微生物的无菌操作及接种技术ppt课件

微生物无菌操作技术接种技术工业生产中的微生物接种，第四章微生物无菌操作和接种技术，1，1，微生物无菌操作技术，无菌操作目的：保证检测对象物不被环境中的微生物污染，防止被检测微生物在操作中污染环境或感染操作者。 无菌操作技术：指微生物实验工作中控制或防止各种微生物污染及其干扰的一系列操作方法和相关措施。 2，1 .接种针2 .接种环3 .接种钩4.5 .玻璃涂层棒6 .接种环7 .接种锹8 .小解剖刀、一、微生物无菌操作技术、无菌操作材料：接种工具、3，一、微生物无菌操作技术、无菌操作材料：材料器具和用品：酒精灯、记号笔、标签、火柴、灭菌培养皿、无菌水、 试管菌种培养基：4，2，原理：无菌技术：微生物实验作业中控制或防止各种微生物污染及其干扰的一系列操作方法和相关措施。 接种：将微生物接收到适合繁殖的人工培养基或活体内的过程。 微生物无菌操作技术和接种技术、5、接种准备作业无菌环境的要求和进入无菌室前的无菌操作的要求接种的操作方法、2、微生物接种技术、6、无菌环境、无菌室超清洁台、无菌环境的要求和保持、(1)接种的准备作业、7、(1)无菌室的结构：更衣间、缓冲间， 操作间必须设置良好通风条件的空调设备和过滤设备，无菌环境的要求和保持，1、无菌室、8、无菌室的结构，9、(2)无菌室的消毒和防污染无菌室内的空气测试基本上应该无菌。 每天(使用前)用紫外线照射(12小时)，每周用甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸(2小时)，每月用清新擦拭地板和墙壁的方法消毒一次。 定期计数实验室沉降菌，检测无菌室微生物的繁殖动态。 无菌环境的要求和保持，10，2，超清洁工作台，超清洁工作台是为实验室工作提供无菌操作环境的设施，在保护实验不受外部环境影响的同时，对外部环境提供一定程度的保护以防止污染，保护操作者。 原理：清洁工作台的清洁环境是在特定空间内，清洁空气(吸气过滤空气)向设定的方向流动而形成的。 根据气流的方向，现有的清洁工作台分为垂直式、向内式和横向式。 无菌环境的要求和保持，11，垂直流超纯表，水平流超纯表，垂直流超纯表，12，超纯表的使用和维护，风速保持在0.32-0.48米/秒前照射紫外线灯接通4060min超纯表的电源，关闭紫外线灯，切断75%的酒精或0.5 使用过程中，有机玻璃罩被污染，请勿用酒精棉球擦拭。 请用含水棉布的檫子擦拭清洁台，干燥，不要堆积垃圾使用完毕后，关闭气体开关或酒精灯使用完毕后，用消毒液擦拭桌面，切断电源，重新照射紫外线灯15min。 定期进行无菌试验，测定清洁工作台是否满足无菌要求。 无菌环境的要求和保持，13，3，无菌器材的准备，灭菌器材：玻璃器材，培养基，无菌服等。 消毒器材：接种试管、无菌室内长椅、试管、天平、桌子等，对无菌环境的要求和保持，14，(1)定期检查无菌环境的空气是否满足规定，(2)用紫外线灭菌处理3060min； (3)检查无菌器材是否完备(4)实验者在进入无菌室前用肥皂洗手，用75%酒精棉球擦手。 (5)在缓冲室内清洗，更换用紫外线灯照射的工作服、帽子、鞋。 进入无菌室前的准备，15、(1)作业中不得有大幅度或迅速的动作(2)使用玻璃制的器具时，请轻轻放置。 (3)在火焰上操作的(4)接种器具在使用前和使用后必须进行烧灼灭菌的(5)接种培养物时，协助应轻，标准。 (6)不得用喷嘴直接吸管。(7)带菌液的吸管、玻璃板等器材应立即放入装有5%溶胶溶液的消毒罐内消毒。 