




版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领
文档简介
1、2. 2.2动物细胞融合与单克隆抗体理一理过f仁不同的动物轴麗上竺杂左鈿胞 曲ait堀胞題的流动性 应用;主薑卅于制甜单龙黒抗体何用;作对诊断试剂闪于治疗疾病或运 戟對物制备】获敢c见疫的h淋巴细処列计越瘤 细胞一 融舍、踊选-杂交瘵细胞 劝物细胞培养一提礙箪葩降抗判一判1常用于诱导动物细胞融合的手段有: 聚乙二醇、灭活的病毒、 电激、紫外线照射。(X )2. 杂交瘤细胞进行体内培养,是为了获得能产生单克隆抗体 的胚胎。(X)3. 在动物细胞融合过程中,使用胰蛋白酶处理有利于杂交瘤 细胞的形成。(X )4. 将抗原注入小鼠体内,以获得相应的 B淋巴细胞。(“)5. 细胞融合技术突破了有性杂交方
2、法的局限,创造出了许多 动物、植物的新物种。(X)6. 筛选能产生特定抗体的杂交瘤细胞时,需要运用到抗原- 抗体杂交的方法。(V)7. 经选择性培养基筛选出来的杂交瘤细胞即可用于单克隆抗 体的生产。(X )8. 生物导弹是指将单克隆抗体与放射性同位素、化学药物或 细胞毒素相结合。悟一悟1动物细胞融合的过程包括细胞膜融合、细胞质融合和细胞核 融合。其中细胞膜融合是细胞融合的先导,细胞核融合是细胞融 合的实质。2. 融合处理后的细胞不可以直接用于培养,还需要筛选。因 为诱导融合的手段只是促使细胞间的融合,不能保证所有的细胞 都发生融合,形成的融合细胞也有多种,因此需要进行筛选。3. 细胞融合技术与
3、有性杂交不同。有性杂交有着十分严格的 时空关系和物种界限;动物细胞融合则不同,它通过人工的方法 克服了存在于物种之间的遗传屏障,从而能够按照人们的意愿, 把不同物种的不同组织类型的细胞融合在一起。4. 对动物进行免疫的原因:B淋巴细胞要经过免疫过程,即 接触抗原,增殖分化为有特异性免疫功能的 B淋巴细胞,才能产 生相应的抗体,所以,与骨髓瘤细胞融合的 B淋巴细胞实际上是 浆细胞。5. 融合过程中,有同种细胞间的融合和不同种细胞间的融合, 还有未融合的细胞。6. 杂交瘤细胞的特点:既能无限增殖,又能产生专一性抗体。7. 能产生特定抗体的杂交瘤细胞在小鼠腹腔内培养与体外培 养相比,优点是不需特定的
4、培养基,不需严格的外界环境条件。感悟体会:练一练1. 2019江苏卷(多选)如图为细胞融合的示意图,下列叙述正确的是()A .若a细胞和b细胞是植物细胞,需先去(脱)分化再诱导融 合B. a细胞和b细胞之间的融合需要促融处理后才能实现C. c细胞的形成与a、b细胞膜的流动性都有关D. c细胞将同时表达a细胞和b细胞中的所有基因解析:若a细胞和b细胞是植物细胞,应先用酶解法去掉它 们的细胞壁再诱导融合,A错误;无论是动物细胞还是植物细胞, 两个细胞的融合都需要促融处理后才能实现,B正确;两个细胞融合成一个细胞,利用了细胞膜的流动性,C正确;c细胞同时具备了 a细胞和b细胞中的所有基因,但是基因是
5、选择性表达的, 因此c细胞中基因不一定都能够表达,D错误。答案:BC2. 2019江苏卷(多选)下图为杂交瘤细胞制备示意图。骨髓 瘤细胞由于缺乏次黄嘌呤磷酸核糖转移酶 (HGPRTJ,在HAT筛选 培养液中不能正常合成 DNA,无法生长。下列叙述正确的是()A .可用灭活的仙台病毒诱导细胞融合B .两两融合的细胞都能在 HAT培养液中生长C.杂交瘤细胞需进一步筛选才能用于生产D .细胞膜的流动性是细胞融合的基础解析:诱导动物细胞融合的方法有电激、聚乙二醇、灭活的 病毒(如灭活的仙台病毒)等,A正确;两两融合的细胞包括免疫 B 细胞与免疫B细胞融合的具有同种核的细胞、骨髓瘤细胞与骨髓 瘤细胞融合
