呼吸道感染常见病原菌

社区获得性呼吸道感染的病原学,社区获得性呼吸道感染常见病原菌,其他致病菌包括：卡它莫拉菌、GNB、衣原体等,Adapted from Woodhead M.J Antimicrob Chemother .1994:34(suppl A):85-92,以色列CAP的病因调查(1991-92: 346例),阳性,Thorax 1999;51:179,以色列不同年龄组CAP的病因调查,第一位 第二位1744岁肺炎支原体肺炎链球菌4554岁肺炎链球菌肺炎支原体55岁肺炎链球菌肺炎衣原体,CAP病原学诊断,我国苛养菌分离现状未建立标本送检指南；送检标本与接种时间相隔太长；不具备苛养菌分离的培养基；无CO2培养环境；不能辨别菌落；无鉴别试剂,苛养菌分离率低，污染菌影响药敏结果，迄今国内无可信的CAP病原学流行病学资料。,标本采集 痰标本：采集应在抗菌治疗前，清 晨清水漱口三次，深咳痰。无痰者用高渗盐水吸入导痰。意识障碍者可经鼻或口腔吸痰，或经人工气道吸痰。,CAP病原学诊断,CAP病原学诊断,标本采集咽试子应用无菌湿棉签取，即时送检。 实验室应即时接种血琼脂和巧克力琼脂（含抗菌素）， 置5-10CO2气体环境。,标本质量评价,直接涂片镜检： 鳞状上皮细胞25/低倍视野 鳞状上皮细胞：白细胞105cfu/ml（2+）BALF：细菌104cfu/ml（1-2+）PSB、PBALF：细菌103cfu/ml（1+） 肺炎衣原体抗体滴度升高4倍 LP直接荧光抗体阳性抗体滴度升高,CAP病原学诊断,检测结果判定2.有意义: 合格痰标本培养细菌3+ 细菌少量生长，但与镜检结果一致 （肺球、流感、卡他莫拉菌） 入院3天内多次培养到相同细菌 血清肺炎衣原体抗体升高1：32 LP抗体升高1：320（ELISA）， 或间接荧光抗体1：512,CAP病原学诊断,检测结果判定3. 无意义: 痰培养到上呼吸道正常菌（草链、表 葡、非致病奈瑟菌、类白喉杆菌等） 多种病原菌少量生长 不符上述“确定”和“有意义”条款,苛养菌,苛养菌：对营养要求苛刻，在普通培养基上不生长或难以生长的一类细菌。 临床常见的有： G+球菌：肺炎链球菌 G-球菌：卡他布兰汉菌、脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌 G-杆菌：嗜血杆菌、鲍特菌,嗜血杆菌属,嗜血杆菌属（Haemophilus）细菌为一类无动力、无芽孢的革兰阴性短小杆菌常呈球杆状、丝状等多形态。,分类,隶属巴斯德菌科，嗜血杆菌属。本菌属包括16个菌种，其中9个与临床有关,临床意义,嗜血杆菌存在于正常人上呼吸道。可引起上呼吸道、泌尿道感染及脑膜炎、菌血症等感染性疾病。,临床意义,流感嗜血杆菌： 常引起咽炎、中耳炎、肺炎、鼻炎、脑膜炎、心包炎、骨髓炎等。 主要致病物质： 内毒素、荚膜、菌毛和酶类。,临床意义,副流感嗜血杆菌：咽炎和心内膜炎。溶血嗜血杆菌：儿童上呼吸道感染。埃及嗜血杆菌：急性眼结膜炎。副嗜沫嗜血杆菌：心内膜炎、肺炎、脑膜炎。杜克嗜血杆菌：软下疳,培养特性： 需氧或兼性厌氧 最适生长温度： 35 PH 7.6-7.8 生长因子：X、V 5%-10% CO2,嗜血杆菌对生长因子的需求,菌种 X因子 V因子 溶血性 流感嗜血杆菌 + + - 副流感嗜血杆菌 - + - 埃及嗜血杆菌 + + - 杜克嗜血杆菌 + - +/- 嗜沫嗜血杆菌 + - - 溶血性嗜血杆菌 + + +,微生物特性,流感嗜血杆菌根据其对吲哚、脲酶及鸟氨酸试验的反应不同可分为8个生物型；副流感嗜血杆菌亦可分为8个生物型 流感嗜血杆菌根据荚膜多糖抗原不同可分为a、b、c、d、e、f 6个血清型，其中b型致病性最强，f次之。,微生物特性,流感嗜血杆菌含有不耐热的S抗原和耐热R抗原。 流感嗜血杆菌根据菌落特征可分为三种类型：粘液型（M）、光滑型（S）、粗糙型（R）。,微生物检验,标本采集 根据感染部位不同采集标本，如鼻咽试子，痰液，脑脊液，脓液等。避免干燥，及时送检。,检验程序,检验方法,（1）直接镜检：痰液、脓液、鼻咽分泌 物等标本可直接涂片，脑脊液离心取沉 淀物涂片，革兰染色镜检。