学习资料-NYT 1380-2007 蔬菜、水果中51种农药多残留的测定 气相色谱-质谱法.ppt

1、蔬菜水果中GCMS分析确证方法蔬菜、水果中51种农药多残留的测定 气相色谱-质谱法,农业部农产品质量监督检验测试中心（北京）,QuEChERS方法的分析流程,QuEChERS方法在非脂类食品中的应用,在非脂类食品的样品处理步骤中，对于含水量较低的样品（80%），在萃取之前需要另外加水以保证离心管中水的总体积达到10mL。若处理含水量不到25%的样品（如谷类、干果、蜂蜜、香料等），应减少称样量。,3、 QuEChERS方法的优缺点,优点： 能在三、四十分钟内同时进行同一试样中6-12个样本的萃取提纯，而很少有有害物质的浪费。 在很多种基质中提取出来的农药经过检测在RSDs5%的情况下均可达到90

2、%-110%的回收率。 缺点： 在有些水果蔬菜基质中用此方法并不能获得很好的回收率。 水果蔬菜汁液的PH值一般为2.5-6.5，因此在使用此方法中易发生： 离子化：碱性农药在酸性条件下的质子化，降低了残留农药全部的进入有机相 降解：对碱敏感的农药在高的PH值样本中;对酸敏感的农药在低的PH 值样本中，均易发生此现象。,QuEChERS方法的改进,由于QuEChERS方法对酸或碱敏感性农药在低或高的pH值的母本样品中的回收率较差。因此，人们在QuEChERS方法的基础上，对其进行了改进，既在提取过程中加入适当浓度的缓冲溶液，这样增加了对酸碱敏感的农药在前处理过程中的稳定性，提高了农药残留检测的回

3、收率及准确度。,Collaborative Study,inter-laboratory validation of the buffered QuEChERS method 13 laboratories in 7 countries (Canada, Denmark, Germany, The Netherlands, Spain, UK, and USA) 21 fortified (at 10 - 1,000 ng/g) and 6 incurred pesticides in 3 commodities (grape, lettuce, and orange) analysis by

4、 (LVI-)GC-MS and LC-MS/MS,农业行业标准NY/T 1380-2007 蔬菜、水果中51种农药多残留的测定 气相色谱-质谱法,在重现USDA QuEchERS方法的基础上，结合中国国情扩展农药品种（51种），提高灵敏度，开发适合国情的QuEchERS的GC/MS方法。 重点解决农业部优先监测的13种有机磷、有机氯农药的回收率和确证灵敏度问题，进而扩展为51种农药，得到一种简便、灵敏、准确定量的GC/MS确证方法。,样品前处理流程图,15g 粉碎 样品+15ml 0.1% 醋酸/乙腈溶液 +6.0g 无水硫酸镁+1.5g 醋酸钠,取2.0ml 上清液至盛有300mg无水硫酸

5、镁100mg PSA和100mgC18离心试管中,5000转/分钟离心1.0分钟,剧烈振荡1.0分钟,旋涡混合器混合1.0分钟,5000转/分钟离心1.0分钟,取1.0ml 上清液至进样器小瓶中，用氮吹仪在室温条件下浓缩至小于0.8ml,分别加入100ul TPP和100ul 分析保护剂混合溶液，用乙睛定容至1.0ml,GCMS分析,方法实验条件,色谱柱：HP-35MS，30m*0.25mm*0.25um 进样口：毛细管分流/不分流进样口，250 进样量：2ul 程序升温：95 ,保留1.5分钟，20 /min 升温至190 ,随后5.0 /min升温至230 , 最后 25 /min 升温至

6、290，保留20.0分钟 离子源温度：230 ，四极杆温度：150 检测模式：选择离子模式（共17组） 采用保留时间锁定（恒流模式），以TPP为锁定目标化合物，锁定时间为18.03分钟，并且建立了此种条件下的保留时间锁定库。 定量方法：TPP作为内标，内标法定量。 样品种类：苹果，黄瓜，韭菜；梨，西红柿，甘蓝；草莓，胡萝卜，油菜。,GCMS方法测试农药名称，保留时间及检测离子,51种农药GC-MS总离子流图,本标准方法的技术特点： 无水硫酸镁代替无水硫酸钠和氯化钠脱水 分散固相萃取代替固相萃取柱净化 添加分析保护剂提高检测灵敏度,基质效应指样品中除目标分析物以外的其它成分对目标化合物定量结果的