6、的具有同种核的细胞、免疫B细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交瘤细胞,骨髓瘤细胞虽然能无限增殖,但缺乏次黄嘌呤磷 酸核糖转移酶,免疫 B细胞虽然有次黄嘌呤磷酸核糖转移酶,但 不具有无限增殖的本领,所以在 HAT筛选培养液中,两两融合的 具有同种核的细胞都无法生长,只有杂交瘤细胞才能生长,B错误;因每个免疫B细胞只分泌一种特异性抗体,因此在HAT筛选培养液中筛选出来的众多的杂交瘤细胞所分泌的抗体,不一定都 是人类所需要的,还需要进一步把能分泌人类所需要抗体的杂交 瘤细胞筛选出来,C正确;动物细胞融合是以细胞膜的流动性为 基础的,D正确。答案:ACD3. 2019天津会考如图是抗HCG(人绒毛膜促性腺激素)
7、单克 隆抗体制备流程图,正确的是()A .过程中促融剂常用聚乙二醇,不可用灭活的病毒B .过程中筛选出的杂交瘤细胞都能产生抗HCG抗体C.过程中利用了 DNA分子杂交的原理D .过程中培养液中需要添加动物血清、抗生素等物质解析:过程促融剂常用灭活的病毒,也可用聚乙二醇,A错误;过程中筛选出杂交瘤细胞不一定能产生抗HCG抗体,还需通过抗体检测,B错误;过程中利用了抗原和抗体特异性结 合的原理,C错误;过程为动物细胞培养,培养液中需要添加 动物血清、抗生素等物质,D正确。答案:D考点一动物细胞融合1. 2019黄陵中学高新部高二期末动物细胞融合应用中最重要的是 ()A .克服远源杂交不亲和的障碍B
8、 .培养新物种C.制备单克隆抗体D .生产杂种细胞解析:动物细胞融合的结果是形成杂种细胞,其最重要的应 用是通过骨髓瘤细胞和浆细胞融合成的杂交瘤细胞生成单克隆抗 体。综上所述,A、B、D均不符合题意,C符合题意。答案:C2. 2019河北高二月考下列关于动物细胞融合技术的叙述,错误的是()A .动物细胞融合的原理是细胞膜的流动性B .诱导动植物细胞融合均可用灭活的病毒C.动物细胞融合完成的标志是细胞核的融合D .细胞融合技术使远缘杂交变为可能解析:动物细胞融合的原理是细胞膜具有一定的流动性,A正确;植物细胞融合不可以用灭活的病毒诱导,用灭活的病毒诱 导是动物细胞融合特有的方法,B错误;植物原生
9、质体融合完成的标志是再生形成新的细胞壁,动物细胞融合完成的标志是形成 融合细胞核,C正确;细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限, 使远缘杂交成为可能,D正确。答案:B3. 2019辽宁葫芦岛第一高级中学高二期中下列关于动物细胞融合的叙述中,不正确的是()A .融合时应先用果胶酶处理B .融合时需人工诱导C.融合时存在细胞核的融合D .动物细胞融合最主要的用途是制备单克隆抗体解析:获得的动物组织应用胰蛋白酶处理,使动物细胞分散 开,A项错误;融合时可用物理方法或化学方法进行诱导,B项正确;细胞融合时,先进行细胞膜的融合,然后发生细胞核的融 合,C项正确;动物细胞融合后的杂种细胞培养时难以分化,最
