槐花米黄酮苷元的提制和鉴定.docx

槐花米黄酮苷元的提制和鉴定 槐花米系豆科槐属植物Sophora japonica L.的花蕾。历来用作止血药物治疗痔疮、子宫出血、吐血、鼻血等症，其主要化学成分为芦丁（亦称芸香苷Rutin），含量可高达23.5%。药理证明芦丁有调节毛细血管渗透作用，临床上用作毛细血管性止血药，作为高血压症的辅助用药。芦丁广泛存在于植物中。现已发现含有芦丁的植物达70种以上。由槐米提取芦丁的方法有水或醇浸取法，热、冷碱浸取酸沉淀法，本实验采用碱提酸沉法提取芦丁。一、主要黄酮类成分的物理性质1芸香苷（Rutin）淡黄色针状结晶，熔点：含三分子结晶水物174178，无水物为188。溶解度： 溶剂 溶解度（%）注水MeOHEtOH吡啶冷0.00131.00.368.5热0.5511.23.5易溶不溶于乙醚、氯仿、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等溶剂。易溶于碱液中呈黄色，酸化后复析出。可溶于浓硫酸和浓盐酸呈棕黄色。加水稀释后又析出。2槲皮素（quercetin）黄色结晶。熔点：含两分子结晶水物3134。无水物316。溶解度：乙醇1：290，无水乙醇1：23（沸时）。可溶于MeOH、EtOH、冰HAc、吡啶、丙酮等溶剂。不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚。二、实验目的1通过实验了解碱提酸沉法的原理及方法。2了解黄酮类化合物的一般性质。3学习聚酰胺TLC法在黄酮类化合物中的应用。4掌握由黄酮苷水解制取黄酮类苷元的方法。三、实验原理1利用芦丁易溶于碱溶液，但是在酸溶液中易析出的性质进行提取。2黄酮苷可通过酸水解，得到苷元及糖，并可通过TLC、PC及乙酰化物制备进行鉴识。3不同类酮类化合物对紫外光有特定吸收，可利用此特点对其进行定性、定量测定。四、实验流程 槐米研碎加沸水和硼砂搅拌加热至微沸饱和石灰水调pH值8-9微沸30分钟，过滤药渣滤液（合并）60-70时浓盐酸调PH值4-5室温时冰箱沉淀12h抽滤滤液（弃去） 沉淀 洗至中性 干燥芦丁粗品 重结晶精制芦丁五、实验方法1芦丁的提取称取槐花米120g（分3次分别进行提取），研碎后置500ml烧杯中，加十倍沸水和适量硼砂搅拌，于石棉网上加热至微沸，用饱和石灰水（用药匙取适量生石灰放入烧杯，并加入蒸馏水溶解得到悬浊液，抽滤得到澄清滤液即为饱和石灰水），溶液调PH值8-9之间，并不断搅拌。微沸30分钟后，过滤并收集滤液。以同法再次收集滤液合并，浓缩至约300ml，滤液温度降至6070之间以浓盐酸酸化至PH45之间，室温时放入冰箱12h，使沉淀完全。抽滤，沉淀用蒸馏水洗至中性，得粗品芦丁。2 芦丁的精制上述沉淀称重后加入3040倍量的热水溶解，趁热过滤，放冷析出结晶、过滤、结晶自然干燥（或在红外灯下干燥），得芦丁精品。再取芦丁水精制品用MeOH重结晶（1：1015）得芦丁精品。3. 芦丁的鉴定芦丁水解法：取1g 精制芦丁，加入80mL 0.5%稀硫酸，加热回流水解1h，冷却，过滤，沉淀用蒸馏水冲洗至中性。把沉淀加入到95%乙醇中，加热使完全溶解，趁热抽滤。滤液加入等量蒸馏水重结晶，过滤，得槲皮素和芦丁水解液。参考文献可知：由芦丁水解生产槲皮素，在水溶液中比在甲醇溶液中收率高，生产成本较低；使用盐酸或者硫酸收率几乎不变；酸的浓度为0.5%，加热1h，即可水解完全，收率为91.0%。3.1 化学法鉴定本品为黄色结晶粉末，熔程为188190(梯勒熔点管法)，盐酸镁粉反应呈阳性；氨性氯化锶反应呈阳性显示有邻二酚羟基；锆盐枸橼酸反应呈阳性显示有3及5一羟基存在。水解液用薄层层析鉴定，显示有葡萄糖及鼠李糖存在。薄层层析鉴定用3 cmX 5 cm的聚酰胺膜，选3种展开剂：分别为A，丙酮：水(3：1)；B，氯仿：甲醇(5：4)；C，醋酸乙酯：甲酸：水(8：1：1)。氨熏后喷显色剂3的三氯化铝显色，经重结晶的芦丁样品在上述3种展开剂中均只显一个斑点。4芦丁，槲皮素的聚酰胺层析样品：1%芦丁，槲皮素甲醇液展开剂：80%乙醇显色方法：用浓氨水或1%AlCl3醇溶液显色后，日光及荧光灯下观察。5芦丁的定性反应A. 样品制备：取芦丁精制品少许用MeOH溶解。B. 定性试验：取上述试液1ml于小试管中，按下列方法进行试验。观察反应情况。Molish反应加10% 萘酚溶液1ml，振摇后斜置试管。沿管壁滴加0.5ml浓H2SO4静置观察液面交界处颜色变化。盐酸锌粉（Mg粉）芦丁于支试管中加浓HCl，再加入Mg粉和锌粉，观察颜色变化。FeCl3反应加FeCl3醇溶液12滴，观察颜色。Mg(Ac)2纸片反应取两张滤纸条，分别滴2滴芦丁，然后各加1% Mg(Ac)2甲醇溶液2滴。于紫外灯下观察荧光变化。AlCl3纸片反应1条纸片上滴加芦丁后，加1% AlCl3乙醇溶液2滴，紫外灯下观察荧光变化。锆盐柠檬酸反应加入2%ZrOCl2甲醇溶液34滴，观察颜色，然后加入2%柠檬酸甲椁溶液34滴，观察颜色。六、思考题1为什么必须热水提取？水提取多用煎煮法而不用回流提取法，为什么？2一般提取液需经适当浓缩才可析出结晶，为什么芦丁未经浓缩就析出结晶？3一般需经分离净化才能得到化合物粗品，为什么芦丁未经这些处理就得到了粗品？4酸水解常用什么酸，为什么用H2SO4比用HCl水解后处理更方便。5为什么定性反应有的在试管中做，有的在纸片上做。6当反应试剂组成是2个以上时，常需考虑