人教版高中生物课件选修一微生物的实验室培养公开课

1、专题,2,微生物的培养与应用,病毒,细菌,微生物包括五类,病毒界,原核生物界,放线菌,真菌,原生动物,真菌界,原生生物界,特点：结构都相当简单,个体多数十分微小,通常要用,光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有,细胞结构,且体内一般不含有叶绿素,不能进行光合作,用,微生物包括细菌、病毒、霉菌、酵母菌等,病毒,virus,是由一个核酸分子,DNA,或,RNA,与蛋白质构成的非细胞,形态的营寄生生活的生命体,SARS,病毒,禽流感病毒,细菌,bacteria,单细胞不分枝的原核微生物,细菌细胞微小而透明，通常用适当染料染色后显微镜,观察,细菌的外形与大小,葡萄球菌,图,1-1,大肠杆菌,常见

2、的三种细菌典型形态,霍乱弧菌,放线菌,Actinomycete,结构,单细胞原核,分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝,应用,链霉素、土霉素、四环素,氯霉素、红霉素、庆大霉素,微生物中发现了几千种抗生素,其中,2/3,是由放线菌产生的,真菌,Fungus,是一种真核生物,通常又分为三类，即酵母菌、霉菌,和蕈菌（大型真菌,原生动物,protozoan,是动物界中最低等的一类真核单细胞动物，个体由单个细胞组成,大变形虫,草履虫,想一想,在制作果酒、果醋、腐乳等时可用优良菌,种直接接种，以提高产品的质量，那么，这些,肉眼看不到的微生物是怎样获得呢,一、基础知识,一）培养基,培养基是人们按照微生物对营养物

3、质的不,同需求，配置的供其生长繁殖的营养基质,1,培养基的类型和用途,液体培养基,据物理性质分,半固体培养基,固体培养基,天然培养基,据化学成分分,合成培养基,选择培养基,据用途分,鉴别培养基,培养基的种类,常用于工业生产,液体培养基,常用于观察微生物的运动,鉴定菌种,用于微生物的分离、计,数,据物理性质分,半固体培养基,常用于分类、鉴定,在培养基中加入某种化学物质，以抑制不,常用于工业生产,需要的微生物的生长，促进所需要的微生,天然培养基,物的生长。例如，在培养基中加入青霉素,以抑制细菌、放线菌的生长，从而分离到,据化学成分分,合成培养基,酵母菌和霉菌。又如，在培养基中加入高,浓度的食盐可以

4、抑制多种细菌的生长，但,根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种,不影响金黄色葡萄球菌的生长,选择培养基,指示剂或化学药品配制而成，用以鉴别不同种,类的微生物。例如，在培养基中加入伊红和美,据用途分,蓝，可以用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在,鉴别培养基,大肠杆菌等细菌：如果有大肠杆菌，其代谢产,物就与伊红和美蓝结合，使菌落呈深紫色，并,带有金属光泽,固体培养基,液体培养基,表面生长,均匀混浊生长,沉淀生长,固体培养基：菌落，菌苔,菌落,单个或少数细菌在固体培养,基上大量繁殖时，就会形成,一个肉眼可见的，具有一定,形态结构的子细胞群体，叫,做菌落,不同的细菌的菌落特征不同,菌落是鉴定菌种的重要依

5、据,返回,2,不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方,参考教材,附录内容,P85,3,培养基的营养构成,注意,不管哪种培养基，一般都含有水、碳源,和氮源、无机盐等营养物质，另外还需要满,足微生物生长对,pH,特殊营养物质例如,生,长因子,即细菌生长必需，而自身不能合成,的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤,嘧啶,以及氧气等的要求,1,碳源,可作为碳源的物质有,碳酸盐,碳酸氢盐,二氧化碳等,含碳无机物,含碳有机物,糖类（主要,蛋白质,脂肪酸,不同微生物所利用的碳源不同,异养型微生物的碳源为,含碳有机物（有机碳,自养型微生物的碳源为,含碳无机物（无机碳,2,氮源,可作为氮源的物质有,硝酸盐,含氮

