Sourthernblot和Northernblot原理(最新整理)

1、sourthern blot 和 northern blot 原理（一）southern blot原理：将待检测的 dna 分子用/不用限制性内切酶消化后，通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，继而将其变性并按其在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上，固定 后再与同位素或其它标记物标记的 dna 或 rna 探针进行反应。如果待检物中含有与探针互补的序列，则二者通过碱基互补的原理进行结合，游离探针洗涤后用自 显影或其它合适的技术进行检测，从而显示出待检的片段及其相对大小。用途：检测样品中的 dna 及其含量，了解基因的状态, 如是否有点突变、扩增重排等。dna = 琼脂糖电泳 = 印迹转移 = 预

2、杂交 = 杂交（变性探针） = 洗膜 =放射自显影或显色（二）northern blot原理：在变性条件下将待检的 rna 样品进行琼脂糖凝胶电泳，继而按照同southern blot 相同的原理进行转膜和用探针进行杂交检测。用途：检测样品中是否含有基因的转录产物（mrna）及其含量。mrna 提取 = 甲醛变性电泳 = 印迹转移 = 预杂交 = 杂交（变性探针） =洗膜 = 放射自显影或化学发光（三）二者异同southern blot 是分析 dna 的杂交技术，northern blot 是分析 rna 的，而western blot 是分析蛋白质的southern 和 northerin

3、 原理基本相同，都是利用 dna 或 rna 的复性过程，但过程上也有区别，主要是southern 是先电泳后变性，而 northern 是先变性后电泳；southern 是碱变性，而 northern 采用甲醛、乙二醛、二甲基亚砜等变性，因为采用碱变性会导致 rna 水解（四）探针标记技术1 标记物：放射性和非放射性两种放射性：非放射性：生物素、地高辛素、荧光素2、标记方法（1） 切口平移法（2） 随机引物法（3） 末端标记法（4） 单链 dna 探针标记（5） 寡核苷酸探针标记法“”“”at the end, xiao bian gives you a passage. minand on

4、ce said, people who learn to learn are very happy people. in every wonderful life, learning is an eternal theme. as a professional clerical and teaching position, i understand the importance of continuous learning, life is diligent, nothing can be gained, only continuous learning can achieve better self. only by constantly learning and mastering the latest relevant knowledge, can employees from all walks of life keep up with the pace of enterprise development and innovate to meet the needs of the market. this document is also edited by my studio professionals, there m