高值和正常值)的质控品,以2S为警告限,3S为失控限,绘制质控图,判断是否在控。质控规则详见室内质控作业指导书。11 临床意义：检测D二聚体交联降解产物，即可反映纤溶作用。11.1参考范围： 500ug/L11.2 D二聚体浓度增加见于各种局灶性、弥漫性、年龄性的血栓性疾病。因此，D二聚体浓度基础值超出健康人群的范围，不能排除血栓性疾病。D二聚体检测结果应结合其他实验室检查结果和临床数据。D二聚体升高提示出现凝块，

9、报告有深静脉血栓，肺栓塞和弥漫性血管内凝血。11.3若D二聚体结果低于决定水平，可以用阴性预示值排除血栓可能。12 变异的潜在来源12.1 抗凝剂：草酸盐、EDTA、肝素不适用于PT检查12.2 标本采集处理不当,如血与抗凝剂未充分混匀，出现凝块，混匀时过分用力，使标本溶血，造成结果变异。12.3 纤溶药物的影响，如双香豆素、链激酶、尿酶等。12.4 超剂量使用肝素使凝固时间延长。12.5 FDP增加使凝固时间延长。12.6 某些药物，如口服避孕药、雌激素、无门冬跣胺酶、钠络酮等影响测试结果。13. 操作注意事项:（干粉试剂及质控血浆溶解）13.1 确认溶剂类型，一般溶解液包括：蒸馏水、生理盐

10、水、缓冲液、厂家特定溶解液，必须按说明书要求使用。13.2 溶解时，轻轻转动容器，保证干粉完全溶解，避免剧烈振荡。13.3 复溶后，室温放置15-30分钟方可使用。14. 仪器维护与保养14.1 日常维护（见8.6）14.2 每周维护14.2.1 液路冲洗：仪器在“Ready”状态下，从主菜单按 Special Menu按Maintain按RinsePrepare 按 Execute 键运行此程序完成后按 Return 返回。14.2.2 清洁仪器：定期用擦布擦干净仪器内外，包括试剂槽。14.3 需要时维护：14.3.1 调整压力：仪器在“Ready”状态下，以主菜单按Special Menu按Maintain 按Pressure Adjust 键，显示压力是否在其调整范围内？若不在，则打开仪器右侧相应压力调整旋钮，旋动调整好压力，再锁紧旋钮。14.3.2 更换灯泡：关机从仪器右侧取下灯泡外盖及内盖换上好的灯泡装上内外盖从主菜单按Special Menu再按Maintain按 Calib lamp确认关上遮光盖，按Execute运行调整程序。14.3.3 更换保险管：关机从仪器左侧旋下保险盖更换上好的保险管装上保险管盖。15. 参考文献15.1 叶应妩.王毓三等全国临床检验操作规程第三版，东南大学出版社.15.2 S