6、无机物,氮气,氨气,氨盐,含氮有机物,蛋白胨,牛肉膏,尿素,固氮微生物所利用的氮源是,氮气,二）、无菌技术,1,什么是无菌技术,所有防止杂菌污染的方法,无菌技术泛指在培养微生物的操作中,注意事项,对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清,洁和消毒,将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等,进行灭菌,为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在,酒精灯火焰附近进行,实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周,围的物品相接触,2,消毒与灭菌的概念及两者的区别,消毒定义,指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部,一部分对人体有害的微生物。（不包括芽孢和孢子,2,灭菌的定义,使用强烈的理化

7、因素杀死物体内外所有的微生物,包括芽孢和孢子，而达到完全无菌之过程,灭菌消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最,重要的技术,无菌技术除了用来防止实验室的培养物被,其他外来微生物污染外，还有什么目的,答：无菌技术还能有效避免操作,者自身被微生物感染,思考题,请你判断以下材料或用具是否需要消,毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法,1,培养细菌用的培养基与培养皿,2,玻棒、试管、烧瓶和吸管,3,实验操作者的双手,答：,1,2,需要灭菌；,3,需要消毒,3,常用的消毒与灭菌的方法,1,消毒的方法,1,煮沸消毒法:100煮沸,5-6min,2,巴氏消毒法,70,75 下煮,30min,或,80 下煮,1

8、5min,3,化学药剂消毒法,用,75,酒精等进行,皮肤消毒,氯气消毒水源,4,紫外线消毒,2,灭菌的方法,1,灼烧灭菌,接种环、接种针、试管口,2,干热灭菌,160-170,下加热,1-2h,3,高压蒸气灭菌,100kPa,121 下维持,15-30min,4,微生物实验室培养的基本操作程序,器具的灭菌,培养基的配制,培养基的灭菌,倒平板,微生物接种,恒温箱中培养,菌种的保存,1,2,3,4,5,6,7,二、实验操作,本实验采用牛肉膏蛋白胨固体培养基进行大肠杆,菌的纯化培养，实验过程分为两个阶段,1,制备培养基,2,纯化大肠杆菌,大肠杆菌,1,制备培养基,1,计算,根据下列培养基配方比例，计

9、算配置,100mL,培养基时，各成分的用量,牛肉膏蛋白胨固体培养基配方,牛肉膏,5.0g,蛋白胨,10.0g,NaCl,5.0g,琼脂,20.0g,将上述物质溶解后，用蒸馏水定容至,1000mL,2,称量,注意,牛肉膏和蛋白胨都容易吸潮，称取时,动作要迅速，称后要及时盖上瓶盖,3,溶化,4,灭菌,在压力为,100kPa,温度为,121,条,件下，灭菌,15-30min,5,倒平板,讨论,1,培养基灭菌后，需要冷却到,50,左,右时，才能用来倒平板。你用什么办法来,估计培养基的温度,答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶,感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就,可以进行倒平板了,2,为什么需要使锥形

10、瓶的瓶口通过火焰,答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生,物污染培养基,3,平板冷凝后，为什么要将平板倒置,答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固,后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置,既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以,防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染,4,在倒平板的过程中，如果不小心将培,养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板,还能用来培养微生物吗？为什么,答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底,之间的培养基上滋生，因此最好不要用这,个平板培养微生物,2,纯化大肠杆菌,P18,1,平板划线法,平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表,面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到,培养

11、基的表面。在数次划线后培养，可以分离到有,一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,不同的平板划线法,培,养,基,表,面,的,单,菌,落,议一议,1,为什么在操作的第一步以及每次划线,之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗？为什么,答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上,可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环,是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使,下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的,末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的,数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环,能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和,感染

12、操作者,2,在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却,后再进行划线,答：以免接种环温度太高，杀死菌种,3,在作第二次以及其后的划线操作时，为什,么总是从上一次划线的末端开始划线,答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起,始处要少，每次从上一次划线的末端开始,能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步,减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌,落,2,稀释涂布法,P19,稀释涂布法是将菌液进行一系列梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培,养基的表面，进行培养,讨论,涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行,结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想,一想，第,2,步应如何进行无菌操作,答：应从操作的各