10、 主要的用途是制备单克隆抗体,D项正确。答案:A考点二单克隆抗体4. 2019陕西省黄陵县中学高二期中单克隆抗体是指()A .单个骨髓瘤细胞增殖产生的抗体B .单个抗体通过克隆化产生大量抗体C.单个杂交瘤细胞增殖产生的抗体D .单个B淋巴细胞增殖产生的抗体解析:骨髓瘤细胞不能产生抗体, 只有浆细胞能分泌抗体,A 错误;抗体是免疫球蛋白,不能克隆化,B错误;单克隆抗体是指由单个杂交瘤细胞增殖所产生的抗体,C正确;B淋巴细胞不能连续增殖,D错误。答案:C5. 2019河北高二期末杂交瘤细胞的特点是()A .具有两种生物的遗传信息B .能够无限增殖C.能够产生抗多种抗原的抗体D .特异性强、灵敏度高
11、解析:杂交瘤细胞具有两种细胞(B淋巴细胞和骨髓瘤细胞) 的遗传物质,A错误;杂交瘤细胞具有无限增殖的能力,B正确;杂交瘤细胞只能产生一种抗原的抗体,C错误;杂交瘤细胞产生的单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高的特点,D错误。答案:B6 . 2019河北高二期末下列不属于单克隆抗体应用的是( )A .作为诊断试剂B .用于治疗疾病C.作为基因探针 D .用于运载药物解析:利用同位素标记的单克隆抗体,定位诊断肿瘤、心血 管畸形等疾病,属于单克隆抗体在实践上的应用,A正确;单克隆抗体与抗癌药物结合形成的 “生物导弹”可以用于治疗癌症,B 正确;单克隆抗体的化学本质是蛋白质,而探针的化学本质是核 酸,C错
12、误;单克隆抗体与抗癌药物结合形成的“生物导弹”,用于病变细胞的定向治疗,借助单克隆抗体的定位导向作用将药 物定向带到癌细胞,在原位杀死癌细胞,D正确。答案:C7 . 2019陕西省黄陵县中学高二期中“生物导弹”是指( )A .单克隆抗体B .产生特定抗体的B淋巴细胞C.杂交瘤细胞D .在单克隆抗体上连接抗癌药物解析:生物导弹是指单克隆抗体上连接放射性同位素、化学 药物或细胞毒素,能够借助单克隆抗体的定位导向作用将药物定 向带到癌细胞,在原位杀死癌细胞,故选 D。答案:D8. 2019平潭县新世纪学校高二月考下图是单克隆抗体制备 的流程图,请根据图示回答下列问题:(1) 在制备单克隆抗体的过程中
13、,应用的动物细胞工程的技术(2) 特异性抗体获取的方法也可以采用向动物体内反复注射某种抗原,使动物产生抗体,然后从动物血清中分离所需抗体。与 这种方法制备的抗体相比,单克隆抗体具有、等优点。(3) 制备单克隆抗体过程有两次筛选,第一次筛选的目的是 , 第二次筛选的目的是杂交瘤细胞具备的特性是既能,又能解析:(1)在制备单克隆抗体的过程中,需要借助动物细胞培 养技术来培养免疫的 B淋巴细胞、骨髓瘤细胞和杂交瘤细胞,而 杂交瘤细胞的获得必需借助动物细胞融合技术。(2)与一般的血清抗体相比,单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高、可大量制备的 特点。(3)在制备单克隆抗体的过程中至少需要两次对细胞进行筛
14、选:第一次筛选的目的是在特定的选择性培养基上,筛选得到杂 交瘤细胞;由于筛选出的杂交瘤细胞有很多种,因此第二次筛选 的目的是从很多种杂交瘤细胞中,筛选出能够产生特异性抗体的 细胞群。(4)杂交瘤细胞具备的特性是既能无限增殖,又能分泌特 异性抗体。答案:(1)动物细胞培养动物细胞融合(2) 特异性强灵敏度高可大量制备(3) 筛选得到杂交瘤细胞(去掉未杂交的细胞以及自身融合的 细胞)筛选出能够产生特异性抗体的细胞群(4) 无限增殖 分泌特异性抗体基础达标一、选择题(每小题5分,共60分)1. 2019河北高二期末下列有关动植物细胞融合的说法,正 确的是()A .都可以用灭活的病毒促进细胞融合B .