无菌操作要求、16、无菌操作要求、17、无菌操作要求、18、接种基本顺序通常接种方法斜面接种线接种液体接种接种、(2)接种的操作方法、19、1、接种的基本顺序、(2)接种的操作方法、20、2、通常接种方法、斜面接种线接种液体接种接种、(2)接种的操作方法、21、斜面接种：从生长的菌种斜面采集少量的菌种并移植到其他新鲜的斜面培养基中用于好氧微生物接种。 2、常用接种方法22、标记：接种前在试管上打上菌名、接种日、接种者名的酒精灯。 接种： (1)手持试管左手持菌种管、接触斜面管用拇指及其他四指，中指位于两管之间。 把斜面朝上，尽量弄平。 (2)松管栓(3)接种环烧灭菌，斜面接种，23，斜面接种，3 )接种： (4)拔管栓：用右手无名指、小指和手掌前后拆下接种管和试管的管栓，慢慢过热灭菌试管口(请不要变热)，24， 斜面接种，3 )接种： (5)冷却菌：接种环，使少量菌体或细胞附着，使接种环从菌种管移动，注意不要使接种环碰到管壁，取出后不要附着菌种接种环，25、斜面接种，3 )接种： (6)接种：将火焰旁附着有菌种的接种环迅速地接触斜面管从坡面培养基底部向上呈“z”形密切刻划，切勿切割培养基。 用接种针在斜面培养基的中央画一条直线就可以进行斜面接种，有时也可以用直线接种观察不同菌种的生长特性。26、斜面接种、3 )接种： (7)插头：取出接种环，烧制试验管口，在火焰旁旋转插头。 试管移动时不能接受棉塞，以免进入污染的空气。 (8)灼烧灭菌接种环。 放下接种环，把棉花系紧。 27、斜面接种示意图、28、从斜面菌接种到液体培养基(试管或三角瓶等)的方法。 操作方法：与斜面法基本一致，将接种环送入液体培养基时，使环在液体与管壁接触处轻微摩擦，分散菌体，塞棉塞轻轻摇动。 菌种在液体培养基培养时，一般用移液管或吸管接种，2，常用接种方法，液体接种，29，2，常用接种方法，线接种，目的：使混合细菌单一分散生长，形成单一菌落，得到纯菌、活菌数。 方法：分区刻划法：适用于含菌量多检测体的连续刻划法：适用于含菌量少的检测体的30、2、适用于常用的接种方法的刻划接种、31、分区刻划法、第1分区刻划、灭菌接种环、第2分区刻划、灭菌接种环、第3分区刻划、灭菌接种环适用于常用接种方法，划线接种，32，连续划线法，2，适用于常用的接种方法，划线接种，33，用接种针从菌种斜面采集少量菌体穿刺固体或半固体的厌氧细菌的培养，细菌的运动能力的检查，菌种的保存。细菌和酵母的接种培养，2，常用的接种方法，穿刺接种，34，穿刺接种方法：1)标记2 )酒精灯3 )接种(1)试管(2)松棉栓(3)接种针进行烧灼灭菌，穿刺中有可能进入试管的其他部位也进行烧灼灭菌，2，常用的接种方法，穿刺接种，35 3 )接种(4)棉栓(5) 拔菌：冷却接种针的针尖沾上少量菌种(6)进行穿刺：将接种针从培养基的中心顺利、迅速地垂直地刺入培养基，接近试管的底部，沿着接种线拔出(7)棉塞(8)拔出接种针进行烧灼灭菌，2、常用的接种方法，穿刺接种，36，1、无菌技术是什么？ 2、如何做好无菌室消毒和污染防治工作3、如何使用和维护超洁净工作台？ 4、无菌操作的目的是什么5、进入无菌室前必须做什么准备6、检查操作过程的无菌操作要求包括什么内容7、接种时为什么要尽量使试管平整8、穿刺接种时能直接穿透培养基、问题和讨论、37、工业生产中一般方法有压差法、火焰封口法等。 1、火焰封口法种子罐的接种口周围设置槽，接种时向槽内注入少量酒精，用火焰点燃酒精将接种口包在火焰中，然后将菌悬浊液注入种子罐即可。 工业生产中的微生物接种，3