2.2《分解尿素的细菌的分离与计数》PPT优秀课件

1、课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,专题2 微生物的培养与应用,一、课题背景,1、尿素的利用,尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。,2、细菌利用尿素的原因,土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶,2+ H2O,【教学目标】,1知识与技能 （1）理解培养基对微生物的选择原理。 （2）了解对微生物数量测定的方法和原理。 （3）设置对照。 2过程与方法 （1）通过实验，初步学会土样的选取和选择培养基的配制，掌握细菌的计数方法 （2）运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数问题。 3情感、态度与价值观 了解微生物分离培养技术在生活

2、实际中的应用，体会科学、技术、社会的相互关系,问题反馈,1.为什么培养基中尿素还要加葡萄糖为碳源？ 2.如何设置对照实验？ 3.选择培养基的功能如何实现？,1、课题目的,从土壤中分离出能够分解尿素的细菌,统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌,一.研究思路,.筛选菌株,.统计菌落数目,.设置对照,实例：,启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。（p21第二段）,原因：因为热泉温度70800C，淘汰了绝大多数微生物只有Taq细菌被筛选出来。,DNA多聚酶链式反应（PCR）是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，此项技术要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。,2、

3、实验室中微生物的筛选原理：（p21第三段）,人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。,2、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：,从物理性质看此培养基属于哪类？,固体培养基,在此培养基中哪些作为碳源、氮源？（反馈一）,碳源：葡萄糖 氮源：尿素,什么样的微生物可以在这个培养基上生长,选择培养基,概念（p22）,.统计菌落数目：,测定微生物数量的常用方法？,统计样品活菌数的常用方法？,稀释涂布平板法计数的原理？,反馈一：选择培养基的功能如何实现？,1、显微镜直接计数：,可以利用血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。,不能区

4、分死菌与活菌；,缺点,2.间接计数法（活菌计数法） （1）常用方法：,稀释涂布平板法,统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。 因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只有一个菌落 因此，统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。,注意事项 计数用的起始菌液量必须是定量的（公式） 为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板上进行计数。 为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。 统计的菌落往往比活菌的实际数目低（原因）,例：两位同学用稀释涂布平板法测定同 一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为 106的培养基中，得到以下两种统计结果。

5、1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。 2、乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。 你认为这两位同学的做法正确吗？如果有问题，错在哪？,甲：没有重复实验（至少涂布3个平板） 乙：A组结果误差过大，不应用于计算平均值 注：误差太大，须重做或再多设几组,?,设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。,.设置对照：,实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验时，A同学从对应的106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落，但是其他同学在同

6、样的稀释度下只选择出大约50个菌落。分析其原因。,原因：土样不同，培养基污染或操作失误(或者是混入了其他的含氮物质),小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。,方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验,方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。,结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。,讨论：如何设置对照证明选择培养基有选择作用？,【教学目标】,1知识与技能 （1）分解尿素菌的分离与计数的实验步骤 （2）能分解尿素菌的鉴定 2过程与方法 （

7、1）通过实验，初步学会土样的选取和选择培养基的配制，掌握细菌的记数方法 （2）运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数问题。 3情感、态度与价值观 了解微生物分离培养技术在生活实际中的应用，体会科学、技术、社会的相互关系,问题反馈,1.为什么不同的微生物用不同的稀释度？ 2.如何计算菌落的数目？ 3.在选择培养基上生长的微生物一定是目的菌株吗？,二.实验的具体操作,（一）土壤取样,（二）制备培养基：,（三）样品的稀释,(四）取样涂布,（五）微生物的培养与观察,（六）细菌的计算,（七）菌种的鉴定,二.实验的具体操作 .土壤取样,1.从肥沃、湿润的土壤先铲去表层土3cm左右再取样,2. 小铁铲和

8、信封要灭菌,3.称取土壤应在火焰旁,制备牛肉膏蛋白胨培养基的作用？,作为对照，用来判断选择培养基是否起到了选择的作用。,将菌液稀释相同的倍数，若在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目明显多于选择培养基上的数目,说明选择培养基已筛选出一些菌落。,.制备培养基：,以尿素为唯一氮源的选择培养基,牛肉膏蛋白胨培养基,1.应在火焰旁称取土壤10g。 2.在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行,三样品的稀释,（四）.取样涂布平板,1.涂布3个选择培养基，1个牛肉膏蛋白胨培 养基，并按照由106稀104释度的顺序分别 吸取0.1 mL进行平板涂布操作。,（1）测细菌数： （2）测放线菌： （3）测真菌

9、数：,3.分离不同的微生物采用不同的稀释度：,一般用104、105、106稀释液,一般用103、104、105稀释液,一般用102、103、104稀释液,分离不同的微生物采用不同的稀释度 原因：不同微生物在土壤中含量不同 目的：保证获得菌落数在30300之间、适于计数的平板,2.实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。,.微生物的培养与观察,在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。,1.培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌：3037培养12d 放线菌：2528培养57d 霉菌：2528的培养34d。,微生物的培养与观察,(六) .计算,1.公式：每克样品中的菌株数 (CV)M,2.实例：计算106倍涂布的三个平板 菌落数分别为