15、细胞融合前都要先制备原生质体C.依据的原理都是细胞的全能性D .都能够使远缘杂交成为可能解析:不能用灭活的病毒促进植物细胞融合,A错误;植物细胞融合前需要先制备原生质体,而动物细胞不需要,B错误;动物细胞融合和植物细胞融合依据的原理都是细胞膜的流动性,C错误;动物细胞融合和植物细胞融合都能打破生殖隔离,使远缘 杂交成为可能,D正确。答案:D2. 2019福建高二期末下列关于动物细胞融合与单克隆抗体制备的叙述中,正确的是()A .动物细胞经PEG诱导融合后再通过培养能得到优良动物 个体B .动物细胞融合最重要的应用是制备“生物导弹”C.杂交瘤细胞实质上就是癌变的浆细胞D .单克隆抗体和传统方法生
16、产的抗体化学本质相同 解析:因为动物细胞的全能性受到限制,动物细胞融合形成 的杂种细胞不能培育成动物,故 A错误;单克隆抗体特异性强,灵敏度高,可大量制备,最广泛的用途是用作体外诊断试剂,故B错误;杂交瘤细胞是把骨髓瘤细胞和浆细胞融合成的,不是浆细 胞癌变的结果,故 C错误;单克隆抗体和传统方法生产的抗体化 学本质相同都是蛋白质,故 D正确。答案:D3. 2019辽宁鞍山一中高二期中下列对动物细胞融合技术及意义的叙述,不合理的是()A .动物细胞融合是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞 的过程B .通过克服远缘杂交不亲和现象来获得新物种C.杂交瘤技术是在细胞融合技术基础上发展起来的D .灭活
17、的病毒可以诱导细胞融合和病毒表面的糖蛋白有关 解析:动物细胞融合是指两个或多个动物细胞结合形成一个 细胞的过程,故 A正确;细胞融合技术还没有克服远缘杂交获得 新物种,故B错误;杂交瘤细胞就是将骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合形成的,所以杂交瘤技术是在细胞融合技术基础上发展起来 的,故C正确;灭活的病毒可以诱导细胞融合原理是:病毒表面 的糖蛋白与细胞膜上糖蛋白发生作用,使细胞融合,故D正确。答案:B4. 下列动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中,正确的是( )诱导融合的方法完全相同所用的技术手段不相同所采用的原理完全相同都能形成杂种细胞A . B .C. D .解析:动物细胞融合方法中除了物理法、化
18、学法外还可以采 用灭活的病毒的方法,故 错误;动物细胞的技术手段与植物技 术手段不同,故正确;培养植物体细胞杂交的原理是细胞膜的 流动性和植物细胞的全能性,而动物细胞融合的原理是细胞膜的 流动性,故 错误;动物细胞融合和植物体细胞杂交,都能形成 杂种细胞,故正确。答案:C5. 2019广东佛山一中高二期中科学家用小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合,得到杂交细胞,经培养可产生大量的单克隆抗 体,所用的B淋巴细胞是来自()A .骨髓的B淋巴细胞B .脾脏的能产生抗体的 B淋巴细胞C.胸腺的B淋巴细胞D .骨髓中能产生多种抗体的 B淋巴细胞解析:杂交瘤细胞集合了两个细胞的优点,即具备骨髓瘤细 胞的无限增
19、殖的特点和 B淋巴细胞的产生特异性抗体的特点。B淋巴细胞的获取途径是:通过对小鼠注射特定的抗原蛋白,然后 从小鼠的脾脏中筛选获得能产生单一抗体的B淋巴细胞,故选B。答案:B6. 2019河南高二月考单克隆抗体制备过程中,骨髓瘤细胞 和B淋巴细胞融合后,要用特定的培养基筛选出杂交瘤细胞,在)B淋巴细胞自身融合这种培养基上不能存活增殖的细胞是 (B淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞细胞 小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞杂交瘤细胞A . B .C. D .解析:特定培养基培养细胞的目的是筛选出既能大量增殖、 又能产生特异性抗体的杂交瘤细胞,因此其他的细胞都不能在此 培养基上生存。在这种培养基上只有杂交瘤细胞能在上面
20、存活、 增殖。答案:A7. 2019浙江温州中学高二期中下列有关杂交瘤细胞体外培 养的叙述,正确的是()A .用固体培养基培养B .用滋养层细胞支持生长C.能进行传代培养D .需要对细胞进行研磨破碎获得产物解析:杂交瘤细胞用液体培养基培养,A错误;体外培养杂交瘤细胞用的是合成培养基, 不需要用滋养层细胞支持其生长,B错误;杂交瘤细胞能无限增殖,因此能进行传代培养,C正确;不需要对细胞进行研磨破碎获得产物,D错误。答案:C8. 2019山西高二期末下列关于单克隆抗体的叙述,不正确 的是()A .可以制成诊断盒用于疾病的诊断B .可以通过基因工程生产C.可以与药物结合,用于病变细胞的定向治疗D .
