常见限制性酶切位点

常见限制性内切酶识别序列 酶切位点 BamHI EcoRI HindIII NdeI XhoI 等 分子生 物学实验室技术 2009 11 17 17 46 32 阅读 2235 评论 2 字号 大中小 订阅 在分子克隆实验中 限制性内切酶是必不可少的工具酶 无论是构建克隆载体还是表达载体 要根据载体选择合适的内切酶 当然 使用 T 载就不 必考虑了 先将引物设计好 然后添加酶切识别序列到引物 5 端 英语怎么说 常 用的内切酶比如 BamHI EcoRI HindIII NdeI XhoI 等可能你都已经记住了它们的识别 序列 不过为了保险起见 还是得查证一下 下面 我就总结了一些常用的内切酶的识别序列 仅供各位参考 下面这些内切酶都属于 II 型内切酶 先介绍一下什么是 II 型内切酶吧 The Type II restriction systems typically contain individual restriction enzymes and modification enzymes encoded by separate genes The Type II restriction enzymes typically recognize specific DNA sequences and cleave at constant positions at or close to that sequence to produce 5 phosphates and 3 hydroxyls Usually they require Mg 2 ions as a cofactor although some have more exotic requirements The methyltransferases usually recognize the same sequence although some are more promiscuous Three types of DNA methyltransferases have been found as part of Type II R M systems forming either C5 methylcytosine N4 methylcytosine or N6 methyladenine ApaI 类型 Type II restriction enzyme 识别序列 5 GGGCC C 3 BamHI 类型 Type II restriction enzyme 识别序列 5 G GATCC 3 BglII 类型 Type II restriction enzyme 识别序列 5 A GATCT 3 EcoRI 类型 Type II restriction enzyme 识别序列 5 G AATTC 3 HindIII 类型 Type II restriction enzyme 识别序列 5 A AGCTT 3 KpnI 类型 Type II restriction enzyme 识别序列 5 GGTAC C 3 NcoI 类型 Type II restriction enzyme 识别序列 5 C CATGG 3 NdeI 类型 Type II restriction enzyme 识别序列 5 CA TATG 3 NheI 类型 Type II restriction enzyme 识别序列 5 G CTAGC 3 NotI 类型 Type II restriction enzyme 识别序列 5 GC GGCCGC 3 SacI 类型 Type II restriction enzyme 识别序列 5 GAGCT C 3 SalI 类型 Type II restriction enzyme 识别序列 5 G TCGAC 3 SphI 类型 Type II restriction enzyme 识别序列 5 GCATG C 3 XbaI 类型 Type II restriction enzyme 识别序列 5 T CTAGA 3 XhoI 类型 Type II restriction enzyme 识别序列 5 C TCGAG 3 当然 上面总结的这些肯定不全 要查找更多内切酶的识别序列 你还可以选择下面几种 方法 1 查你所使用的内切酶的公司的目录或者网站 NEB 网站上提供的识别序列图表 下载 2 用软件如 Primer Premier5 0 或 Bioedit 等 这些软件均提供了内切酶识别序列的信息 3 推荐到 NEB 的 REBASE 数据库去查 网址 当你设计好引物 添加上了内切酶识别序列 下一步或许是添加保护碱基了 可以参考 NEB 公司网站提供的保护碱基参考表下载 NEB 公司网站上关于设计 PCR 引物保护碱基的参考 双酶切 buffer 的选择 MBI 罗氏 NEB Promega Takara 这里再给大家推荐一种新的不需要连接反应的分子克隆方法 优点包括 设计引物不必考虑选择什么酶切位点 不必考虑保护碱基的问题 不必每次都选择合适的酶来酶切质粒制备载体 而且不需要 DNA 连接酶 假阳性几率低 因为没有