植物基因组DNA的提取ppt课件.ppt

植物基因组DNA的提取 背景知识 植物细胞中有哪些细胞器中含有DNA 与动物细胞的差别 背景知识 DNA的存在形式 背景知识 DNA的存在形式 背景知识 DNA的存在形式 核苷酸 双螺旋结构 一级结构 核小体 二级机构 螺线管 三级结构 超螺旋管 四级机构 染色体 组蛋白 背景知识 DNA的存在形式 DNA为白色类似石棉样的纤维状物 大都呈酸味 DNA一般都溶于水 不溶于醇类 氯仿等有机溶剂 在高盐溶液中的溶解度最大 在酸性溶液中易水解 中性或弱碱性溶液中较稳定 DNA的理化性质 实验目的 掌握CTAB法提取植物DNA的原理掌握CTAB法提取植物DNA的实验方法注意 此方法会把少量RNA提取出来 故后面通称核酸的提取 实验原理 核酸 蛋白质复合体 CTAB 核酸复合体 CTAB 蛋白质变性剂 蛋白质变性除去 高盐溶液 溶解 沉淀剂 沉淀核酸 新鲜菠菜叶片十六烷基三甲基溴化铵 CTAB 三羟甲基氨基甲烷 Tris 乙二胺四乙酸二钠 EDTA 2Na 氯化钠 Tris饱和酚 异丙醇 巯基乙醇 无水乙醇 氯仿 异戊醇 液氮 聚乙烯吡咯烷酮 PVP 40 实验材料 实验仪器 离心机 3台 12管水浴锅 65 研钵 10个移液枪 包括枪头 实验试剂 2 CTAB抽提液 250ml CTAB4g 无水乙醇5ml 蒸馏水100ml 200ml烧杯 5mol lNaCl56ml 1mol lTris HCl PH8 0 20ml 0 5mol lEDTA8ml 定容至250ml 高压灭菌冷却后121 20min 1 巯基乙醇2ml PVP 405g 4 保存 实验试剂 氯仿 异戊醇 24 1100ml 氯仿96ml 异丙醇4ml 4 保存 TE缓冲液 保存DNA PH8 050ml 10mmolTris HCl PH8 0 0 5ml 0 5mol lEDTA PH8 0 0 1ml 定容至50ml调PH8 0 高压灭菌冷却后121 20min 4 保存 酚 氯仿 异戊醇 25 24 140ml取20ml前面配制的氯仿 异戊醇 20mlTris饱和酚 2 破碎细胞 释放溶解核酸 快速研磨成粉末 轻摇匀 取出冷却2分钟 液氮 1ml65 CTAB抽提液 1g菠菜叶片 65 水浴锅40分钟每10分钟轻摇 10ml离心管 预冷的研钵 实验步骤 1 准备工作 蒸馏水洗净 晾干 剪小备用 CTAB抽提液 65 水浴锅预热 3 抽提去除蛋白质 2 1ml酚 氯仿 异戊醇 振荡2分钟 12000r min离心10分钟 10ml离心管 分层 上清液核酸 CTAB 变性蛋白 有机溶剂 10ml离心管 2ml氯仿 异戊醇 颠倒混匀 12000r min离心10分钟 分层 变性蛋白 有机溶剂 上清液核酸 CTAB 上清液核酸 CTAB 实验步骤 4 沉淀核酸 上清液核酸 CTAB 20 异丙醇2 5ml 10ml离心管 室温沉淀 10000r min离心10分钟 5 核酸的洗涤 脱盐 400ul无水乙醇 去上清液 10000r min离心10分钟 6 核酸的保存 100ulTE缓冲液 5 20 保存 实验步骤 慢摇30秒室温15分钟 在整个实验过程中应严格执行无菌操作 部分药品有毒 操作中应注意安全防护 磨样时最好是加液氮 磨样速度要快 使材料处于低温状态 刚投入水浴时可以稍快速的晃动 之后的晃动一定要轻柔 抽提时不要有太力振动 操作也要仔细 尽量避免DNA断裂 将DNA加入异丙醇时用的枪头一定要剪过的 这点很重要 过尖的枪头会把DNA链弄断 注意事项 思考题 本实验中用到的各种试剂的作用是什么 本实验中进行了几次离心操作 每次的目的 实验安排 按照学号分组进行实验 每6人一组 一组做3管 用一个研钵 每3组共用1台离心机同时进行离心操作 6人一组 2013级生物技术专业分子生物学实验报告姓名 学号 实验项目 实验二植