21、可以在生物体内生产,不能在体外生产解析:单克隆抗体可以制成诊断盒用于疾病的诊断,A正确;单克隆抗体可以通过基因工程生产,B正确;单克隆抗体可以与药物结合制成“生物导弹”,用于病变细胞的定向治疗,C正确;单克隆抗体可以在生物体内生产,也可以在体外生产,D错误。答案:D9. 2019江苏高二期末在利用动物细胞融合技术制备单克隆抗体时,不需要考虑()A .选择的小鼠必须是纯种B .用同种抗原多次注射小鼠C.细胞融合时加入促融剂D .需经筛选后,再进行大规模培养解析:利用动物细胞融合技术制备单克隆抗体时,需要用同 种抗原多次注射小鼠,以刺激产生能产生经特定抗原刺激的B淋巴细胞,B不符合题意;还需要在细
22、胞融合时加入促融剂, C不符 合题意;细胞融合后需经筛选,得到杂交瘤细胞再进行大规模培 养,D不符合题意;选择的实验动物小鼠不一定是纯种,A符合题意。答案:A10. 2019江西南昌二中高二月考科研人员将抗癌药物连接在单克隆抗体上制成“生物导弹”,可用于癌症治疗。“生物导 弹”由两部分组成,一是“瞄准装置”,二是“杀伤性弹头”, 分析下列有关描述,其中不正确的是 ()A .“弹头”可能由同位素、化学药物和毒素等物质构成B. “瞄准装置”由识别肿瘤的单克隆抗体组成C. “生物导弹”疗效高,但毒副作用大D. “生物导弹”的制备应用了细胞工程解析:“弹头”可能由同位素、化学药物和毒素等物质构成, A
23、项正确;“瞄准装置”由识别肿瘤的单克隆抗体组成,B项正确;单克隆抗体可以特异性的和癌细胞结合,“生物导弹”毒副作用小,C项错误;单克隆抗体的制备利用了动物细胞融合、动 物细胞培养等细胞工程的技术,D项正确。答案:C11. 下列哪项是人类研究单克隆抗体的目的 ()诊断疾病 为烧伤病人进行自身皮肤细胞的移植研制生物导弹,治疗癌症基因诊断A . B .C. D .解析:单克隆抗体主要有以下几方面的用途:一、作为诊断 试剂,它在多种人类疾病及动植物病害的诊断和病原鉴定中发挥 重要作用,二、用于治疗疾病和运载药物,从目前临床试验来看, 单克隆抗体主要用于癌症治疗, 正确。答案:A12. 关于动物细胞融合
24、的相关说法,不正确的是 ()A .动物细胞融合也称细胞杂交,是指两个或多个动物细胞结 合形成一个细胞的过程B. 融合后形成的具有原来两个或多个动物细胞遗传信息的单 核细胞,称为杂交细胞C. 通过动物细胞融合技术获得了能产生单克隆抗体的生物新 品种D. 细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限,使远缘杂交成 为可能解析:动物细胞融合也称细胞杂交,是指两个或多个动物细 胞结合形成一个细胞的过程,一般多数为两个细胞的融合,A正确;动物细胞融合后,原来两个或多个动物细胞的遗传信息重新 形成一个单核细胞,称为杂交细胞,例如骨髓瘤细胞和浆细胞融 合,形成杂交瘤细胞,B正确;通过动物细胞融合技术不能直接 产生单
25、克隆抗体的生物新品种,C错误;细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限,克服远缘杂交不亲和的障碍,D正确。答案:C二、非选择题(40分)13. (12分)2019河北武邑中学高三月考如图为细胞融合的 简略过程,请据图回答下列问题:(1) 若A、B是植物细胞,在细胞融合之前已做处理,即除去 了; A、B到细胞 C的过程中,常用的物理方法是。 融合完成的标志是(2) 若A、B是植物细胞,则形成的D细胞还要应用 术把D培养成植株。(3) 若 A、 B 是动物细胞,一般取自 ; A、B到C的过程中 常用的但不能用于植物细胞培养的手段是(4) 若该过程是制备单克隆抗体,A为小鼠效应B细胞,那么, 在获得此细
