蔗糖╱D-葡萄糖测定试剂盒.doc

BOEHRINGER MANNHEIM r-biopharm蔗糖/D-葡萄糖测定试剂盒(酶学方法)Cat. No.:E0139 041规格:40次检测1. 紫外分光光度检测:用于检测食品中的蔗糖、D-葡萄糖，例如：啤酒、一般的饮料（软饮料和柠檬汁）、面包类食品、糖果类产品、巧克力、咖啡、乳制品（例甜点、加糖浓缩牛奶）、蛋类、水果和蔬菜（例马铃薯）及相关产品（果汁、果酱）、蜂蜜、冰淇淋、肉类产品（肉汤、酱油、香肠、汤）、芥末、胡椒、茶品及所有含“糖”食品。也可用于动物饲料、纸、药品、烟草、动物样品的相关检测。2被检测物：植物新陈代谢中蔗糖占有重要位置,从青篱竹和甜菜根中进行分离具有巨大的经济意义。当蔗糖被水解或转化时,会形成D-葡萄糖和D-果糖。蔗糖是食品的重要成分,它不仅具有经济价值,且是重要的增甜剂。在动植物界中D-葡萄糖广泛存在。它是碳水化合物新陈代谢的必要组分且常以游离形式同D-果糖和蔗糖共存。但更重要的存在形式是二-,三-,寡-和多糖(乳糖、麦芽糖、蔗糖；棉籽糖；糊精；淀粉；纤维素)。3原 理：蔗糖H2O-果糖苷酶D葡萄糖D果糖XD葡萄糖ATPHKG-6-P+ADPXG-6-P+NADP+G-6P-DHD-葡萄糖酸盐-6-P+NADPH+H+X4特异性：-果糖苷酶水解蔗糖及其它寡糖苷中的-果糖苷键：若样品只含有蔗糖，可特异性检测D-葡萄糖。若酶水解后D-葡萄糖和D-果糖被检出且这些单糖的比例为1：1，那么即使有果聚糖存在，也能特异性检出蔗糖。如果D-果糖比例大，那么样品中存在2-果聚糖。“多聚果糖”（例菊糖）没有被水解。D-葡萄糖的检测是特异性的。5灵敏度及检测限：检测D-葡萄糖灵敏度为0.005个吸光单位,样品体积为V=2.000ml。若在340nm下检测，此时的D葡萄糖浓度为0.2mg/l样品溶液。0.4mg/l的检测限是由0.010(340nm)的光吸收区分度而来,最大样品体积为2.000ml。在测定蔗糖（样品溶液中存在D-葡萄糖）时，灵敏度是0.010个光吸收单位，样品体积V=1.800ml。若在340nm下检测，此时的蔗糖浓度为1mg/l样品溶液。2mg/l的检测限是由0.020(340nm)的光吸收区分度而来,最大样品体积为1.800ml。6线 性检测线范围从4ug蔗糖D葡萄糖/检测（2mg蔗糖D葡萄糖/l样品溶液; V=1.800ml）到150ug 蔗糖D葡萄糖/检测（1.5g蔗糖D葡萄糖/l样品溶液；V0.100ml）。7精 度：检测D葡萄糖中用一个样品溶液进行重复时，可能会产生0.0050.010个吸光单位的差异。检测蔗糖中（样品溶液中存在D葡萄糖）用一个样品溶液进行重复时，可能会产生0.0100.015个吸光单位的差异。在测量范围内相对标准偏差（变化系数）约为13。猪肉肠分析（参考2.6）：蔗 糖： x=1g/100gr=0.079g/100g; s(r)=?0.028g/100gR=0.086g/100g; s(R)=?0.030g/100gD葡萄糖： x=0.5g/100gr=0.031g/100g; s(r)=?0.011g/100g R=0.032g/100g; s(R)=0.011g/100g果汁中蔗糖（参考2.6）：r=1.9+0.033?(C蔗糖g/l)g/l R=3.3+0.061? (C蔗糖g/l)g/l苹果汁中蔗糖： r=1.9g/l; R=3.2g/l黑葡萄酒：r=3.2g/l; R=5.6g/l杏 乳：r=3.9g/l; R=6.9g/l（改进样品制备后） r=0.4g/l; R=0.9g/lUHT-可可饮料/冰淇淋:蔗 糖：x=15g/100g ； r=0.13g/100g； R=0.08g/100gx=约15g/100g； r=0.40g/100g； R=0.28g/100gD葡萄糖： x=0.10.5g/100g r=0.06g/100g; R=0.06g/100g8试剂盒内容物：. 1.三乙醇胺缓冲液，PH约7.6；NADP,约110mg; ATP约260mg。2.HK（己糖激酶），约320U； G-6P-DH(葡萄糖6磷酸脱氢酶)，约160U。3.柠檬酸缓冲液， PH约4.6；果糖苷酶，约720U。4.检测质控用蔗糖标准样（对计算结果而言，标准样的测定不是必须的）。5.检测质控用D葡萄糖标准样（对计算结果而言，标准样的测定不是必须的）。9. 试 剂：蔗糖、D葡萄糖检测中使用的试剂对人无毒害，但仍要遵守所有化学试剂都要遵守的一般安全规则。使用过的试剂放入实验室垃圾桶，如有需要在保留。10. 样品制备：1).直接或稀释使用清亮无色中性液体样品，D葡萄糖中体积可达2.000ml，蔗糖中体积可达1.800ml。2).过滤混浊溶液。3).将含有CO2的样品除气（通过过滤）。4).通过加氢氧化钾或氢氧化钠将酸性样品的PH值调至8.0。5).调整酸性浅色样品的PH值至8.0，孵育约15分钟。6).用空白样品做对照测定有色样品（如有必要调整PH值至8.0）。7).用PVPP(聚乙烯吡咯烷酮)或聚酰胺处理深色未经稀释或体积更大的样品。8).压碎或搅匀固体或半固体