传染病实验：实验室诊断

1、传染病实验报告一、实验材料：病鸭、 镊子、剪刀、托盘、普通平板、麦 康凯平板、血平皿、接种环、酒精灯、药敏纸片、生化管、注射 器、小白鼠二、实验方法：病理解剖观察、病料接种培养、特殊平板培 养、生化实验、药敏试验、动物实验、玻板凝集实验（演示）三、实验内容及步骤:（一）病理解剖观察：1观察鸭子的天然孔道，是否有异常黏液分泌2、打开病鸭腹腔， 采用“三刀法”打开腹腔（两只鸭腿与腹 部交接的地方各剪一刀，腹部中间再剪一刀）。同时注意观察皮下及 胸、腿部肌肉有无异常（如出血、皮下水肿等）。3、检查皮下及肌肉：观察皮下与肌肉是否有出血坏死，皮下是 否有渗出物等。4、检查体腔与内脏：注意体腔内、气囊是否

2、有异物，是否增厚、 有绿斑、出血等现象，内脏器官的体积、颜色、性质是否异常。（1）呼吸系统：主要检查鼻腔内是否有异常分泌物；气管是否 有出血环，有异常黏液分泌；肺脏颜色形状是否正常，是否有出血坏 死肿大等现象。（2）消化系统：口腔是否有黏液；食道是否有出血，坏死灶溃 疡；肌胃腺胃是否出血有坏死灶，乳头是否肿胀；肠道是否有充血出 血坏死灶；肝脏是否发坏生变性，肿大，有无出血点，出血斑，坏死 等异常；胰脏是否有出血，坏死。（3）泌尿系统：主要检查肾脏，是否肿大，有出血坏死尿酸盐 沉积。（4）心血管系统：心脏的颜色，是否有心包积液；各处血管是 否有充血现象。（5）淋巴系统：检查胸腺、法氏囊是否肿大出

3、血；肠道淋巴结 及盲肠扁桃体是否异常。（6）神经系统：检查颅腔脑是否肿大，积液，脑膜有无异常； 神经粗细颜色。（二）病料接种培养1选取病变明显典型的部位接种，大鸭子选取脑、肝、脾、 肺接种，小鸭子选取接种，并将血平皿划分成相应的几部分做好标记。2、将接种环酒精灯灭菌，蘸取相应部位，使用“ Z”形划线 接种法划线接种。每蘸取一个部位后都要进行酒精灯燃烧灭菌，接种 时应在酒精灯周围进行。3、将接种好的血平皿放置在37C恒温下培养24小时后取出 观察菌落生长情况。（三）特殊平板培养1选取病变明显典型的部位接种，大鸭子选取脑、肝、脾、肺接种，小鸭子选取接种，并将麦康凯平板划分成相应的几部分做好 标记。

4、2、将接种环酒精灯灭菌，蘸取相应部位，使用“ Z”形划线 接种法划线接种。3、将接种好的麦康凯平板放置在 37C恒温下培养24小时后 取出观察其生长情况。（四）生化实验1、 选取（二） .3中培养好的细菌，大鸭子选取 接种的细菌， 小鸭子选取两种不同菌落形态的细菌。2、 将接种环灭菌蘸取相应细菌至生化管，37 C恒温，24小 时后拿出观察。（五）药敏试验1取适量培养的细菌与一定生理盐水混合均匀，用棉签蘸取后涂 布于普通平板上；2待平板上的菌液晾干后，将带有卡那霉素、氨苄西林、氟苯尼 考、头孢曲松、多西霉素、恩诺沙星、磺胺甲基异恶唑的药敏纸片贴 于平板上；3将贴好药敏纸片的平板放于37C恒温箱中

5、培养24小时后观察（六）动物试验1、在EP管中加入适量的生理盐水，选取（二）.3中培养好的细菌，大鸭子选取 接种的细菌，小鸭子选取两种不同菌落形态的 细菌，用灭菌后的接种环分别蘸取至 EP管中，混匀制成菌液。2、分别用一次性注射器将三种菌液分别注入三只小鼠体内（皮下注射，注射时要缓慢推进以防局部积液），并将小鼠做好标记。 24小时后观察小鼠病理特征。（七）玻板凝集实验（演示实验）1分别编号1号，2号，3号。再分别往1号，2号，3号玻 片中加入40ul抗原,40ul抗原,40ul生理盐水。其中3号作为对照。2、分别往1号，2号加入10ul血清,5ul血清,3号不加血清。 一段时间后观察现象。四、