26、胞之前,小鼠已被注射了 。注射后小鼠身体产生了相应的免疫反应,生成了 ,图中B为(5) 若该过程仍是制备单克隆抗体,用来培养的D细胞应该是。从中选择出它的方法是 培 养,获得D后,常用的培养方法是培养基中培养和解析:(1)植物细胞在细胞融合之前要除去细胞壁,获得原生 质体;原生质体融合常用的物理方法是离心、振动、电激。融合 完成的标志是形成新的细胞壁。(2)杂种细胞还要应用组织培养技 术培养成植株。(3)动物细胞融合时,细胞一般取自动物胚胎或幼 龄动物组织或器官;融合技术中区别于植物细胞培养的手段是用灭活病毒诱导。(4)要获得效应B细胞,应注射相应的抗原,以刺 激机体通过免疫反应生成浆细胞。要
27、使单一浆细胞无限增殖,应 与图中B骨髓瘤细胞进行融合获得杂交瘤细胞。(5)用来培养的D细胞应该既有分泌抗体又能无限增殖的能力,所以是杂交瘤细胞。从中选择出它的方法是选择性培养,获得D后,常用的培养方法是培养基中培养和注入小鼠腹腔内培养(体内培养)。答案:(1)细胞壁 离心、振动、电激形成新的细胞壁(2)植物组织培养(3)动物胚胎或幼龄动物组织或器官灭活病毒诱导(4)相应的抗原浆细胞(效应B细胞)骨髓瘤细胞(5)杂交瘤细胞选择性 注入小鼠腹腔内培养(体内培养)14. (13分)2019辽宁高三月考下图为单克隆抗体制备的流 程图,请回答下列问题:(1)图示中需要给小鼠注射特定的,目的是(2)假设仅
28、考虑某两个细胞的融合,则可形成 种类型的丙细胞,需要将融合细胞用 培养基进行筛选,再进行 ,以得到足够数量的符合要求的 (填“单”、“双”或“多”)核杂交瘤细胞。(3)与一般的血清抗体相比,单克隆抗体的优点是 。紫杉醇能阻止肿瘤细胞有丝分裂,促进其凋亡,用单克隆抗体 A1或A2与紫杉醇结合研制而成的“生物导 弹”,对于晚期低分化型的甲状腺瘤患者有较好的疗效,其中起 导向作用的是。解析:(1)在生产单克隆抗体时,需要给小鼠注射特定的抗原, 其目的是使小鼠体内产生相应的B淋巴细胞。(2)假设仅考虑某两个细胞的融合,则可形成甲与甲融合、乙与乙融合、甲与乙融合 的3种类型的丙细胞,需要将融合细胞用选择性培养基进行筛选, 将甲与乙融合的杂交瘤细胞筛选出来,再进行克
温馨提示
- 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
- 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
- 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
- 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
- 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
- 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
最新文档
- 二零二五年度旅游推广广告创意设计合同
- 2025年度解除协议范本:无人机技术研发合同终止协议
- 2025年度饭店员工劳动权益保障合同范本
- 二零二五年度汽车借用免责及车辆使用规范合同
- 休闲娱乐场所维修服务协议
- 二零二五年度保健食品冷链物流配送与仓储服务协议
- 二人项目合作协议合同范例
- 健身 合同范例
- 企业员工合伙合同范例
- 儿童劳务合同范例
- GB/T 32914-2023信息安全技术网络安全服务能力要求
- 整本书阅读《红楼梦》+15-16回助读练习 统编版高中语文必修下册
- 过滤器检测、清洗、更换记录
- 水利工程设计课件
- 日语五十音图动漫 课件
- 关心关爱女性健康知识讲座含内容两篇
- 《地方导游基础知识》课程标准
- 50新媒体文案的具体写作课件
- 西北政法环境与资源保护法学案例评析04国际环境保护法案例
- 上海烟草集团有限责任公司招聘考试真题及答案2022
- 建设工程检测人员(地基基础检测)考试复习题库400题(含各题型)
评论
0/150
提交评论