酵素化学实验.ppt_第1页
酵素化学实验.ppt_第2页
酵素化学实验.ppt_第3页
酵素化学实验.ppt_第4页
酵素化学实验.ppt_第5页
已阅读5页，还剩9页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

1、Enzyme Biochemistry Laboratory,酵素化學實驗,國立台灣大學 微生物與生化所 莊榮輝,酵素純化方法 酵素分析方法 問題集,B2,酵素純化與分析,酵素分析方法,1 蛋白質定量法 2 酵素活性測定法 3 電泳檢定法 4 分子量決定法 5 蛋白質構造與組成分析 6 免疫學工具的利用 7 蛋白質科技,1 蛋白質定量法,1.1 Biuret 法 1.2 Lowry 法 1.3 UV 吸光法 1.4 Coomassie Blue (dye binding) 法 1.5 其它方法, 蛋白質構造的骨架：,R group,N-C-C-N-C-C-N-C-C,Cu2+,Cu+,活性區,

2、尿素 urea, 各 種 蛋 白 質 定 量 法 原 理 ：,Coomassie Brilliant Blue G,4,5,Specific Binding Group,M,3,1,2,206 nm (carbonyl),280 nm (aromatic),UV Absorbance,Biruet Methods (carbonyl),Lowry Methods,Phosphomolybdic- phosphotungstate,Metal,Tyr,Arg,Lys,Heme, 分子消光係數：, 分子吸收某波長光線能力的指標,吸光值 = E x b x c,constant,1 cm,光,光,1

3、,10,0.1,%, 蛋白質的分子消光係數：, 280 nm - Aromatic Groups (Side chain) 1 mg/mL 溶液 吸光度 (280 nm) = 1 約值, 192 nm - Carbonyl Groups (Backbone) 1 mg/mL 溶液 吸光度 (192 nm) = 60 (206 nm) = 29,200 nm 附近的吸光受 氧分子 干擾很大, 共軛雙鍵：,p,p 電子共振,p,活性區, 各 種 蛋 白 質 定 量 法 原 理 ：,Coomassie Brilliant Blue G,4,5,Specific Binding Group,M,Metal,Arg,Lys,Heme, Bradford Method：,Coomassie Brilliant Blue G-250,加入蛋白質,酸性環境下呈茶色,與蛋白質結合變藍色,CBG 是一種指示劑,470 nm,595 nm, 不同蛋白質的定量差異：,A600,mg Protein,BSA,IgG, 各種蛋白質定量法的比較：,Lowry,Absorbance 280 nm,Absorbance 205 nm,Bradford Dye-binding,定量方法,靈敏度,準確度,其它說明,Biuret,精 確,準 確,精確+準確,不精確+不準確,280

人人文库> 全部分类> 应用文书 > 技术指导

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论