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文档简介
生化检验项目校准 泸州市人民医院 校准 在规定条件下 为确定测量仪器 或测量系统 所指示的量值 或实物量具 或参考物质 所代表的值 与对应的由标准所复现的量值之间关系的一组操作 仪器的性能验证 零点漂移波长准确度及重复性杂散光吸光度正确度吸光度重复性吸光度线性误差交叉污染率温度正确度比色杯间差距检测项目校准 参考方法 决定性方法 厂家方法 常规分析 一级标准品 二级标准品 校准品 校准目的是准确度的传递 溯源 校准 项目校准主要涉及内容 校准方法的选择校准品的选择及准备校准频率的选择校准后的验证问题讨论 校准方法的选择 K因子法 理论k值 根据理论摩尔消光系数来计算 通常试剂生产厂家给出的k值都属于 实测K值 是根据仪器实测的摩尔消光系数来设置K值校准k值 是根据仪器当前的实际状态 试剂的稳定性等通过校准品校准后得到的K值 K因数法适用的分析方法有一点终点法 两点终点法 两点速率法 多点速率法 线性校准 Linear 其反应为线性 直线 一般只需一个校准品进行校准 非线性法 又称非直线性校准法非线性法包括logit log法 指数函数法 样条函数法等方法Logit log3p对数函数法中的一种 适用于浓度升高而吸光度表现为收束的工作曲线 P表示参数之意 由3个参数 S1Abs k a 参与计算 S1Abs表示试剂空白 K表示校准所得斜率 a表示近似常数 logit log4p对数函数法中的一种 适用于浓度升高而吸光度表现为收束的工作曲线 样条函数法 spline 是将每一标准液测定的吸光度连接起来 点对点 形成一个完整曲线 即为曲线拟合 该曲线拟合优于折线法校准 logit logXp与样条函数法 抛物线型 左下图 则多考虑用logic方法拟合 曲线类型不确定时 或校准曲线类型如图12 37所示的S型非线性校准类型 则多考虑Splain方法拟合 校准品的选择及准备 校准品 含有已知量的欲测物 用以校准该测定方法的数值 它与该方法 试剂 仪器是相关联的 校准品的作用是为了减少或消除仪器 试剂等造成的系统性误差 最好为人血清基质 减少基质效应仪器 试剂 校准品的配套性如有可能校准品应溯源到参考方法或参考物质要有明确的不确定度 冰冻产品的处理步骤 从 70 或 20 冰箱中取出样本 置室温 18 25 下平衡 使之完全融化 温和混匀 冻干产品的复溶步骤 从冰箱中取出样本 置室温 18 25 下平衡 并放置在水平桌面上 轻拍小瓶 以确保所有物质已沉淀在该小瓶底部 小心拔开胶塞 采用已校准的移液管沿瓶壁缓慢精确加入规定体积的去离子水 压胶塞到原位后置室温下使之完全溶解 温和混匀 应按厂家提供说明书操作 校准品浓度水平及个数选择校准至少包含你需要报告结果的内容 范围 校准范围也定义为分析方法的工作范围 个数要与仪器要求相匹配 案例分析 一 现象 某品牌HCY试剂 仪器 雅培C8000 校准无法通过 出现 校准失败 的报警 试剂参数为 Primarywavelength 340nm Secondarywavelength 700nm Mainreadtime 31 33 Blankreadtime 26 28 Samplevolume 10ul R1reagentvolume 185ul R2reagentvolume 50ul Calibrationmethod Spline 校准品个数设置 3 浓度分别设置为 0 10 33umol L 二 了解情况 查看校准结果 发现其每个浓度的吸光度实际在该仪器上已做出测定 分别为 0 0 002710 0 034433 0 0738 但参与最终结果计算的CalFactor 校准因数 却显示为0 说明该仪器并未通过所测定的吸光度进行曲线拟合 故出现 校准失败 报警 三 处理 分别对10umol L 33umol L的校准品进行对倍稀释 得到5umol L 16 5umol L浓度的校准 把参数中校准品个数修改为 5 浓度设置修改为0 5 10 16 5 33umol L 仍采用Spline定标模式重新进行校准 后校准顺利通过 结果如下 5 之后校准显示通过 质控在控 证明校准成功 四 分析 全自动生化分析仪的校准模式设置中均有线性或非线性的选择 当我们对其进行设置时 会根据试剂盒的反应原理选择合适的校准模式 通常情况下 常规的生化项目我们会选择线性模式校准 而免疫比浊项目我们会选择非线性模式校准 若选择线性校准 往往我们只需带一个校准品进行两点校准即可 若选择非线性校准时 我们会带多个浓度校准品进行多点校准 5 不同的仪器 在做非线性校准时所要求的校准品个数是不同的 例如 日立 奥林巴斯等仪器 要求至少带三个浓度的校准品即可进行非线性拟合 贝克曼 东芝等仪器 则要求至少带四个浓度的校准品才进行非线性拟合 五 总结 我们在进行新项目实验前 除了选择正确的校准模式外 还要根据该仪器的性能特点 选择符合要求的校准品个数 以保证实验的顺利进行 校准频率的选择 1 1实验室用房选址 BSL 2级实验室在选址和建筑物间距方面并没有特殊要求 也不要求有单独的建筑物 不过BSL 2级实验在布局上还是强调要与办公用房和其它公共用房隔离 尽量自成一区或设在建筑物的一端 远离公共活动场所 屏蔽电磁 震动 一般选择2 3楼层为宜 通风 宽敞明亮 靠近整栋建筑污物电梯 附近有厕所 理想状况下进行每批次检测前都应进行试剂改变了种类或更换了批号仪器进行了大的维护维修或更换了重要的配件 如光源灯 滤光片等室内质控出现了趋势性变化或飘移 系统性误差 或者超出了实验室规定接受限 采取了一般性纠正措施后 不能识别和纠正问题时厂家试剂有明确校准时限规定的 校准后的验证 校准后用校准品当样本进行测试 看其值与定值之间的差异测定室内质控 看结果是否在控 参加室间质评或返测已知浓度的室间质评样本 记录每次校准结果 与之前的校正结果进行比较 问题讨论
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