7、影响。根据基质对检测信号响应值的不同影响，基质效应可分为基质增强效应和减弱效应。增强效应即基质成分的存在减少了色谱系统活性位点与待测物分子作用的机会，使得待测物检测信号增强的现象；减弱效应是指基质成分的存在使仪器检测信号减弱的现象。在气相色谱分析中大多数农药表现出不同程度的基质增强效应，严重影响了分析结果的准确性。 国内为了解决基质效应的问题大部分采用基质匹配标样来做为定量标样，但是由于基质种类繁多，配制基质标样的前处理过程复杂，不确定混合基质标样是否能够代表单一的基质标样，且基质标样由于基质的存在使得标样有效的贮存时间很短，为残留分析造成了很大的影响。,基质效应的定义,Discussions

8、,基质效应的消除与补偿办法,基质匹配标准溶液校准方法：欧盟委员会指令2002/657/EC中指出：在使用的情况下，标准标样必须是制备于尽可能与样品溶液中相同的溶液当中。由于基质效应依赖于所分析的样品基质，那么获得精确结果的最好方式就是对每种样品基质使用其基质匹配标样。目前许多的农药残留检测方法都是使用基质匹配标样来进行校准的，以使标样中的基质环境与样品相同 。,上面这种方法固然有效，但是在检测任务繁重的常规实验室应用起来并不实际，其原因是：由于不同样品之间性质差异很大，在分析检测过程需要考虑各种样品具有不同的基质特性，会产生不同的基质效应；应用时需要选择空白样品材料，然后制备对应于各种样品的基

9、质匹配标样；使得更多的样品基质进入到仪器中，又增加了系统的维护费用；并且这种标样，不易于长期保存，随着时间的增长，基质中的农药会发生降解。 为了避免对于每种样品种类都要配制其基质匹配标样，Martmez等对比了4种蔬菜和2种瓜类的基质匹配标准曲线，从中选择黄瓜和分别作为蔬菜和水果的代表基质，来配制基质匹配标准溶液用于其它蔬菜和水果的定量。虽然这种方法较为简便一些，但是不同种类样品间的相对基质效应有时是比较大的。,多步净化措施：对提取物进行逐步净化可以有效地净化样品,去除杂质的干扰 进样技术和操作条件的优化 ： 标准添加法和内标法 分析保护剂的应用 ：由于气相色谱分析中基质效应产生的主要原因是进

10、样口、柱头的活性位点与待测物基团的相互作用,所以通过使用合适的试剂以阻止活性位点与待测物之间的相互作用, 将会是一种有效的方法。而这种试剂的选择以及其适用性则是关键的因素。,基质效应,保护剂D05(20mg/ ml) +B06(1.0mg/ ml) 对峰形和峰面积的影响 A: 基质提取+分析保护剂 B: 基质提取 C: 标样+分析保护剂 D: 标样(黄瓜,苹果,韭菜混合基质),A,B,C,D,A,B,C,D,Methamidophos m/z 94,Acephate m/z 136,Omethoate m/z 156,Carbofuran m/z 164,Mevinphos m/z 127,Fenvalerate m/z 167,使用分析保护剂这种方法补偿基质效应的优点如下: 能改善待测物峰形和强度; 操作非常简便, 是基质匹配校正方法所不能比拟的; 能得到更低的检测限; GC 系统不需要经常维护。 缺点是加入的浓度大, 全扫描时会掩盖部分农药峰, 只能用选择离子扫描检测。,韭菜(添加水平250ppb),Leek Matrix,Pest Std+ Protectants,Leek+Pest std+ Protectants,方法优越性,方法简单易行，且保证回收率和灵敏度。 方法使用保护剂山梨醇和乙氧基丙二醇，有效地减弱基质效应，减少纯溶剂标样定量的误差，且能提高甲胺磷