13、个细节保证“无菌”。例如,酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何,其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等,微生物的恒温培养,1,临时保藏法,菌种的保存,2,甘油管藏法,对象,温度,频繁使用的菌种,4（冰箱,缺点,容易被污染或,产生变异,对象,长期保存的菌种,温度,20（冷冻箱,课堂小结,人们按照微生物对营养物质的,定义,不同需求，配置出供其生长繁,培养基,殖的营养物质,基础,固体培养基,液体培养基,分类,微,知识,定义,培养微生物的操作中，所有防,生,止杂菌污染的方法,无菌技术,物,消毒与灭菌,的,常用灭菌方法,培,制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,养,实验操作,纯化大肠杆菌,结果分析与评价,练

14、习,1,多项选择,1,下列细菌中，能利用含碳无机物作碳源的是,A.C,A,光合细菌,B,根瘤菌,C,硝化细菌,D,乳酸菌,2,培养大肠杆菌的培养基中，必需含有的碳源和氮,源是,A.C,A,糖、有机酸等,B,二氧化碳、碳酸盐,C,蛋白质,D,无机氮化物,3,下列叙述不正确的是,B.C,A,培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质,B,液体培养基和固体培养基所含的最基本物质不相同,C,微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见,的单个细菌,思考,1,无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微,生物污染外，还有什么目的,无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染,2,消毒和灭菌有何不同,灭菌,

15、条件,强烈,作用,物体表面或内部一部,物体内外所有微生物,范围,分,不包括芽孢和孢子,包括芽孢和孢子,3,为什么消毒牛奶要用巴氏消毒法,营养成分不被破坏,4,请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果,需要，请选择合适的方法,培养细菌用的培养基与培养皿,灭菌,玻棒、试管、烧瓶和吸管,灭菌,实验操作者的双手,消毒,消毒,温和,思考,1,溶化时为什么要将牛肉膏连同称量纸一起加,热,可保证粘附在称量纸上的牛肉膏也能,答,溶于水中,减少误差,加琼脂的目的是什么,答,作为凝固剂,思考,2,在灭菌前,用牛皮纸、旧报纸包紧盛有,培养基的锥形瓶的目的是什么,答,在灭菌时能避免水蒸汽凝结时浸湿棉塞,在,取出

16、培养基锥形瓶时也起到隔绝空气中,杂菌污染的作用,培养皿能否用高压蒸汽灭菌,答,不能,因为培养皿要保持干燥,应该用干热灭菌,练习,2,1,获得纯净培养物的关键是,D,A,将用于微生物培养的器皿,接种用具和培养基等器,具进行灭菌,B,接种纯种细菌,C,适宜环境条件下培养,D,防止外来杂菌的入侵,2,下列操作与无菌技术无关的是,C,A,接种前用肥皂洗双手,再用酒精擦拭双手,B,接种前用火焰烧灼接种针,C,培养在,50,左右时搁置斜面,D,在酒精灯的火焰旁完成,3,外科手术器械和罐头食品的处理,要以能够杀死什,么为标准,D,A,球菌,B,杆菌,C,螺旋菌,D,芽孢,4,某学校打算开辟一块食用菌栽培基地,以丰富学生,的劳动技术课内容,首先对食用菌实验室进行清扫和,消毒处理,准备食用菌栽培所需的各种原料和用具,然,后从菌种站购来各种食用菌菌种,请回答以下问题,1,对买回来的菌进行扩大培养,首先制备试管培,养基,写出制备固体牛肉膏蛋白胨培养基所需的,原料,牛肉膏、蛋白胨、水、无机盐、琼脂,其中,提供氮源的主要,是,蛋白胨,提供能源的主要物,质是,牛肉膏,琼脂的作用是,凝固剂,它不提供,营养,2,微生物在生长过程中对各种成分所需量不同,故制备培养基时各成分要有合适的,比例,在,烧杯加入琼脂后要不停