如查见革兰 阴性短小杆菌，呈多形性，结合临床症 状，作初步诊断。,（2）分离培养：,将血液、脑脊液增菌培养后，转种巧克力琼脂和血琼脂培养基，其他标本可直接划线接种于巧克力琼脂和血琼脂培养基，经35培养1824h，根据菌落特征、菌体形态、溶血情况、卫星试验、X和V因子需求试验定种，再作生化试验和荚膜肿胀试验分型。,卫星试验：,挑取可疑菌落，密集划线接种于兔血琼脂平板和M.H琼脂平板上，再将金黄色葡萄球菌点种于培养基上，35，培养1824h，如见金黄色葡萄球菌周围菌落较大，而远处菌落较小，即卫星试验阳性。,（3）鉴定要点：,本菌为革兰阴性短小杆菌，呈球杆状，逗点状，丝状等多形态性； 在巧克力琼脂平板上为灰白色，中等大小、湿润的菌落； 流感嗜血杆菌血平板卫星试验阳性，M-H琼脂平板卫星试验阴性；以X、V和X+V因子纸片贴于接种细菌的M-H琼脂平板上，仅在X+V因子周围生长为流感嗜血杆菌。,荚膜肿胀试验：,取一定浓度菌悬液，滴于载玻片上，再依次滴加af流感嗜血杆菌抗血清混匀，加少量美蓝液混和后覆盖片，室温10min后，用油镜观察，如查见菌体呈蓝色，周围绕有界限分明未染色的膨大空白圈为阳性。此法可直接检查标本中细菌，作早期诊断,药敏试验：,选用专用培养基 HTM（Haemophilus Test Medium Base） 标准菌株： ATCC 49247 ATCC 10211,结果解释：,流感嗜血杆菌需常规检测-内酰胺酶，阳性提示对青霉素、氨苄西林、阿莫西林耐药。,-内酰胺酶检测：,头孢硝噻吩（Nitrocefin ）,肺炎链球菌,菌落形态：灰色、圆形、扁平、0.5-1.0的菌落，周围有草绿色溶血环。菌体形态：革兰阳性球菌，矛尖状、成双排列，宽端相对， 尖端向外。无鞭毛、无芽胞，在机体内或含血清的培养基中可形成荚膜。Optochin敏感试验：阳性胆盐溶菌试验：阳性,美国CAP的流行病学调查Community- acquired pneumonia incidence study(CAPIS),例数 / 10万人,Arch Intern Med 1997;157:1079,美国CAP的流行病学调查Community- acquired pneumonia incidence study(CAPIS),Arch Intern Med 1997;157:1079,肺炎链球菌是不明原因CAP的首要致病菌?,1993年1月-1994年3月西班牙，纳入109例急诊CAP常规检查手段：血培养两次就诊当天及30天后取血查病毒及不典型致病菌抗体 痰涂片及痰培养,肺炎链球菌是不明原因CAP的首要致病菌?,胸腔细针抽吸术：细菌培养，抗原检测肺炎链球菌、流感嗜血杆菌PCR检测肺炎链球菌、支原体、衣原体、军团菌、卡氏肺囊虫,肺炎链球菌是不明原因CAP的首要致病菌?,常规检查手段：54个病人确定病原菌（阳性率50）胸腔细针抽吸术：在54个已知病因者：22个得到证实另55个未明病因者：36个得以明确，其中18例为肺炎链球菌,19922001年青霉素、 红霉素耐药的肺炎链球菌的发展趋势: Alexander 监测,国家青霉素 I+R红霉素 r法国 %R 92 (n=169)7.725.4 %R 01 (n=165)35.8 *56.4 *德国 %R 92 (n=104)01 %R 01 (n=147)2.47.7意大利%R 92 (n=70)24.91.4%R 01 (n=103)30.235.9 *英国%R 92 (n=166)5.62.4%R 01 (n=87)20.7 * 11.5 *美国%R 92 (n=125)5.66.4%R 01 (n=87)20.7 * 28.8 *,耐青霉素的肺炎链球菌（PRSP）,1ug苯唑西林纸片筛选耐青霉素的肺炎链球菌（PRSP）：抑菌圈20mm为敏感，表示对其他相关的-内酰胺类抗生素敏感抑菌圈19mm作MIC,卡他布兰汉菌,分类： 莫拉菌属布兰汉亚属。该亚属包括卡他布兰汉菌、猪布兰汉菌、羊布兰汉菌、兔布兰汉菌。,卡他布兰汉菌,菌落形态：灰白色、光滑、圆凸、不透明、不溶血的菌落（有特殊的手感）菌体形态：革兰阴性双球菌、呈咖啡豆形、无芽