6、实验结果（一）病理解剖观察1、大鸭子：呼吸系统：气管出血；肺脏有出血点。消化系统：食道充血；胃浆膜面出血；，肠道表面充血出血，肠 系膜出血；肝脏肿胀，质脆易碎，表面斑驳有针尖大小的坏死灶；胰 脏有透明样坏死灶；气囊广泛出血。泌尿系统：肾脏质脆易碎，花斑肾。心血管系统：心包黄色积液，有出血点，心冠脂肪出血。淋巴系统：胸腺肿大；法氏囊有出血斑；脾脏肿大，呈大理石样 变。神经系统：脑充血，神经无明显症状。2、小鸭子：呼吸系统：气管出血；肺脏出血；气囊均有出血斑。消化系统：食道充血；腺胃肌胃出血；肝脏肿大，有针尖大小坏死灶，颜色布局不均匀，质脆；肠道黏膜充血出血，肠系膜出血；泄 殖腔出血，胰腺有针尖大

7、小坏死灶，透明样坏死。泌尿系统：肾脏质脆，花斑肾。心血管系统：心脏心包积液，心冠脂肪出血，心脏有出血点，充 血严重。淋巴系统：胸腺肿大；脾脏肿大有坏死灶，成大理石样；法氏囊 有出血点。神经系统：神经无明显症状。（二）病料接种培养（血平皿培养）1、大鸭子平板：菌落均呈乳白色，光滑，圆形菌落，无溶血现 象。2、小鸭子平板；有两种形态菌落，一种呈光滑透明圆形菌落， 一种呈光滑灰白菌落有溶血现象。（三）特殊平板培养麦康凯培养基培养：大鸭子接种菌生长较好，呈红色；小鸭子接 种菌白色菌呈灰白色生长。（四）生化实验实验中接种的三套可疑菌落生化管为如下结果:试剂/菌种甘露醇鼠李糖蔗糖半乳糖果糖葡萄糖大鸭O,

8、+O, +O, +O, +O, +-小鸭（白色菌落）O, +O, +O, +O, +O, +-小鸭（透明菌落）O, +O, +O, +O, +O, +-注：+阳性或产酸；O +产酸又产气；-阴性或不发酵。大肠杆菌：能发酵多种碳水化合物产酸产气，大多数菌种可迅速发酵 乳糖和山梨醇，仅极少数迟发酵或不发酵；约半数菌株不 分解蔗糖。沙门氏菌：发酵葡萄糖，麦芽糖，甘露醇和山梨醇产气；不发酵乳糖、 蔗糖链球菌：能发酵简单的糖类，产酸不产气。巴氏杆菌：可分解葡萄糖、果糖、蔗糖、甘露醇和半乳糖，产酸不产气；一般发酵乳糖、鼠李糖、水杨苷、肌醇、菊糖。(五) 药敏试验、实验结果抑菌圈直径(mm判定标准耐药中介敏

9、感(1)大鸭卡那霉素24 18氨卞西林15 17氟苯尼考24 18头孢曲松27 23多西环素21 16恩诺沙星35 21磺胺甲基28 17异恶唑（2）小鸭（白色菌落）抑菌圈直径（mr）判定标准耐药中介敏感卡那霉素13 18氨卞西林7 17氟苯尼考13 18头孢曲松15 23多西环素11 16恩诺沙星10 21磺胺甲基异恶唑30 17（3）小鸭（透明菌落）抑菌圈直径（m）判定标准耐药中介敏感卡那霉素7 18氨卞西林7 17氟苯尼考7 18头孢曲松7 23多西环素7 16恩诺沙星7 21磺胺甲基7 17异恶唑（六）动物实验解剖后病理特征：1、小鼠1号（接种大鸭子菌）：皮下出血，有胶冻样物质；心脏出

10、血严重；肝脏出血肿大；肠粘膜出血；肾脏出血；肺脏出血；胃出 血；脾脏肿大。2、小鼠2号（接种小鸭子无色菌）：打开腹腔有恶臭味；皮下有 胶冻样物质；心脏有出血充血；肝脏表面斑驳，有坏死灶；胃充血； 肠道充血；肺脏充血出血；肾脏肿大。3、小鼠3号（接种小鸭子白色菌）：心脏出血；肺脏出血；肝脏 肿大出血；胃出血；脾脏肿大；肠系膜出血；胰腺出血质脆易碎；肾 脏肿大出血。（七）玻板凝集实验（演示实验）1号凝集现象最明显，2号凝集现象不明显，3号无凝集现象。五、结果与分析1、大鸭子的分析：特征病理病变为肝脏肿胀，质脆易碎，表面 斑驳有针尖大小的坏死灶；胰脏有透明样坏死灶。心脏心包积液；肺 脏出血；气囊出血。其菌落在麦康凯上生长为红色生长良好。其动物 实验病理症状呈全身性败血变化和皮下胶冻样渗出。综合生化与药敏，初步怀疑为沙门氏菌与大肠杆菌的混合感染。 沙门氏菌造成全身 性败血变化，大肠杆菌可能造成皮下腹腔胶冻样渗出。2、小鸭子分离出两种菌落。白色菌落在血平皿上有溶血现象， 镜检形态为球状，呈链状排列。接种动物病变呈全身性败血，初步怀 疑为链球菌。小鸭病理病变主要有