陈宏志开题报告

探究Seipin基因与间充质干细胞成骨分化及成脂肪分化的关系,专 业 ：病理学与病理生理学研 究 生 ：陈宏志 指 导 老 师：庞丽娟 副教授 李 锋 教 授,2014级研究生开题报告,汇报内容,研究背景 研究目的及意义研究内容方法和技术路线主要创新点已做的准备工作经费预算,研究背景,人类Seipin基因定位于染色体11q13,由Magre等在2001年通过定位克隆的方法从9个先天性全身脂肪营养不良(CGL)的家系中筛选出来。Seipin基因的无义突变与2型CGL密切相关，该患者缺失几乎全部的脂肪组织。,研究背景：Seipin基因突变的表现,Seipin突变,全身脂肪缺失,肌肉增多,黑棘皮症,雄激素过多,肝肿大及脂肪肝,食欲亢进,肌肉中脂质沉积,主要方面,代谢方面,生殖方面,激素水平,其他方面,高甘油三酯血症,胰岛素抵抗,糖尿病,瘦素、脂联素降低,不育,Human Molecular Genetics,2015,Vol.24,No.15 4238-4249,WT,SKO,WT,SKO,WT,SKO,黑色箭头所指为附睾脂肪垫，显示SKO 动物的脂肪缺失；红色箭头所指位置为肝脏，显示SKO 动物的肝脏增大、颜色发白，提示脂质沉积。,Journal of Chongqing Medical University 2013.Vol.38 No.1,两种动物不同放大倍数下附睾、皮下脂肪形态,与WT 动物相比，SKO 动物脂肪细胞大小、形态不一，提示SKO 动物脂肪组织发育不良。,Journal of Chongqing Medical University 2013.Vol.38 No.1,研究背景,Discov Med,2010,研究背景,干细胞,成骨分化,成脂分化,骨细胞,脂肪细胞,相互制约,seipin,研究背景,此消彼长,充质干细胞,成骨细胞,脂肪细胞,体外诱导培养,相关文献一,相关文献二,相关文献三,提出问题,间充质干细胞,前脂肪细胞,成熟脂肪细胞,骨细胞,成骨细胞,成脂分化,成骨分化,课题前期工作,1、检测Seipin基因敲除鼠的基因型，纯合子和野生型分组。2、Micro CT扫描Seipin基因敲除鼠胫骨近端干骺端，记录整理骨密度、骨小梁宽度。,数据,数据,研究目的及意义,目的：了解Seipin基因敲除后，小鼠骨量的变化。探究Seipin 基因与间充质干细胞成骨分化及成脂肪分化的关系。,意义：对于seipin的研究有助于更好地认识脂肪新生、脂滴的 动态调节以及脂肪代谢与骨代谢之间的关系，也将为脂 肪营养不良和肥胖等代谢性疾病的治疗提供新的思路。,研究对象及内容,研究对象：Seipin基因敲除鼠胫骨近端干骺端及长骨骨髓。研究内容：1.小鼠胫骨近端干骺端骨密度、骨小梁宽度。 2.小鼠骨髓间充质干细胞诱导成骨、成脂肪分 化，检测并对比纯合子、野生型分化情况。,实验方法,1.Seipin基因敲除鼠，采用组织消化法，行DNA PCR扩增， 并采用凝胶电泳鉴定小鼠基因型。随机选取纯合子10只 和野生型10只。30天体重约7g-15g。2.分别在小鼠30天、60天、90天行活体Micro CT扫描，分 析并记录各时间点胫骨近端干骺端骨密度和骨小梁宽度。,实验方法,3.取小鼠长骨骨髓，分离提纯骨髓间充质干细胞，利用流式 细胞术对表面抗原Sca-1、CD29、CD11b、CD45进行鉴定。 4.分别诱导其成骨分化和成脂肪分化，碱性磷酸酶染色、 茜素红染色、油红O染色观察并记录分化情况。,Seipin基因敲除鼠,基因型鉴定，分组,Micro CT扫描不同时间点（30天、60天、90天）活体小鼠骨密度和骨小梁宽度,取小鼠骨髓，分离提纯骨髓干细胞,骨髓干细胞成脂诱导分化，观察并记录分化情况,Seipin基因与干细胞成脂、成骨分化的关系,骨髓干细胞成骨诱导分化，观察并记录分化情况,流式检测免疫表型,技术路线图,取小鼠骨髓，全骨髓贴壁培养及消化控制法，分离提纯骨髓干细胞,骨髓干细胞成脂诱导分化，油红O染色，观察并记录分化情况,Seipin基因与干细胞成脂、成骨分化的关系,骨髓干细胞成骨诱导分化，碱性磷酸酶染色、茜素红染色，观察并记录分化情况,流式检测免疫表型Sca-1、CD29、CD11b、CD45,技术路线图,实验前的准备工作,1.查阅相关文献，撰写了综述。2.了解PCR，Micro CT，干细胞培养及诱导分化， 流式细胞检测等技术。,主要创新点,首次进行Seipin基因敲除鼠Micro CT扫描，检测Seipin基因敲除后，小鼠骨量的变化。探讨Seipin基因与间充质干细胞成骨分化及成脂肪分化的关系